| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 1 绪论 | 第13-23页 |
| 1.1 问题的提出 | 第13-14页 |
| 1.2 国内外研究现状 | 第14-19页 |
| 1.2.1 组蛋白修饰 | 第14页 |
| 1.2.2 组蛋白赖氨酸甲基化研究进展 | 第14-17页 |
| 1.2.3 组蛋白赖氨酸甲基化与肿瘤 | 第17页 |
| 1.2.4 组蛋白赖氨酸甲基化转移酶 SETDB1 研究进展 | 第17-19页 |
| ① SETDB1 结构与功能 | 第17-18页 |
| ② SETDB1 与胚胎发育 | 第18-19页 |
| ③ SETDB1 与肿瘤 | 第19页 |
| 1.3 课题的研究目的意义、研究内容及技术路线 | 第19-23页 |
| 1.3.1 课题的研究目的与意义 | 第19页 |
| 1.3.2 课题的研究内容 | 第19-21页 |
| 1.3.3 课题研究的技术路线 | 第21-23页 |
| 2 SETDB1 对神经母细胞瘤临床预后的生物信息学分析 | 第23-33页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23页 |
| 2.2.1 神经母细胞瘤临床数据库简介 | 第23页 |
| 2.2.2 主要工具软件 | 第23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-24页 |
| 2.3.1 SETDB1与神经母细胞瘤预后的关系分析 | 第23页 |
| 2.3.2 SETDB1与神经母细胞瘤临床分期的关系分析 | 第23-24页 |
| 2.3.3 SETDB1表达量与患者年龄的关系分析 | 第24页 |
| 2.3.4 SETDB1与患者死亡原因之间的关系分析 | 第24页 |
| 2.3.5 SETDB1表达量与神经母细胞瘤原癌基因 N‐MYC 的关系分析 | 第24页 |
| 2.3.6 SETDB1与神经母细胞瘤复发之间的关系分析 | 第24页 |
| 2.3.7 数据处理与统计分析 | 第24页 |
| 2.4 结果与分析 | 第24-30页 |
| 2.4.1 SETDB1与神经母细胞瘤预后密切相关 | 第24-26页 |
| 2.4.2 SETDB1在不同临床分期的神经母细胞瘤中表达的差异 | 第26-27页 |
| 2.4.3 SETDB1表达量与神经母细胞瘤患者的死亡密切相关 | 第27-28页 |
| 2.4.4 SETDB1表达量与神经母细胞瘤患的不同年龄密切相关 | 第28页 |
| 2.4.5 SETDB1的表达量与神经母细胞瘤原癌基因 N‐MYC 密切相关 | 第28-29页 |
| 2.4.6 SETDB1表达量与神经母细胞瘤的复发密切相关 | 第29-30页 |
| 2.5 讨论 | 第30-31页 |
| 2.5.1 SETDB1与肿瘤的进展密切相关 | 第30页 |
| 2.5.2 神经母细胞瘤患者年龄及临床分期其预后的关系 | 第30-31页 |
| 2.5.3 N‐MYC扩增与神经母细胞瘤预后的关系 | 第31页 |
| 2.6 本章小结 | 第31-33页 |
| 3 SETDB1 对神经母细胞瘤增殖的影响 | 第33-67页 |
| 3.1 引言 | 第33页 |
| 3.2 实验材料，仪器与试剂 | 第33-35页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第33页 |
| 3.2.2 主要实验仪器 | 第33-34页 |
| 3.2.3 主要实验试剂 | 第34-35页 |
| 3.3 主要实验方法 | 第35-48页 |
| 3.3.1 细胞培养 | 第35-36页 |
| 3.3.2 cDNA的制备，荧光定量 PCR | 第36-38页 |
| 3.3.3 神经母细胞瘤中 SETDB1 表达的免疫荧光染色 | 第38页 |
| 3.3.4 Western Blotting | 第38-39页 |
| 3.3.5 SETDB1shRNA载体构建及鉴定 | 第39-41页 |
| 3.3.6 SETDB1过表达载体构建及鉴定 | 第41-43页 |
| 3.3.7 慢病毒的包装及感染 | 第43-45页 |
| 3.3.8 CCK‐8法检测转染细胞的增殖能力 | 第45页 |
| 3.3.9 BrdU和 Ki67 免疫荧光染色 | 第45页 |
| 3.3.10 细胞周期及凋亡分析 | 第45-46页 |
| 3.3.11 软琼脂实验 | 第46-47页 |
| 3.3.12 小鼠体内成瘤实验 | 第47页 |
| 3.3.13 组蛋白 H3K9me3 甲基化水平检测 | 第47页 |
| 3.3.14 药物青蒿素处理神经母细胞瘤 | 第47页 |
| 3.3.15 数据处理与统计分析 | 第47-48页 |
| 3.4 结果与分析 | 第48-63页 |
| 3.4.1 SETDB1在五种神经母细胞瘤中广泛表达 | 第48-49页 |
| 3.4.2 SETDB1 shRNA载体的构建及鉴定 | 第49-50页 |
| 3.4.3 SETDB1 超表达载体的构建及鉴定 | 第50-51页 |
| 3.4.4 下调 SETDB1 对神经母细胞瘤增殖能力的影响 | 第51-54页 |
| 3.4.5 下调 SETDB1 对神经母细胞瘤细胞周期的影响 | 第54-55页 |
| 3.4.6 下调 SETDB1 对神经母细胞瘤细胞凋亡的影响 | 第55-56页 |
| 3.4.7 下调 SETDB1 抑制神经母细胞瘤自我更新能力和成瘤能力 | 第56-58页 |
| 3.4.8 药物青蒿素抑制 SETDB1 的表达可以抑制神经母细胞瘤的增殖 | 第58-59页 |
| 3.4.9 恢复 SETDB1 对神经母细胞瘤增殖的影响 | 第59-63页 |
| 3.5 讨论 | 第63-64页 |
| 3.6 本章小结 | 第64-67页 |
| 4 SETDB1 对神经母细胞瘤嘌呤代谢的影响及嘌呤补偿对细胞增殖的影响 | 第67-83页 |
| 4.1 引言 | 第67页 |
| 4.2 实验材料，仪器与试剂 | 第67-69页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第67-68页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第68页 |
| 4.2.3 实验试剂 | 第68-69页 |
| 4.3 主要实验方法 | 第69-71页 |
| 4.3.1 下调 SETDB1 的表达谱芯片分析 | 第69页 |
| 4.3.2 RT‐PCR | 第69页 |
| 4.3.3 嘌呤合成途径关键酶磷酸核糖焦磷酸合成酶（PRPS1）基因的下调载体构建及鉴定 | 第69页 |
| 4.3.4 CCK‐8法检测转染细胞的增殖能力 | 第69-70页 |
| 4.3.5 BrdU免疫荧光实验 | 第70页 |
| 4.3.6 软琼脂实验 | 第70页 |
| 4.3.7 嘌呤核苷酸 IMP，AMP，GMP 补偿 | 第70-71页 |
| 4.3.8 数据处理与统计分析 | 第71页 |
| 4.4 结果与分析 | 第71-79页 |
| 4.4.1 Go分析结果显示下调 SETDB1 后引起组蛋白甲基化水平降低 | 第71页 |
| 4.4.2 表达谱分析结果显示下调 SETDB1 后引起神经母细胞瘤嘌呤合成相关信号通路下调 | 第71-72页 |
| 4.4.3 下调 SETDB1 抑制嘌呤合成途径中关键酶基因的表达 | 第72-74页 |
| 4.4.4 下调嘌呤从头合成途径中关键酶基因 PRPS1 抑制神经母细胞瘤增殖 | 第74-76页 |
| 4.4.5 下调 PRPS1 基因减少神经母细胞瘤克隆形成能力 | 第76-78页 |
| 4.4.6 对下调 SETDB1 的神经母细胞瘤进行 IMP、AMP、GMP 补偿可以部分恢复细胞增殖 | 第78-79页 |
| 4.5 讨论 | 第79-81页 |
| 4.6 本章小结 | 第81-83页 |
| 5 下调 SETDB1 促进神经母细胞瘤向神经胶质细胞分化 | 第83-103页 |
| 5.1 引言 | 第83页 |
| 5.2 实验材料，仪器与试剂 | 第83-84页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第83页 |
| 5.2.2 主要实验仪器 | 第83-84页 |
| 5.2.3 主要实验试剂 | 第84页 |
| 5.3 实验方法 | 第84-86页 |
| 5.3.1 细胞培养 | 第84页 |
| 5.3.2 慢病毒包装 | 第84-85页 |
| 5.3.3 细胞感染 | 第85页 |
| 5.3.4 CCK‐8测定细胞生长曲线 | 第85页 |
| 5.3.5 软琼脂实验 | 第85页 |
| 5.3.6 RNA提取及荧光定量 PCR | 第85-86页 |
| 5.3.7 数据处理与统计分析 | 第86页 |
| 5.4 结果与分析 | 第86-99页 |
| 5.4.1 过表达 SETDB1 对神经母细胞瘤增殖无显著影响 | 第86-88页 |
| 5.4.2 过表达 SETDB1 促进神经母细胞瘤克隆形成能力 | 第88页 |
| 5.4.3 下调 SETDB1 引起神经母细胞瘤形态改变 | 第88-89页 |
| 5.4.4 下调 SETDB1 后神经母细胞瘤干性及分化相关基因的表达谱芯片分析 | 第89-90页 |
| 5.4.5 下调 SETDB1 降低了神经母细胞瘤干性基因的表达 | 第90-91页 |
| 5.4.6 下调 SETDB1 减少了神经元标记相关基因的表达 | 第91-93页 |
| 5.4.7 下调 SETDB1 增加了胶质细胞标记相关基因的表达 | 第93-96页 |
| 5.4.8 恢复 SETDB1 对神经母细胞瘤“干性”及神经元基因的表达的影响 | 第96-98页 |
| 5.4.9 恢复 SETDB1 降低了神经母细胞瘤的胶质细胞标记基因的表达 | 第98-99页 |
| 5.5 讨论 | 第99-101页 |
| 5.6 本章小结 | 第101-103页 |
| 6 结论与展望 | 第103-105页 |
| 6.1 主要结论 | 第103-104页 |
| 6.2 后续工作展望 | 第104-105页 |
| 6.2.1 下调 SETDB1 对嘌呤核苷酸合成抑制的分子机制研究 | 第104页 |
| 6.2.2 下调 SETDB1 对神经母细胞瘤分化为神经胶质细胞的分子机制研究 | 第104-105页 |
| 致谢 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-123页 |
| 附录 | 第123页 |
| A. 作者攻读学位期间发表的论文目录 | 第123页 |
| B. 作者攻读学位期间参加科研项目情况 | 第123页 |
