| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 前言 | 第12-26页 |
| 第一章 磷脂酰脂醇4,5-二磷酸(PIP2)调控HCN通道的机制研究 | 第26-42页 |
| 1.1 实验材料 | 第26-30页 |
| 1.1.1 主要设备和仪器 | 第26-27页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第27-28页 |
| 1.1.3 溶液的配制 | 第28-30页 |
| 1.2 实验方法 | 第30-34页 |
| 1.2.1 HCN通道重组质粒的获取 | 第30-33页 |
| 1.2.2 调节胞内PIP2水平对HCN通道调控作用的电生理记录 | 第33-34页 |
| 1.3 实验结果 | 第34-41页 |
| 1.3.1 HCN通道重组质粒的鉴定 | 第34-38页 |
| 1.3.2 过表达PI5K上调胞内PIP2水平对HCN通道的影响 | 第38-39页 |
| 1.3.3 激活M1受体下调胞内PIP2水平对HCN通道的影响 | 第39-41页 |
| 1.4 讨论 | 第41-42页 |
| 第二章 PI3K/PIP3调控HCN通道的机制研究 | 第42-55页 |
| 2.1 实验材料 | 第42-43页 |
| 2.1.1 主要设备和仪器 | 第42页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第42-43页 |
| 2.1.3 溶液的配制 | 第43页 |
| 2.2 实验方法 | 第43-49页 |
| 2.2.1 稳定表达pcDNA3.1(+)-HCN4-EGFP-3FLAG的HEK293细胞系的构建 | 第43-44页 |
| 2.2.2 p101重组质粒的构建 | 第44-48页 |
| 2.2.3 PI3K对HCN4通道的调控作用的电生理记录 | 第48-49页 |
| 2.3 实验结果 | 第49-52页 |
| 2.3.1 HCN4通道稳定细胞系鉴定结果 | 第49页 |
| 2.3.2 p101重组质粒的鉴定 | 第49-51页 |
| 2.3.3 过表达PI3K对稳定表达HCN4通道的HEK293细胞的调控作用 | 第51-52页 |
| 2.4 讨论 | 第52-55页 |
| 第三章 新型HCN通道小分子抑制剂的发现 | 第55-71页 |
| 3.1 实验材料 | 第55-56页 |
| 3.1.1 主要设备和仪器 | 第55页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第55页 |
| 3.1.3 溶液的配制 | 第55-56页 |
| 3.2 实验方法 | 第56-58页 |
| 3.2.1 小鼠DRG神经元的急性分离 | 第56-57页 |
| 3.2.2 全细胞膜片钳记录化合物对HCN通道的影响 | 第57页 |
| 3.2.3 实验数据分析 | 第57-58页 |
| 3.3 实验结果 | 第58-69页 |
| 3.3.1 4a对HCN2通道的抑制作用 | 第58-59页 |
| 3.3.2 4a对HCN通道的敏感性 | 第59-60页 |
| 3.3.3 4a系列改构体对HCN2通道的抑制作用 | 第60-61页 |
| 3.3.4 4e阻断HCN2通道的电生理特性 | 第61-62页 |
| 3.3.5 与HCN1或HCN4通道相比,4e优先阻断HCN2通道 | 第62-64页 |
| 3.3.6 4e对HCN通道使用依赖性的研究 | 第64-67页 |
| 3.3.7 4e对小DRG神经元电生理活动的影响 | 第67-69页 |
| 3.4 讨论 | 第69-71页 |
| 全文结论 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-80页 |
| 攻读学位期间成果 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-84页 |
