| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第8-14页 |
| 1 烟曲霉简介 | 第8-9页 |
| 1.1 烟曲霉的生长特征 | 第8页 |
| 1.2 烟曲霉的致病性 | 第8-9页 |
| 2 液泡H~+-ATPase酶 | 第9-10页 |
| 3 VmaC蛋白的研究进展 | 第10-11页 |
| 4 钙离子 | 第11-12页 |
| 5 细胞壁 | 第12页 |
| 6 本课题研究的思路、内容和方法 | 第12-14页 |
| 6.1 研究内容 | 第12-13页 |
| 6.2 技术路线 | 第13-14页 |
| 第二章 VmaC功能及蛋白定位分析 | 第14-37页 |
| 第一节 vmaC对菌落的产孢和极性生长是必需的 | 第14-32页 |
| 1.1 材料与方法 | 第14-27页 |
| 1.1.1 菌株与培养条件 | 第14页 |
| 1.1.2 试剂和仪器 | 第14-16页 |
| 1.1.3 菌株构建 | 第16-25页 |
| 1.1.4 菌株固体表型测试 | 第25页 |
| 1.1.5 菌株液体表型测试 | 第25页 |
| 1.1.6 条件菌株RNA的提取与定量 | 第25-27页 |
| 1.2 实验结果 | 第27-30页 |
| 1.2.1 vmaC敲除菌株表型及相关点菌图分析 | 第27-29页 |
| 1.2.2 条件菌株表型的确定及vmaC RNA表达量的测定 | 第29-30页 |
| 1.3 讨论 | 第30-32页 |
| 第二节 VmaC定位于液泡膜上 | 第32-37页 |
| 2.1 材料与方法 | 第32-35页 |
| 2.1.1 菌株与培养条件 | 第32页 |
| 2.1.2 试剂和仪器 | 第32页 |
| 2.1.3 菌株构建 | 第32-33页 |
| 2.1.4 烟曲霉VmaC -GFP菌株固体平板表型测试 | 第33-34页 |
| 2.1.5 观察烟曲霉VmaC在菌丝细胞中的定位 | 第34页 |
| 2.1.6 Western免疫印迹 | 第34-35页 |
| 2.2 实验结果 | 第35-36页 |
| 2.3 讨论 | 第36-37页 |
| 第三章 vmaC影响烟曲霉细胞壁的生物合成 | 第37-42页 |
| 1.1 材料与方法 | 第37-38页 |
| 1.1.1 菌株与培养条件 | 第37页 |
| 1.1.2 试剂和仪器 | 第37页 |
| 1.1.3 菌株构建 | 第37页 |
| 1.1.4 实验方法 | 第37页 |
| 1.1.5 透射电镜 | 第37-38页 |
| 1.1.6 细胞壁多糖提取步骤 | 第38页 |
| 1.2 实验结果 | 第38-40页 |
| 1.2.1 △ vmaC菌株对细胞壁试剂耐受,且细胞壁组分几丁质分布异常 | 第38-40页 |
| 1.2.2 △ vmacC菌株细胞壁多糖成分改变 | 第40页 |
| 1.3 讨论 | 第40-42页 |
| 第四章 vmaC参与烟曲霉体内钙离子平衡和液泡酸碱性平衡 | 第42-49页 |
| 第一节 vmaC敲除破坏细胞质与液泡间钙离子平衡 | 第42-47页 |
| 1.1 材料与方法 | 第42-45页 |
| 1.1.1 菌株与培养条件 | 第42页 |
| 1.1.2 试剂和仪器 | 第42-43页 |
| 1.1.3 菌株构建 | 第43-44页 |
| 1.1.4 测钙步骤 | 第44-45页 |
| 1.2 实验结果 | 第45-46页 |
| 1.3 讨论 | 第46-47页 |
| 第二节 vmaC敲除使液泡酸性丢失 | 第47-49页 |
| 2.1 材料与方法 | 第47页 |
| 2.1.1 菌株与培养条件 | 第47页 |
| 2.1.2 试剂和仪器 | 第47页 |
| 2.1.3 菌株构建 | 第47页 |
| 2.1.4 实验方法 | 第47页 |
| 2.2 实验结果 | 第47-48页 |
| 2.3 讨论 | 第48-49页 |
| 第五章 VmaC蛋白相关保守性功能验证 | 第49-59页 |
| 第一节 VmaC与V-ATPase酶其他亚基相互作用验证 | 第49-54页 |
| 1.1 材料与方法 | 第49-50页 |
| 1.1.1 菌株与培养条件 | 第49页 |
| 1.1.2 试剂和仪器 | 第49页 |
| 1.1.3 菌株构建 | 第49-50页 |
| 1.1.4 免疫共沉淀及质谱验证实验 | 第50页 |
| 1.2 实验结果 | 第50-53页 |
| 1.2.1 VmaC是V-ATPase的亚基成员 | 第50-51页 |
| 1.2.2 △ vmaA相关菌株表型与△ vmaC菌株一致 | 第51-52页 |
| 1.2.3 △ vmaC敲除菌株在能量培养基上的表型和药敏性验证 | 第52-53页 |
| 1.3 讨论 | 第53-54页 |
| 第二节 VmaC蛋白功能及结构域保守性验证 | 第54-59页 |
| 2.1 材料与方法 | 第54-55页 |
| 2.1.1 菌株与培养条件 | 第54页 |
| 2.1.2 试剂和仪器 | 第54页 |
| 2.1.3 菌株构建 | 第54-55页 |
| 2.1.4 其他实验方法 | 第55页 |
| 2.2 实验结果 | 第55-57页 |
| 2.2.1 构巢曲霉同源基因和酿酒酵母同源基因vmaC可以回补烟曲霉tet-vmaC菌株病态表型 | 第55-57页 |
| 2.2.2 GFP-VmaC-truncation菌株相关表型验证 | 第57页 |
| 2.3 讨论 | 第57-59页 |
| 第六章 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 附录 | 第66-68页 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第68页 |
| 硕士期间参与的科研课题 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
