| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-20页 |
| 1.1 松材线虫病 | 第10页 |
| 1.2 松材线虫基础生物学研究进展 | 第10-11页 |
| 1.3 线虫发育生物学研究进展 | 第11-13页 |
| 1.4 线虫神经生物学研究进展 | 第13-14页 |
| 1.5 线虫光遗传学研究进展 | 第14-15页 |
| 1.6 秀丽隐杆线虫madd-4基因研究进展 | 第15-20页 |
| 2 实验材料与方法 | 第20-47页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 供试线虫 | 第20页 |
| 2.1.2 供试菌株 | 第20页 |
| 2.1.3 实验所需试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.4 实验所用试剂盒 | 第21页 |
| 2.1.5 实验所用培养基 | 第21-22页 |
| 2.1.6 实验所用仪器设备 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-47页 |
| 2.2.1 供试线虫的培养 | 第22-23页 |
| 2.2.1.1 供试松材线虫的培养 | 第22-23页 |
| 2.2.1.2 供试秀丽隐杆线虫的培养 | 第23页 |
| 2.2.2 供试线虫的分离 | 第23页 |
| 2.2.3 同步发育线虫的获得 | 第23-26页 |
| 2.2.3.1 同步发育松材线虫的获得 | 第23-24页 |
| 2.2.3.2 同步发育秀丽隐杆线虫的获得 | 第24-26页 |
| 2.2.4 松材线虫madd-4基因编码区的克隆 | 第26-32页 |
| 2.2.4.1 松材线虫总RNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.4.2 松材线虫总cDNA的制备 | 第27-28页 |
| 2.2.4.3 松材线虫madd-4基因编码区片段的获取 | 第28-30页 |
| 2.2.4.4 松材线虫madd-4基因编码区质粒载体的构建 | 第30-32页 |
| 2.2.5 松材线虫madd-4基因在mRNA水平上的定位表达 | 第32-39页 |
| 2.2.5.1 ssRNA探针的制备 | 第32-33页 |
| 2.2.5.2 松材线虫同步发育胚胎的原位杂交 | 第33-36页 |
| 2.2.5.3 松材线虫同步发育龄期虫的原位杂交 | 第36-39页 |
| 2.2.6 松材线虫 madd-4 基因在蛋白水平上的表达定位 | 第39-43页 |
| 2.2.6.1 松材线虫基因组DNA的提取 | 第39-40页 |
| 2.2.6.2 松材线虫madd-4基因启动子片段的获取 | 第40-41页 |
| 2.2.6.3 松材线虫madd-4基因启动子质粒载体的构建 | 第41-42页 |
| 2.2.6.4 松材线虫madd-4基因启动子质粒载体的显微注射 | 第42-43页 |
| 2.2.7 madd-4基因在松材线虫胚胎期的功能验证 | 第43-47页 |
| 2.2.7.1 松材线虫madd-4基因dsRNA探针的制备 | 第43-44页 |
| 2.2.7.2 松材线虫同步发育胚胎的浸泡干扰 | 第44-47页 |
| 3 实验结果与分析 | 第47-80页 |
| 3.1 松材线虫madd-4基因生物信息学分析 | 第47-49页 |
| 3.2 松材线虫madd-4基因克隆结果 | 第49-53页 |
| 3.2.1 松材线虫总RNA提取结果 | 第49-50页 |
| 3.2.2 松材线虫总cDNA制备结果 | 第50页 |
| 3.2.3 松材线虫madd-4基因编码区片段获取结果 | 第50-52页 |
| 3.2.4 松材线虫madd-4基因编码区质粒载体构建结果 | 第52-53页 |
| 3.2.4.1 松材线虫madd-4基因编码区重组质粒筛选结果 | 第52页 |
| 3.2.4.2 松材线虫madd-4基因编码区重组质粒提取结果 | 第52-53页 |
| 3.3 松材线虫madd-4基因表达特性研究结果 | 第53-69页 |
| 3.3.1 松材线虫madd-4基因mRNA水平时空动态表达 | 第53-59页 |
| 3.3.1.1 松材线虫madd-4基因编码区重组质粒插入方向鉴定 | 第53-54页 |
| 3.3.1.2 松材线虫madd-4基因ssRNA探针模板制备 | 第54页 |
| 3.3.1.3 松材线虫madd-4基因ssRNA探针制备 | 第54-55页 |
| 3.3.1.4 松材线虫madd-4基因同步发育胚胎原位杂交 | 第55-56页 |
| 3.3.1.5 松材线虫madd-4基因同步龄期虫原位杂交 | 第56-59页 |
| 3.3.2 松材线虫madd-4基因蛋白水平时空动态表达 | 第59-69页 |
| 3.3.2.1 松材线虫基因组DNA提取 | 第59-60页 |
| 3.3.2.2 松材线虫madd-4基因启动子片段获取 | 第60-61页 |
| 3.3.2.3 松材线虫madd-4基因启动子重组质粒载体片段获取 | 第61-62页 |
| 3.3.2.4 松材线虫madd-4基因启动子重组质粒筛选 | 第62-63页 |
| 3.3.2.5 松材线虫madd-4基因启动子重组质粒提取 | 第63页 |
| 3.3.2.6 松材线虫madd-4基因在秀丽隐杆线虫体内的时空动态表达 | 第63-69页 |
| 3.4 松材线虫madd-4基因胚胎期功能验证研究结果 | 第69-80页 |
| 3.4.1 松材线虫madd-4基因dsRNA探针模板制备结果 | 第69-70页 |
| 3.4.2 松材线虫madd-4基因dsRNA探针制备结果 | 第70-71页 |
| 3.4.3 松材线虫madd-4-shared基因同步胚胎浸泡干扰结果 | 第71-75页 |
| 3.4.4 松材线虫madd-4-long基因同步胚胎浸泡干扰结果 | 第75-80页 |
| 4 讨论 | 第80-85页 |
| 4.1 松材线虫madd-4基因的表达特性 | 第80-82页 |
| 4.2 松材线虫madd-4基因的功能作用 | 第82-85页 |
| 5 结论与展望 | 第85-86页 |
| 5.1 结论 | 第85页 |
| 5.2 展望 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-92页 |
| 个人简介 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93页 |
