| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-42页 |
| 1.1 猪链球菌的简介 | 第12-20页 |
| 1.1.1 猪链球菌的概述 | 第12-13页 |
| 1.1.2 猪链球菌的流行病学特性 | 第13页 |
| 1.1.3 猪链球菌感染人的临床症状 | 第13-15页 |
| 1.1.4 毒力因子与感染的发病机制 | 第15-18页 |
| 1.1.5 链球菌的病理学主要特征—炎症反应 | 第18-20页 |
| 1.2 猪链球菌2型SntA蛋白的简介 | 第20页 |
| 1.3 猪链球菌2型与宿主间相互作用的意义 | 第20-24页 |
| 1.3.1 中性粒细胞 | 第21页 |
| 1.3.2 巨噬细胞／单核细胞 | 第21-22页 |
| 1.3.3 上皮细胞 | 第22-23页 |
| 1.3.4 脉络丛上皮细胞 | 第23页 |
| 1.3.5 血管内皮细胞 | 第23-24页 |
| 1.3.6 其他 | 第24页 |
| 1.4 革兰氏阳性病原菌对血红素的利用 | 第24-38页 |
| 1.4.1 血红素为Fe在体内的主要存在形式 | 第24页 |
| 1.4.2 革兰氏阳性病原菌中的血红素内稳态 | 第24-26页 |
| 1.4.3 细菌表面获取宿主血红素的结构 | 第26-30页 |
| 1.4.4 血红素结合区域：NEAT结构域 | 第30-31页 |
| 1.4.5 铁在血红素降解过程中的释放 | 第31-33页 |
| 1.4.6 革兰氏阳性病原菌中在血红素获取过程中起到重要作用的相关蛋白 | 第33-34页 |
| 1.4.7 协同作用：对血红素摄取的调控 | 第34-38页 |
| 1.5 血红蛋白、高铁血红蛋白与败血症之间的联系 | 第38-42页 |
| 1.5.1 血红蛋白的功能 | 第38页 |
| 1.5.2 高铁血红蛋白在炎症反应中所扮演的角色 | 第38-40页 |
| 1.5.3 败血症的发生状况 | 第40-41页 |
| 1.5.4 败血症的病理生理学 | 第41-42页 |
| 2 研究的目的与意义 | 第42-43页 |
| 3 材料与方法 | 第43-55页 |
| 3.1 材料 | 第43-48页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第43页 |
| 3.1.2 PCR引物 | 第43页 |
| 3.1.3 培养基、抗生素配制 | 第43-45页 |
| 3.1.4 主要试剂来源 | 第45-46页 |
| 3.1.5 琼脂糖凝胶电泳相关溶液 | 第46页 |
| 3.1.6 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)缓冲液 | 第46页 |
| 3.1.7 Westen-blot相关溶液 | 第46-47页 |
| 3.1.8 蛋白纯化与Pull-down相关试剂 | 第47页 |
| 3.1.9 Methemoglobin measurement相关试剂 | 第47-48页 |
| 3.2 方法 | 第48-55页 |
| 3.2.1 细菌基因组的提取 | 第48页 |
| 3.2.2 猪组织RNA的提取以及cDNA的制备 | 第48页 |
| 3.2.3 基因的克隆 | 第48页 |
| 3.2.4 蛋白的表达纯化 | 第48-50页 |
| 3.2.5 holo-SntA的制备 | 第50页 |
| 3.2.6 Heme含量的测定 | 第50页 |
| 3.2.7 ICP-MS法检测Fe元素含量 | 第50-51页 |
| 3.2.8 蛋白与小分子互作的荧光光谱检测 | 第51页 |
| 3.2.9 体外蛋白质相互作用的Pull-down验证 | 第51页 |
| 3.2.10 高铁血红蛋白检测法 | 第51-52页 |
| 3.2.11 猪链球菌2型SC-19::sntA突变体菌株的构建 | 第52-53页 |
| 3.2.12 SC-19与SC-19::sntA菌株在不同的培养基中的生长 | 第53页 |
| 3.2.13 动物试验 | 第53-55页 |
| 4 结果与分析 | 第55-74页 |
| 4.1 SntA蛋白质结构中包含有一个heme小分子 | 第55-63页 |
| 4.1.1 SntA的生色基团 | 第55-56页 |
| 4.1.2 Pyridine hemochrome法检测heme的存在 | 第56-57页 |
| 4.1.3 ICP-MS检测SntA中Fe元素的含量 | 第57页 |
| 4.1.4 荧光光谱法检测SntA与heme的结合以及结合常数 | 第57-61页 |
| 4.1.5 SntA蛋白参与了细菌获取血红素的过程 | 第61-63页 |
| 4.2 SntA与AOP2互作Pull-down的体外验证 | 第63-64页 |
| 4.3 荧光光谱法检测AOP2与heme的结合以及结合常数 | 第64-67页 |
| 4.4 SntA通过与AOP2蛋白的结合加速血红蛋白向高铁血红蛋白的转变 | 第67-70页 |
| 4.5 SntA蛋白参与对宿主的致病过程 | 第70-74页 |
| 5 讨论 | 第74-79页 |
| 5.1 SntA的功能 | 第74-76页 |
| 5.1.1 SntA蛋白的结构与功能 | 第74页 |
| 5.1.2 不同细菌中SntA蛋白氨基酸序列的同源性比较 | 第74页 |
| 5.1.3 SntA是一个新的heme结合蛋白 | 第74-76页 |
| 5.2 SC-19与SC-19::sntA突变体对heme利用的差别 | 第76页 |
| 5.3 SntA与AOP2互作参与了猪链球菌导致血液紊乱的致病过程 | 第76-78页 |
| 5.3.1 AOP2功能 | 第76-77页 |
| 5.3.2 SntA与AOP2互作引发血红蛋白加速向高铁血红蛋白转变 | 第77-78页 |
| 5.4 SntA是一个新的链球菌2型的毒力相关因子 | 第78-79页 |
| 结论与展望 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-103页 |
| 在读期间研究成果 | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
