| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-42页 |
| 1.1 植物病毒在韧皮部中进行长距离运动 | 第13-18页 |
| 1.1.1 病毒长距离运动的形式 | 第14-15页 |
| 1.1.2 与病毒长距离运动相关的病毒编码蛋白以及寄主蛋白 | 第15-18页 |
| 1.2 Polerovirus通读蛋白研究进展 | 第18-27页 |
| 1.2.1 马铃薯卷叶病毒属病毒研究概述 | 第18-19页 |
| 1.2.2 通读蛋白研究进展 | 第19-27页 |
| 1.3 哺乳动物中的抗病毒RNA干扰 | 第27-40页 |
| 1.3.1 RNA干扰 | 第27-34页 |
| 1.3.2 RNAi在哺乳动物抗病毒中的作用 | 第34-38页 |
| 1.3.3 哺乳动物及人类病毒编码的VSR | 第38-40页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第40-42页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第42-63页 |
| 2.1 实验材料 | 第42-44页 |
| 2.1.1 菌种 | 第42页 |
| 2.1.2 载体 | 第42页 |
| 2.1.3 病毒及抗血清 | 第42页 |
| 2.1.4 植物材料及培养 | 第42-43页 |
| 2.1.5 动物材料及培养 | 第43页 |
| 2.1.6 酶、化学试剂和耗材 | 第43-44页 |
| 2.1.7 构建克隆所用引物和测序 | 第44页 |
| 2.2 实验试剂的配制 | 第44-49页 |
| 2.2.1 常用试剂与培养基配制 | 第44-45页 |
| 2.2.2 具体实验试剂配制 | 第45-49页 |
| 2.3 实验方法 | 第49-63页 |
| 2.3.1 高温高压灭菌 | 第49页 |
| 2.3.2 重组克隆构建 | 第49-51页 |
| 2.3.3 His融合蛋白的原核表达与纯化 | 第51-52页 |
| 2.3.4 BrYV农杆菌浸润接种及检测 | 第52-55页 |
| 2.3.5 BrYV RTD互作蛋白筛选及互作验证 | 第55-58页 |
| 2.3.5.1 酵母文库扩繁 | 第55-56页 |
| 2.3.5.2 酵母cDNA文库筛选（共转化法） | 第56-57页 |
| 2.3.5.3 酵母双杂交实验 | 第57页 |
| 2.3.5.4 农杆菌浸润介导的瞬时表达 | 第57页 |
| 2.3.5.5 激光共聚焦微镜观察 | 第57-58页 |
| 2.3.6 NoV感染及相关检测 | 第58-60页 |
| 2.3.7 IAV感染及相关检测 | 第60-63页 |
| 第三章 BrYV PO、CP及RTD原核表达纯化及抗血清制备 | 第63-67页 |
| 3.1 BrYV PO、CP及RTD的原核表达纯化及抗血清制备 | 第63-65页 |
| 3.2 BrYV PO、CP及RTD抗血清效价检测 | 第65-66页 |
| 3.3 小结与讨论 | 第66-67页 |
| 第四章 BrYV侵染性克隆构建及侵染性检测 | 第67-76页 |
| 4.1 BrYV全长cDNA克隆的构建及侵染性检测 | 第67-69页 |
| 4.1.1 BrYV全长cDNA克隆构建 | 第67-68页 |
| 4.1.2 BrYV全长cDNA克隆在本生烟上的侵染性检测 | 第68-69页 |
| 4.2 BrYV全长cDNA克隆突变体的构建及侵染性检测 | 第69-72页 |
| 4.2.1 BrYV两种基因型人工重组突变体构建及侵染性检测 | 第69-70页 |
| 4.2.2 BrYV RTD缺失突变体构建及侵染性检测 | 第70-72页 |
| 4.3 小结与讨论 | 第72-76页 |
| 4.3.1 BrYV生物学特性 | 第72-74页 |
| 4.3.2 影响全长cDNA克隆侵染的因素 | 第74-76页 |
| 第五章 BrYV RTD互作植物蛋白筛选及其功能初步探索 | 第76-89页 |
| 5.1 利用酵母双杂交筛选与BrYV通读区域互作的植物蛋白 | 第76-79页 |
| 5.1.1 RTD载体构建 | 第76-77页 |
| 5.1.2 拟南芥文库质粒扩繁 | 第77页 |
| 5.1.3 筛选与BrYV RTD互作的拟南芥蛋白 | 第77-79页 |
| 5.2 BrYV RTD与全长AtSAMS4互作检测 | 第79-82页 |
| 5.2.1 AtSAMS4克隆及与RTD互作检测相关载体构建 | 第79-80页 |
| 5.2.2 AtSAMS4与BrYV RTD在本生烟中的亚细胞定位 | 第80-81页 |
| 5.2.3 AtSAMS4与BrYV RTD相互作用检测 | 第81-82页 |
| 5.3 初步探索NbSAMS表达水平与BrYV系统侵染的相互关系 | 第82-84页 |
| 5.3.1 克隆NbSAMS | 第83页 |
| 5.3.2 BrYV复制及系统侵染对NbSAMS mRNA表达水平的影响 | 第83-84页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第84-89页 |
| 5.4.1 与RTD互作的植物蛋白相关研究 | 第84-87页 |
| 5.4.2 与RTD互作的病毒编码蛋白相关研究 | 第87-88页 |
| 5.4.3 对RTD翻译后修饰的预测 | 第88-89页 |
| 第六章 哺乳动物病毒siRNA特征分析及分析方法的建立 | 第89-114页 |
| 6.1 NoV感染小鼠乳鼠产生的vsiRNA特征分析及分析方法的建立 | 第89-96页 |
| 6.1.1 NoV感染小鼠乳鼠产生的小RNAs特征 | 第90-92页 |
| 6.1.2 与AGO结合的NoV感染小鼠乳鼠产生的vsRNAs特征分析 | 第92-93页 |
| 6.1.3 与B2结合的NoV感染小鼠乳鼠产生的小RNA特征分析 | 第93-94页 |
| 6.1.4 NoVΔB2感染小鼠乳鼠不同时间周期的病毒积累量及vsiRNA的特征变化 | 第94-96页 |
| 6.2 甲型流感病毒感染人源细胞产生的小RNA特征分析 | 第96-108页 |
| 6.2.1 PR8感染人源及哺乳动物细胞产生的小RNA检测及特征分析 | 第96-98页 |
| 6.2.2 与AGO结合的PR8感染人源细胞产生的小RNA的特征分析 | 第98-102页 |
| 6.2.3 WSN感染人源细胞产生的小RNA检测及特征分析 | 第102-108页 |
| 6.3 小结与讨论 | 第108-114页 |
| 6.3.1 利用不表达VSR的突变体病毒结合AGO-IP及高通量测序的方法检测哺乳动物病毒产生的vsiRNA | 第109页 |
| 6.3.2 NoV编码B2蛋白的沉默抑制机制分析 | 第109-110页 |
| 6.3.3 哺乳动物抗病毒RNAi反应与抗病毒免疫反应相互关系的初步讨论 | 第110-114页 |
| 第七章 结论与展望 | 第114-115页 |
| 7.1 结论 | 第114页 |
| 7.2 展望 | 第114-115页 |
| 参考文献 | 第115-132页 |
| 附录 | 第132-140页 |
| 附录-Ⅰ瓜类温和花叶病毒外壳蛋白小亚基抗血清制备及与该属其他病毒血清学关系研究 | 第132-137页 |
| 附录-Ⅱ 引物列表 | 第137-138页 |
| 附录-Ⅲ 本生烟SAMS mRNA序列(1173 nt) | 第138-139页 |
| 附录-Ⅳ 小RNA测序分析参考序列 | 第139-140页 |
| 致谢 | 第140-142页 |
| 个人简介 | 第142页 |
