| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 绪论 | 第10-18页 |
| 1.1 引言 | 第10页 |
| 1.2 丹顶鹤概况及研究进展 | 第10-11页 |
| 1.2.1 丹顶鹤概况 | 第10-11页 |
| 1.2.2 丹顶鹤的研究进展 | 第11页 |
| 1.3 干扰素的分类 | 第11-13页 |
| 1.4 Ⅰ型干扰素的产生机制及信号转导 | 第13-14页 |
| 1.4.1 Ⅰ型干扰素的产生机制 | 第13-14页 |
| 1.4.2 Ⅰ型干扰素的信号转导 | 第14页 |
| 1.5 Ⅰ型干扰素的生物学功能 | 第14-16页 |
| 1.5.1 Ⅰ型干扰素的抗病毒功能 | 第14-16页 |
| 1.5.2 Ⅰ型干扰素的抗肿瘤功能 | 第16页 |
| 1.6 Ⅰ型基因工程干扰素的临床应用 | 第16-17页 |
| 1.7 研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| 2 研究的主要内容 | 第18-35页 |
| 2.1 试验材料 | 第18-19页 |
| 2.1.1 细胞、病毒、实验动物 | 第18页 |
| 2.1.2 质粒及菌株 | 第18页 |
| 2.1.3 主要溶液配方 | 第18页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第18-19页 |
| 2.2 丹顶鹤α干扰素基因的克隆 | 第19-25页 |
| 2.2.1 丹顶鹤基因组的提取 | 第19页 |
| 2.2.2 简并引物扩增丹顶鹤IFN-α基因 | 第19-21页 |
| 2.2.3 丹顶鹤IFN-α基因侧翼序列的扩增 | 第21-23页 |
| 2.2.4 丹顶鹤IFN-α序列的校对 | 第23-25页 |
| 2.3 丹顶鹤α干扰素基因的序列分析 | 第25-26页 |
| 2.3.1 序列的提交 | 第25页 |
| 2.3.2 进化分析 | 第25页 |
| 2.3.3 同源性分析 | 第25-26页 |
| 2.3.4 氨基酸序列比对 | 第26页 |
| 2.3.5 3D结构预测 | 第26页 |
| 2.3.6 信号肽和糖基化位点分析 | 第26页 |
| 2.3.7 抗原性预测和疏水性分析 | 第26页 |
| 2.4 丹顶鹤α干扰素基因的原核表达 | 第26-28页 |
| 2.4.1 丹顶鹤α干扰素成熟肽基因的克隆及鉴定 | 第26-27页 |
| 2.4.2 原核表达载体的构建 | 第27页 |
| 2.4.3 丹顶鹤α干扰素的原核表达、纯化和包涵体复性 | 第27-28页 |
| 2.5 兔抗丹顶鹤α干扰素多克隆抗体的制备 | 第28-29页 |
| 2.5.1 兔抗丹顶鹤α干扰素多克隆抗体的制备 | 第28-29页 |
| 2.5.2 兔抗丹顶鹤α干扰素多克隆抗体的效价测定 | 第29页 |
| 2.6 丹顶鹤α干扰素的抗病毒活性分析 | 第29-31页 |
| 2.6.1 鸡胚成纤维细胞的制作 | 第29-30页 |
| 2.6.2 水泡性口炎病毒TCID_(50)的测定 | 第30页 |
| 2.6.3 丹顶鹤α干扰素抗病毒活性的测定 | 第30-31页 |
| 2.6.4 丹顶鹤α干扰素抗病毒活性的中和试验 | 第31页 |
| 2.7 丹顶鹤α干扰素的亚细胞定位 | 第31-33页 |
| 2.7.1 重组质粒pcDNA3.1-ORF的制备 | 第31-33页 |
| 2.7.2 转染 | 第33页 |
| 2.7.3 间接免疫荧光 | 第33页 |
| 2.8 简并引物的应用 | 第33-35页 |
| 2.8.1 简并引物1的应用 | 第33-34页 |
| 2.8.2 简并引物2的应用 | 第34-35页 |
| 3 实验结果 | 第35-50页 |
| 3.1 丹顶鹤IFN-α基因的克隆 | 第35-37页 |
| 3.1.1 简并引物扩增IFN-α基因 | 第35页 |
| 3.1.2 丹顶鹤IFN-α基因侧翼序列的扩增 | 第35-37页 |
| 3.2 丹顶鹤IFN-α基因的序列分析 | 第37-41页 |
| 3.3 丹顶鹤IFN-α基因的原核表达 | 第41-44页 |
| 3.3.1 丹顶鹤IFN-α基因的原核表达载体的构建 | 第41-43页 |
| 3.3.2 丹顶鹤IFN-α基因的原核表达 | 第43-44页 |
| 3.3.3 包涵体的纯化 | 第44页 |
| 3.4 抗丹顶鹤α干扰素多克隆抗体的制备与鉴定 | 第44页 |
| 3.5 丹顶鹤α干扰素的抗病毒活性分析 | 第44-47页 |
| 3.5.1 VSV病毒TCID_(50)的测定 | 第44-45页 |
| 3.5.2 crIFN-α的抗病毒活性分析 | 第45-46页 |
| 3.5.3 crIFN-α的抗病毒活性的中和试验 | 第46-47页 |
| 3.6 丹顶鹤α干扰素的亚细胞定位 | 第47-48页 |
| 3.7 简并引物的应用 | 第48-50页 |
| 4 讨论 | 第50-53页 |
| 4.1 丹顶鹤IFN-α基因的克隆 | 第50页 |
| 4.2 丹顶鹤IFN-α基因及编码产物的生物信息学分析 | 第50-51页 |
| 4.3 丹顶鹤IFN-α基因的原核表达 | 第51页 |
| 4.4 丹顶鹤IFN-α抗病毒活性分析 | 第51-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-64页 |
| 附录 | 第64-68页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
