| 个人简历 | 第3-12页 |
| 中文摘要 | 第12-16页 |
| ABSTRACT | 第16-20页 |
| 第一章 卵巢癌多药耐药中信号通路关键基因的筛选及其与临床预后的分析 | 第21-74页 |
| 前言 | 第21-22页 |
| 1 材料与方法 | 第22-37页 |
| 1.1 数据来源与分析方法 | 第22-23页 |
| 1.1.1 基因检索 | 第22-23页 |
| 1.1.2 表达谱芯片数据集的获取 | 第23页 |
| 1.1.3 芯片中差异表达基因的数据纳入标准 | 第23页 |
| 1.1.4 生物信息学分析 | 第23页 |
| 1.2 卵巢癌与裸鼠成瘤组织标本来源 | 第23-26页 |
| 1.2.1 临床组织样本的收集 | 第23-25页 |
| 1.2.2 诊断标准 | 第25页 |
| 1.2.3 随访及疗效判断 | 第25页 |
| 1.2.4 裸鼠卵巢癌移植瘤来源 | 第25-26页 |
| 1.3 实验仪器设备 | 第26-27页 |
| 1.4 试剂及材料 | 第27-29页 |
| 1.4.1 引物设计 | 第28页 |
| 1.4.2 主要抗体及来源 | 第28-29页 |
| 1.5 实验方法 | 第29-36页 |
| 1.5.1 组织标本RNA的提取与逆转录为c DNA | 第29-31页 |
| 1.5.2 实时荧光定量PCR（QRT-PCR） | 第31-32页 |
| 1.5.3 免疫组织化学法 | 第32-33页 |
| 1.5.4 Western Blot验证蛋白表达 | 第33-36页 |
| 1.6 整理数据 | 第36-37页 |
| 1.6.1 QRT-PCR结果整理 | 第36页 |
| 1.6.2 免疫组化结果整理 | 第36-37页 |
| 1.6.3 Western Blot结果整理 | 第37页 |
| 1.7 统计学分析 | 第37页 |
| 2.结果 | 第37-68页 |
| 2.1 文本挖掘的综合分析 | 第37-39页 |
| 2.2 GEO芯片数据 | 第39-42页 |
| 2.2.1 符合纳入条件的芯片数据集 | 第39-40页 |
| 2.2.2 生物学信号通路富集 | 第40-42页 |
| 2.3 前期研究及其参与信号通路富集 | 第42-45页 |
| 2.3.1 FN1参与信号传导通路 | 第43-44页 |
| 2.3.2 SERPINA1参与信号通路 | 第44页 |
| 2.3.3 ORM1参与信号通路 | 第44-45页 |
| 2.4 综合筛选可能参与卵巢癌耐药的信号通路关键基因 | 第45-49页 |
| 2.5 QRT-PCR分析9个信号通路调控基因与卵巢癌耐药的关系 | 第49-54页 |
| 2.5.1 9 个信号通路调控基因QRT-PCR溶解曲线 | 第49-51页 |
| 2.5.2 9 个信号通路调控基因QRT-PCR扩增曲线 | 第51-52页 |
| 2.5.3 9 个信号通路调控基因QRT-PCR m RNA结果分析 | 第52-54页 |
| 2.6 免疫组化分析RDX、SDC2、ITGA5、FN1与卵巢癌临床预后的关系 | 第54-61页 |
| 2.6.1 RDX、SDC2、ITGA5、FN1蛋白在敏感、耐药卵巢癌组织中的表达 | 第54-56页 |
| 2.6.2 卵巢癌组织中RDX、SDC2、ITGA5、FN1蛋白的表达与临床病理的关系 | 第56-57页 |
| 2.6.3 卵巢癌组织中RDX、SDC2、ITGA5、FN1蛋白的表达与残留病灶、淋巴结转移、腹腔转移的关系 | 第57-58页 |
| 2.6.4 卵巢癌组织中RDX、SDC2、ITGA5、FN1蛋白的表达与预后的关系 | 第58-61页 |
| 2.7 QRT-PCR检测分次顺铂干预后的裸鼠移植瘤组织中RDX、SDC2、ITGA5和FN1基因m RNA的相对表达量 | 第61-65页 |
| 2.7.1 顺铂干预后的裸鼠移植瘤组织中RDX基因m RNA的相对表达量 | 第61-62页 |
| 2.7.2 顺铂干预后的裸鼠移植瘤组织中SDC2基因m RNA的相对表达量 | 第62-63页 |
| 2.7.3 顺铂干预后的裸鼠移植瘤组织中ITGA5基因m RNA的相对表达量 | 第63-64页 |
| 2.7.4 顺铂干预后的裸鼠移植瘤组织中FN1基因m RNA的相对表达量 | 第64-65页 |
| 2.8 Western Blot检测RDX、ITGA5蛋白在分次顺铂干预后的裸鼠移植瘤组织中的蛋白表达量 | 第65-68页 |
| 2.8.1 BCA法测定组织蛋白样品浓度 | 第65-66页 |
| 2.8.2 Western Blot检测RDX基因在分次顺铂干预后的裸鼠移植瘤组织中的蛋白表达量 | 第66-67页 |
| 2.8.3 Western Blot检测ITGA5基因在分次顺铂干预后的裸鼠移植瘤组织中的蛋白表达量 | 第67-68页 |
| 3.讨论 | 第68-74页 |
| 3.1 肿瘤干细胞与卵巢癌多药耐药 | 第69页 |
| 3.2 肿瘤干细胞参与卵巢癌多药耐药调控的相关信号传导通路 | 第69-70页 |
| 3.3 潜在的卵巢癌多药耐药调控信号通路节点基因 | 第70-74页 |
| 第二章 RDX、ITGA5对卵巢癌SKOV3-GFP/DDPⅡ细胞多药耐药的生物功能研究 | 第74-110页 |
| 前言 | 第74页 |
| 1.材料与方法 | 第74-91页 |
| 1.1 细胞来源 | 第74页 |
| 1.2 试剂和仪器 | 第74-76页 |
| 1.2.1 试剂及耗材 | 第74-75页 |
| 1.2.2 仪器及设备 | 第75-76页 |
| 1.3 RDX、ITGA5慢病毒干扰载体的构建和包装 | 第76-82页 |
| 1.3.1 细胞分组 | 第76-77页 |
| 1.3.2 siRNA-RDX、siRNA-ITGA5慢病毒载体构建 | 第77-78页 |
| 1.3.3 siRNA-RDX靶点设计及慢病毒载体构建 | 第78-80页 |
| 1.3.4 siRNA-ITGA5靶点设计及慢病毒载体构建 | 第80-82页 |
| 1.3.5 siRNA-RDX、siRNA-ITGA5慢病毒名称及病毒滴度 | 第82页 |
| 1.4 筛选转染效率高的RDX、ITGA5慢病毒干扰载体 | 第82-84页 |
| 1.5 检验siRNA-RDX、siRNA-ITGA5各三个慢病毒感染效率 | 第84页 |
| 1.6 SKOV3-GFP/DDPⅡ细胞正式感染 | 第84-85页 |
| 1.7 CCK8法检测细胞的顺铂半抑制浓度（IC50） | 第85-86页 |
| 1.8 CCK8法检测细胞生长曲线 | 第86-87页 |
| 1.9 流式细胞术检测细胞周期 | 第87-89页 |
| 1.9.1 实验原理 | 第87-88页 |
| 1.9.2 给药浓度的确定 | 第88页 |
| 1.9.3 具体实验步骤 | 第88-89页 |
| 1.10 Transwell法检测细胞侵袭、迁移能力 | 第89-91页 |
| 1.10.1 细胞侵袭实验 ( Matrigel Invasion Assay) | 第89-90页 |
| 1.10.2 细胞迁移能力测定（Transwell Migration Assays） | 第90-91页 |
| 1.11 统计分析 | 第91页 |
| 2.结果 | 第91-106页 |
| 2.1 转染RDX、ITGA5干扰慢病毒 | 第91-92页 |
| 2.2 转染siRNA-RDX、siRNA-ITGA5、阴性病毒后SKOV3-GFP/DDPⅡ细胞中RDX、ITGA5表达水平分析 | 第92-95页 |
| 2.2.1 q RT-PCR方法筛选慢病毒干扰载体 | 第92-93页 |
| 2.2.2 Western blot方法筛选慢病毒干扰载体 | 第93-95页 |
| 2.3 CCK8法检测siRNA-RDX、siRNA-ITGA5、阴性病毒感染后SKOV3-GFP/DDPⅡ细胞IC50 | 第95-97页 |
| 2.3.1 siRNA-RDX、阴性病毒感染后SKOV3-GFP/DDPⅡ细胞IC50 | 第95-96页 |
| 2.3.2 siRNA-ITGA5、阴性病毒感染后SKOV3-GFP/DDPⅡ细胞IC50 | 第96-97页 |
| 2.4 CCK8法检测siRNA-RDX、siRNA-ITGA5、阴性病毒感染后SKOV3-GFP/DDPⅡ细胞的增殖情况 | 第97-99页 |
| 2.4.1 siRNA-RDX感染后SKOV3-GFP/DDPⅡ细胞的增殖情况 | 第97-98页 |
| 2.4.2 siRNA-ITGA5感染后SKOV3-GFP/DDPⅡ细胞的增殖情况 | 第98-99页 |
| 2.5 FCM检测不同DDP浓度作用48小时后siRNA-RDX、siRNA-ITGA5、阴性病毒感染后SKOV3-GFP/DDPⅡ细胞周期分布的变化 | 第99-103页 |
| 2.5.1 siRNA-RDX感染后SKOV3-GFP/DDPⅡ细胞周期分布的变化 | 第99-101页 |
| 2.5.2 siRNA-ITGA5感染后SKOV3-GFP/DDPⅡ细胞周期分布的变化 | 第101-103页 |
| 2.6 Transwell法检测siRNA-RDX、siRNA-ITGA5、阴性病毒感染后SKOV3-GFP/DDPⅡ细胞的侵袭、迁移能力 | 第103-106页 |
| 2.6.1 siRNA-RDX感染后SKOV3-GFP/DDPⅡ细胞侵袭能力 | 第103-104页 |
| 2.6.2 siRNA-ITGA5感染后SKOV3-GFP/DDPⅡ细胞侵袭能力 | 第104页 |
| 2.6.3 siRNA-RDX感染后SKOV3-GFP/DDPⅡ细胞迁移能力 | 第104-105页 |
| 2.6.4 siRNA-ITGA5感染后SKOV3-GFP/DDPⅡ细胞迁移能力 | 第105-106页 |
| 3.讨论 | 第106-110页 |
| 第三章 RDX、ITGA5对卵巢癌SKOV3-GFP/DDPⅡ细胞多药耐药中凋亡和信号通路的影响及机制研究 | 第110-146页 |
| 前言 | 第110页 |
| 1.材料与方法 | 第110-120页 |
| 1.1 细胞来源 | 第110-111页 |
| 1.2 实验仪器和设备 | 第111页 |
| 1.2.1 主要试剂及耗材 | 第111页 |
| 1.2.2 主要仪器设备 | 第111页 |
| 1.3 RDX、ITGA5干扰慢病毒转染SKOV3-GFP/DDPⅡ细胞后相关下游信号通路变化 | 第111-118页 |
| 1.3.1 Path Scan? Antibody Array Kit原理 | 第111-112页 |
| 1.3.2 Path Scan? Antibody Array Kit实验步骤 | 第112-114页 |
| 1.3.3 Path Scan? Antibody Array Kit靶标分布及调节位点 | 第114-118页 |
| 1.4 相关信号通路基因生物信息学分析 | 第118-119页 |
| 1.5 蛋白免疫印迹观察RDX、ITGA5干扰慢病毒转染SKOV3-GFP/DDPⅡ细胞后信号通路节点蛋白的变化 | 第119页 |
| 1.6 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第119-120页 |
| 1.6.1 给药浓度的确定 | 第119页 |
| 1.6.2 具体实验步骤 | 第119-120页 |
| 2. 结果 | 第120-141页 |
| 2.1 RDX干扰慢病毒转染SKOV3-GFP/DDPⅡ细胞后相关下游信号通路变化 | 第120-126页 |
| 2.1.1 RDX及NC干扰慢病毒转染后Path Scan? RTK Signaling Antibody Array Kit中相关下游信号通路变化 | 第120-124页 |
| 2.1.2 RDX及NC干扰慢病毒转染后Path Scan? Stress and Apoptosis SignalingAntibody Array Kit中相关下游信号通路变化 | 第124-126页 |
| 2.2 ITGA5干扰慢病毒转染SKOV3-GFP/DDPⅡ细胞后相关下游信号通路变化 | 第126-132页 |
| 2.2.1 ITGA5及NC干扰慢病毒转染后Path Scan? RTK Signaling Antibody Array Kit中相关下游信号通路变化 | 第126-130页 |
| 2.2.2 ITGA5及NC干扰慢病毒转染后Path Scan? Stress and Apoptosis SignalingAntibody Array Kit中相关下游信号通路变化 | 第130-132页 |
| 2.3 RDX干扰慢病毒转染SKOV3-GFP/DDPⅡ细胞后相关信号通路基因生物信息学分析 | 第132-136页 |
| 2.4 ITGA5干扰慢病毒转染SKOV3-GFP/DDPⅡ细胞后相关信号通路基因生物信息学分析 | 第136-138页 |
| 2.5 蛋白免疫印迹验证RDX干扰慢病毒转染SKOV3-GFP/DDPⅡ细胞后信号通路节点蛋白的变化 | 第138-139页 |
| 2.6 FCM检测不同DDP浓度作用48小时后siRNA-RDX、siRNA-ITGA5、阴性病毒感染后SKOV3-GFP/DDPⅡ细胞的凋亡情况 | 第139-141页 |
| 2.6.1 siRNA-RDX感染后SKOV3-GFP/DDPⅡ细胞的凋亡情况 | 第139-140页 |
| 2.6.2 siRNA-ITGA5感染后SKOV3-GFP/DDPⅡ细胞的凋亡情况 | 第140-141页 |
| 3.讨论 | 第141-146页 |
| 第四章 卵巢恶性肿瘤多药耐药信号通路的研究进展 | 第146-170页 |
| 前言 | 第146页 |
| 1.信号传导通路与卵巢癌多药耐药 | 第146-147页 |
| 2.卵巢癌耐药相关的信号传导通路 | 第147-152页 |
| 2.1 PI3K/AKT/m TOR信号传导通路 | 第147-149页 |
| 2.2 MAPK信号转导通路 | 第149-150页 |
| 2.3 Wnt信号传导通路 | 第150-151页 |
| 2.4 Notch信号传导通路 | 第151-152页 |
| 2.5 其他信号传导通路 | 第152页 |
| 3.信号传导通路的靶向治疗 | 第152-154页 |
| 4.生物信息学及大量公共数据库可提供重要数据支持 | 第154-155页 |
| 4.1 生物信息学概况 | 第154-155页 |
| 4.2 本实验研究的前期基础 | 第155页 |
| 5.整合素概述 | 第155-158页 |
| 5.1 ITGA5通过细胞粘附介导卵巢恶性肿瘤多药耐药发生 | 第155-156页 |
| 5.2 ITGA5国内外研究现状 | 第156-158页 |
| 6.膜细胞骨架连接蛋白概述 | 第158-159页 |
| 7.本实验研究目的与意义 | 第159-161页 |
| 8.参考文献 | 第161-170页 |
| 全文小结 | 第170-171页 |
| 全文创新点 | 第171-172页 |
| 本研究存在的问题 | 第172-173页 |
| 学习期间已发表论文 | 第173-174页 |
| 致谢 | 第174-175页 |
