| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 英文缩略词一览表 | 第10-12页 |
| 第1章 引言 | 第12-24页 |
| 1.1 胃癌防治现状 | 第12-13页 |
| 1.2 Rgnef与肿瘤研究进展 | 第13-20页 |
| 1.2.1 Rgnef的结构特征 | 第13-15页 |
| 1.2.2 Rgnef参与的信号通路 | 第15-20页 |
| 1.3 CRISPR/Cas9技术 | 第20-24页 |
| 1.3.1 CRISPR/Cas9系统的结构和组成 | 第21-22页 |
| 1.3.2 CRISPR/Cas9系统的作用机制 | 第22-24页 |
| 第2章 本课题的研究内容与意义、技术路线及创新之处 | 第24-26页 |
| 2.1 研究内容与意义 | 第24页 |
| 2.2 技术路线 | 第24-25页 |
| 2.3 创新之处 | 第25-26页 |
| 第3章 Cas9/Rgnef质粒设计、构建及Rgnef-/-SGC7901、Rgnef+/-SGC7901细胞系构建 | 第26-60页 |
| 3.1 实验材料、试剂及相关仪器 | 第26-34页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第26-27页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第27-28页 |
| 3.1.3 主要实验设备 | 第28页 |
| 3.1.4 主要实验试剂配置 | 第28-34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-44页 |
| 3.2.1 sgRNAs靶点序列设计、合成及Cas9/Rgnef表达载体的构建 | 第34-38页 |
| 3.2.2 Rgnef-/-SGC7901和Rgnef+/- SGC7901细胞系构建 | 第38-44页 |
| 3.3 实验结果 | 第44-57页 |
| 3.3.1 sgRNAs靶点序列设计及Cas9/Rgnef表达载体的构建结果 | 第44-49页 |
| 3.3.2 Rgnef-/-SGC7901和Rgnef+/-SGC7901细胞系构建结果 | 第49-57页 |
| 3.4 讨论 | 第57-60页 |
| 第4章 Rgnef基因敲除后对人胃癌细胞生物学行为的影响 | 第60-76页 |
| 4.1 实验材料、试剂及相关仪器 | 第60-62页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第60页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第60-61页 |
| 4.1.3 主要实验设备 | 第61页 |
| 4.1.4 主要实验试剂配置 | 第61-62页 |
| 4.2 实验方法 | 第62-67页 |
| 4.2.1 MTT法 | 第62-63页 |
| 4.2.2 平板克隆法 | 第63页 |
| 4.2.3 损伤修复法 | 第63页 |
| 4.2.4 Transwell法 | 第63-64页 |
| 4.2.5 考马斯亮蓝染色法 | 第64-65页 |
| 4.2.6 扫描电镜法 | 第65页 |
| 4.2.7 PI单染法检测细胞周期 | 第65-66页 |
| 4.2.8 Annexin V-FITC双染法检测细胞凋亡 | 第66页 |
| 4.2.9 DAPI荧光检测法 | 第66-67页 |
| 4.3 实验结果 | 第67-74页 |
| 4.3.1 Rgnef基因敲除以后对SGC7901细胞增殖、运动及侵袭能力的影响 | 第67-70页 |
| 4.3.2 Rgnef基因敲除以后对SGC7901细胞形态学的影响 | 第70-72页 |
| 4.3.3 Rgnef基因敲除以后对SGC7901细胞周期和凋亡的影响 | 第72-74页 |
| 4.4 讨论 | 第74-76页 |
| 结论 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-94页 |
| 致谢 | 第94-96页 |
| 攻读硕士学位期间研究成果 | 第96页 |
