| 目录 | 第5-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 第一部分 研究背景及科学问题的初步探索 | 第15-27页 |
| 第一章 绪论 | 第15-20页 |
| 1.1 早期复发是影响肝癌根治性切除预后最重要的因素之一 | 第15-16页 |
| 1.2 EGFR信号的活化水平与肝癌患者预后密切相关 | 第16-17页 |
| 1.3 癌细胞EMT是肝癌发生肝内和肝外转移必经的过程 | 第17-18页 |
| 1.4 本论文的研究思路与内容 | 第18页 |
| 1.5 下一步研究内容 | 第18-20页 |
| 第二章 ERHRR率与EGFR信号的相关性 | 第20-27页 |
| 摘要 | 第20页 |
| 2.1 前言 | 第20-21页 |
| 2.2 材料 | 第21页 |
| 2.2.1 试剂与抗体 | 第21页 |
| 2.2.2 实验器材 | 第21页 |
| 2.3 方法 | 第21-22页 |
| 2.3.1 研究对象的入选及排除标准 | 第21页 |
| 2.3.2 病例一般临床资料的收集和标本处理 | 第21页 |
| 2.3.3 免疫组织化学法检测p-EGFR表达 | 第21-22页 |
| 2.3.4 肝癌组织p-EGFR表达判断标准 | 第22页 |
| 2.3.5 统计分析 | 第22页 |
| 2.4 结果 | 第22-25页 |
| 2.4.1 病例收集情况 | 第22页 |
| 2.4.2 一般临床资料整理及其早期复发的关系 | 第22-23页 |
| 2.4.3 肝癌组织p-EGFR的表达及其与早期复发的关系 | 第23-25页 |
| 2.5 讨论 | 第25-27页 |
| 第二部分 体外研究 | 第27-69页 |
| 第三章 EGFR 信号体外诱导肝癌细胞株EMT和侵袭 | 第27-39页 |
| 摘要 | 第27页 |
| 3.1 前言 | 第27-28页 |
| 3.2 材料 | 第28-29页 |
| 3.2.1 细胞、试剂与抗体 | 第28页 |
| 3.2.2 实验器材 | 第28-29页 |
| 3.3 方法 | 第29-34页 |
| 3.3.1 Western blot | 第29-31页 |
| 3.3.2 Transwell侵袭实验 | 第31页 |
| 3.3.3 伤口愈合实验 | 第31-32页 |
| 3.3.4 Real-time PCR | 第32-34页 |
| 3.3.5 统计分析 | 第34页 |
| 3.4 结果 | 第34-38页 |
| 3.4.1 四种肝癌细胞株中EGFR表达水平 | 第34-35页 |
| 3.4.2 EGFR信号诱导肝癌细胞EMT | 第35-36页 |
| 3.4.3 EGFR信号诱导肝癌细胞侵袭和迁移 | 第36-38页 |
| 3.5 讨论 | 第38页 |
| 3.6 小结 | 第38-39页 |
| 第四章 EGFR信号体外诱导肝癌细胞EMT的分子机制 | 第39-62页 |
| 摘要 | 第39页 |
| 4.1 前言 | 第39-40页 |
| 4.2 材料 | 第40-41页 |
| 4.2.1 细胞、试剂与抗体 | 第40-41页 |
| 4.2.2 实验器材 | 第41页 |
| 4.3 方法 | 第41-43页 |
| 4.3.1 SMMC-7721和HepG2的干扰RNA转染 | 第41页 |
| 4.3.2 双荧光素酶报告基因检测TCF/LEF启动子活性 | 第41-42页 |
| 4.3.3 SMMC-7721和HepG2核蛋白提取方法 | 第42页 |
| 4.3.4 细胞免疫荧光检测β-catenin的核转位 | 第42-43页 |
| 4.3.5 Western blot | 第43页 |
| 4.3.6 Real-time PCR | 第43页 |
| 4.3.7 统计分析 | 第43页 |
| 4.4 结果 | 第43-58页 |
| 4.4.1 β-Catenin介导EGFR信号诱导的EMT | 第43-47页 |
| 4.4.2 EGFR信号诱导的β-tenin转录活化呈Wnt信号非依赖性 | 第47-48页 |
| 4.4.3 PI3K/AKT通路介导β-catenin核转位 | 第48-50页 |
| 4.4.4 PI3K/AKT和ERK通路共同介导β-catenin-TCF/LEF转录活化 | 第50-52页 |
| 4.4.5 PI3K/AKT和ERK通路共同介导EGFR信号诱导肝癌细胞的EMT | 第52-54页 |
| 4.4.6 ERK通路诱导PKM2入核调控肝癌EMT | 第54-57页 |
| 4.4.7 Snail介导EGFR诱导肝癌细胞的EMT过程 | 第57-58页 |
| 4.5 讨论 | 第58-60页 |
| 4.6 小结 | 第60-62页 |
| 第五章 EGFR信号体外诱导肝癌细胞运动迁移的分子机制 | 第62-69页 |
| 摘要 | 第62页 |
| 5.1 前言 | 第62页 |
| 5.2 材料 | 第62-63页 |
| 5.2.1 细胞、试剂与抗体 | 第62-63页 |
| 5.2.2 实验器材 | 第63页 |
| 5.3 方法 | 第63页 |
| 5.3.1 SMMC-7721和HepG2的干扰RNA转染 | 第63页 |
| 5.3.2 Transwell侵袭实验 | 第63页 |
| 5.3.3 统计分析 | 第63页 |
| 5.4 结果 | 第63-67页 |
| 5.4.1 PI3K/AKT和ERK通路共同介导EGFR信号诱导肝癌细胞运动迁移 | 第63-65页 |
| 5.4.2 PKM2,β-catenin,Snail参与EGFR信号诱导肝癌细胞的运动迁移 | 第65-67页 |
| 5.5 讨论 | 第67-68页 |
| 5.6 小结 | 第68-69页 |
| 第三部分 临床研究 | 第69-92页 |
| 第六章 EGFR信号诱导PKM2/β-catenin入核促进HCC患者EMT的体内验证 | 第69-77页 |
| 摘要 | 第69页 |
| 6.1 前言 | 第69页 |
| 6.2 材料 | 第69-70页 |
| 6.2.1 试剂与抗体 | 第69页 |
| 6.2.2 实验器材 | 第69-70页 |
| 6.3 方法 | 第70页 |
| 6.3.1 免疫组织化学实验 | 第70页 |
| 6.3.2 统计分析 | 第70页 |
| 6.4 结果 | 第70-75页 |
| 6.4.1 E-cadherin,Snail、PKM2和β-catenin的表达水平 | 第70-71页 |
| 6.4.2 p-EGFR与E-cadherin,Snail表达的相关性 | 第71-72页 |
| 6.4.3 p-EGFR与PKM2/β-catenin核共表达的相关性 | 第72-74页 |
| 6.4.4 PKM2/β-catenin核共表达与Snail、E-cadherin表达的相关性 | 第74-75页 |
| 6.5 讨论 | 第75-76页 |
| 6.6 小结 | 第76-77页 |
| 第七章 EGFR信号活化的HCC根治性切除患者术后早期复发预测指标分析 | 第77-82页 |
| 摘要 | 第77页 |
| 7.1 前言 | 第77页 |
| 7.2 方法 | 第77-78页 |
| 7.2.1 统计分析 | 第77-78页 |
| 7.3 结果 | 第78-80页 |
| 7.3.1 EGFR信号激活的ERHRR预测指标的可靠性分析 | 第78-79页 |
| 7.3.2 COX多因素回归分析影响ERHRR的独立指标 | 第79-80页 |
| 7.4 讨论 | 第80-81页 |
| 7.5 小结 | 第81-82页 |
| 第八章 持续活化EGFR信号促进肝癌细胞EMT、侵袭及增殖诱发ERHRR | 第82-92页 |
| 摘要 | 第82页 |
| 8.1 前言 | 第82页 |
| 8.2 材料 | 第82-84页 |
| 8.2.1 细胞、试剂与抗体 | 第82-83页 |
| 8.2.2 实验器材 | 第83-84页 |
| 8.3 方法 | 第84-85页 |
| 8.3.1 免疫组织化学实验 | 第84页 |
| 8.3.2 细胞活力检测 | 第84页 |
| 8.3.3 流式细胞技术检测细胞周期 | 第84-85页 |
| 8.3.4 Western blot实验 | 第85页 |
| 8.4 结果 | 第85-90页 |
| 8.4.1 p-EGFR与E-cadherin/Ki-67表达的相关性 | 第85-86页 |
| 8.4.2 PKM2/β-atenin核共表达与Ki-67表达的相关性 | 第86-87页 |
| 8.4.3 EGFR信号对体外肝癌细胞株增殖的影响 | 第87-89页 |
| 8.4.4 E-cadhe-in/Ki-67表达与ERHRR的关系 | 第89-90页 |
| 8.5 讨论 | 第90-91页 |
| 8.6 小结 | 第91-92页 |
| 全文总结与展望 | 第92-93页 |
| 文献综述 | 第93-98页 |
| 参考文献 | 第98-114页 |
| 第一部分 正文参考文献 | 第98-107页 |
| 第二部分 综述参考文献 | 第107-114页 |
| 附录 | 第114-116页 |
| 读博士学位期间取得的研究成果 | 第116-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 作者简介 | 第120页 |
