| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第14-39页 |
| 1.1 课题背景及研究的目的和意义 | 第14-16页 |
| 1.1.1 课题背景 | 第14-15页 |
| 1.1.2 研究的目的和意义 | 第15-16页 |
| 1.2 基因编辑技术研究进展 | 第16-26页 |
| 1.2.1 传统基因打靶技术 | 第16-17页 |
| 1.2.2 锌指核酸酶 | 第17-19页 |
| 1.2.3 类转录激活因子效应物核酸酶 | 第19-21页 |
| 1.2.4 CRISPR/Cas系统 | 第21-26页 |
| 1.3 二类CRISPR/Cas系统 | 第26-37页 |
| 1.3.1 CRISPR/Cas9系统研究进展 | 第26-32页 |
| 1.3.2 CRISPR/Cpf1系统研究进展 | 第32-34页 |
| 1.3.3 CRISPR/C2c1系统研究进展 | 第34-37页 |
| 1.4 本文主要研究内容及技术路线 | 第37-39页 |
| 1.4.1 本文主要研究内容 | 第37-38页 |
| 1.4.2 技术路线 | 第38-39页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第39-62页 |
| 2.1 实验材料 | 第39-43页 |
| 2.1.1 质粒和表达系统 | 第39页 |
| 2.1.2 细胞系与小鼠 | 第39-40页 |
| 2.1.3 实验试剂药品 | 第40-42页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第42-43页 |
| 2.2 实验方法 | 第43-62页 |
| 2.2.1 分子克隆 | 第43-47页 |
| 2.2.2 蛋白表达 | 第47-48页 |
| 2.2.3 蛋白纯化 | 第48-50页 |
| 2.2.4 RNA的体外转录 | 第50-51页 |
| 2.2.5 RNA的纯化 | 第51-54页 |
| 2.2.6 DNA的设计与合成 | 第54页 |
| 2.2.7 蛋白结晶 | 第54-55页 |
| 2.2.8 数据收集与结构解析 | 第55-56页 |
| 2.2.9 细胞复苏、培养及冻存 | 第56页 |
| 2.2.10 细胞转染 | 第56-57页 |
| 2.2.11 T7E1实验 | 第57-58页 |
| 2.2.12 小鼠胚胎的提取 | 第58-59页 |
| 2.2.13 显微注射 | 第59-60页 |
| 2.2.14 微量热泳动仪(MST)检测 | 第60-62页 |
| 第三章 BthC2c1-sgRNA-dsDNA复合物的纯化 | 第62-72页 |
| 3.1 引言 | 第62页 |
| 3.2 BthC2c1蛋白的克隆与表达 | 第62-63页 |
| 3.3 BthC2c1蛋白的纯化 | 第63-66页 |
| 3.4 BthC2c1sgRNA的体外转录与纯化 | 第66-67页 |
| 3.5 BthC2c1蛋白与sgRNA及dsDNA相互作用的检测 | 第67-69页 |
| 3.6 BthC2c1-sgRNA-dsDNA复合物的纯化 | 第69-70页 |
| 3.7 本章小结 | 第70-72页 |
| 第四章 BthC2c1-sgRNA-dsDNA复合物的结晶与结构解析 | 第72-81页 |
| 4.1 引言 | 第72页 |
| 4.2 复合物结晶条件初步筛选 | 第72-73页 |
| 4.3 复合物结晶条件的优化 | 第73-75页 |
| 4.4 BthC2c1的Se-Met衍生型晶体 | 第75-76页 |
| 4.5 防冻液的选择 | 第76页 |
| 4.6 数据收集及结构解析 | 第76-79页 |
| 4.7 本章小结 | 第79-81页 |
| 第五章 BthC2c1-sgRNA-dsDNA复合物的三维结构 | 第81-93页 |
| 5.1 引言 | 第81页 |
| 5.2 BthC2c1-sgRNA-dsDNA三元复合物的整体结构 | 第81-83页 |
| 5.3 BthC2c1对dsDNA的识别模式 | 第83-87页 |
| 5.4 BthC2c1对sgRNA的识别模式 | 第87-89页 |
| 5.5 BthC2c1与AacC2c1的序列比对与结构比较 | 第89-91页 |
| 5.6 本章小结 | 第91-93页 |
| 第六章 sgRNA介导BthC2c1剪切DNA的功能机制研究 | 第93-109页 |
| 6.1 引言 | 第93页 |
| 6.2 BthC2c1剪切DNA产生黏性末端 | 第93-96页 |
| 6.3 金属离子对BthC2c1体外酶切活性的影响 | 第96-98页 |
| 6.4 温度对BthC2c1体外酶切活性的影响 | 第98-99页 |
| 6.5 BthC2c1在动物细胞内的酶切活性检测 | 第99-101页 |
| 6.6 BthC2c1在小鼠胚胎内的酶切活性检测 | 第101-103页 |
| 6.7 BthC2c1-sgRNA复合物对底物亲和力检测 | 第103-107页 |
| 6.8 本章小结 | 第107-109页 |
| 结论 | 第109-111页 |
| 参考文献 | 第111-123页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文及其它成果 | 第123-125页 |
| 致谢 | 第125-126页 |
| 个人简历 | 第126页 |
