| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 符号说明 | 第20-23页 |
| 1 前言 | 第23-50页 |
| 1.1 胃癌的研究现状 | 第23-26页 |
| 1.1.1 胃癌的发病原因 | 第23-25页 |
| 1.1.2 胃癌的治疗形势 | 第25-26页 |
| 1.2 染色质和表观遗传调控 | 第26-27页 |
| 1.3 组蛋白修饰 | 第27-30页 |
| 1.3.1 组蛋白乙酰化 | 第28-29页 |
| 1.3.2 组蛋白的甲基化 | 第29页 |
| 1.3.3 组蛋白的其他修饰 | 第29-30页 |
| 1.4 组蛋白特异性去甲基化酶1(Histone specific demethylase 1,LSD1) | 第30-35页 |
| 1.4.1 LSD1结构和去甲基化机制 | 第30-31页 |
| 1.4.2 LSD1抑制基因转录的功能 | 第31-32页 |
| 1.4.3 LSD1激活基因转录的功能 | 第32-33页 |
| 1.4.4 LSD1生物学功能及与疾病的关系 | 第33-34页 |
| 1.4.5 LSD1抑制剂 | 第34-35页 |
| 1.5 人转化生长因子β1 (TGF β1)诱导EMT过程中的表观遗传调控 | 第35-39页 |
| 1.5.1 TGF β1信号通路的传导与功能 | 第35-38页 |
| 1.5.2 TGF β1对EMT过程的调控作用 | 第38-39页 |
| 1.5.3 EMT过程中的表观遗传调控 | 第39页 |
| 1.6 本课题的主要研究目的和内容 | 第39页 |
| 参考文献 | 第39-50页 |
| 2 LSD1和TGF β1在胃癌组织中的表达量及二者的相关性分析 | 第50-62页 |
| 引言 | 第50-51页 |
| 2.1 实验材料 | 第51-53页 |
| 2.1.1 主要实验仪器 | 第51-52页 |
| 2.1.2 主要试剂和耗材 | 第52-53页 |
| 2.1.3 常用溶液配制 | 第53页 |
| 2.2 实验方法 | 第53-56页 |
| 2.2.1 组织切片的制备 | 第53-54页 |
| 2.2.2 免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC) | 第54-56页 |
| 2.2.3 统计分析 | 第56页 |
| 2.3 实验结果 | 第56-59页 |
| 2.3.1 LSD1和TGF β1在胃癌组织和癌旁组织中的表达分析 | 第56-57页 |
| 2.3.2 LSD1的表达与胃癌临床病理特征的关系分析 | 第57-58页 |
| 2.3.3 TGF β1的表达与胃癌临床病理特征的关系 | 第58-59页 |
| 2.3.4 在胃癌组织中,LSD1与TGF β1表达的相关性分析 | 第59页 |
| 小结 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-62页 |
| 3 不同的胃癌细胞系及正常胃粘膜上皮细胞中,TGF β1诱导LSD1表达情况分析 | 第62-74页 |
| 引言 | 第62页 |
| 3.1 实验材料 | 第62-65页 |
| 3.1.1 主要仪器设备 | 第62-63页 |
| 3.1.2 主要试剂耗材 | 第63-64页 |
| 3.1.3 常用溶液配制 | 第64-65页 |
| 3.2 实验方法 | 第65-71页 |
| 3.2.1 细胞系来源及培养条件 | 第65页 |
| 3.2.2 细胞总蛋白的提取 | 第65-66页 |
| 3.2.3 组蛋白的提取: | 第66页 |
| 3.2.4 BCA蛋白定量法 | 第66-67页 |
| 3.2.5 Western blotting实验 | 第67-68页 |
| 3.2.6 胃癌细胞系MGC-803荷瘤小鼠模型的建立 | 第68-69页 |
| 3.2.7 组织RNA提取及RNA反转录实验 | 第69-70页 |
| 3.2.8 实时荧光定量PCR实验 | 第70-71页 |
| 3.3 实验结果 | 第71-73页 |
| 3.3.1 在胃癌细胞系MGC-803,HGC-27,SGC-7901中,TGF β1诱导的LSD1高表达 | 第71-72页 |
| 3.3.2 在正常胃粘膜上皮细胞中,TGF β1对LSD1表达的影响 | 第72页 |
| 3.3.3 在荷瘤小鼠瘤体内TGF β1对LSD1表达量的影响 | 第72-73页 |
| 小结 | 第73-74页 |
| 4 TGF β1调控LSD1表达的机制研究 | 第74-95页 |
| 引言 | 第74-75页 |
| 4.1 TGF β1上调LSD1的表达非依赖于SMADs的激活 | 第75-76页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第75页 |
| 4.1.2 实验步骤和方法 | 第75页 |
| 4.1.3 实验结果 | 第75-76页 |
| 4.2 MGC-803细胞内,TGF β1激活ERK1/2和NF-κB通路 | 第76-78页 |
| 4.2.1 主要试剂 | 第76页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第76-77页 |
| 4.2.3 实验结果 | 第77-78页 |
| 4.3 ERK1/2和NF-κB介导了TGF β1对LSD1的上调作用 | 第78-82页 |
| 4.3.1 RNA干扰的原理 | 第78页 |
| 4.3.2 实验材料和方法 | 第78-79页 |
| 4.3.3 实验结果 | 第79-82页 |
| 4.4 TGF β1诱导的ERK1/2磷酸化促进p65入核 | 第82-84页 |
| 4.4.1 实验目的 | 第82页 |
| 4.4.2 实验材料与方法 | 第82-83页 |
| 4.4.3 实验结果 | 第83-84页 |
| 4.5 TGF β1激活NF-κB的入核,促进p300对LSD1的转录调控 | 第84-90页 |
| 4.5.1 实验设计依据和目的 | 第84-85页 |
| 4.5.2 实验方法及原理 | 第85-89页 |
| 4.5.3 实验结果 | 第89-90页 |
| 4.6 TGF β1-ERK1/2-NF-κB-p300系列激活对LSD1启动子活性的调控 | 第90-93页 |
| 4.6.1 实验原理和目的 | 第90-91页 |
| 4.6.2 实验方法 | 第91-92页 |
| 4.6.3 实验结果 | 第92-93页 |
| 小结 | 第93页 |
| 参考文献 | 第93-95页 |
| 5 胃癌细胞及胃癌组织内LSD1对TGF β1的调控作用研究 | 第95-122页 |
| 引言 | 第95页 |
| 5.1 LSD1低表达慢病毒的构建及低表达LSD1稳转细胞系的建立 | 第95-102页 |
| 5.1.1 CRISPR/Cas9技术原理 | 第95-97页 |
| 5.1.2 实验材料和方法 | 第97-101页 |
| 5.1.3 实验结果 | 第101-102页 |
| 5.2 不同胃癌细胞内LSD1对TGF β1的调控作用 | 第102-107页 |
| 5.2.1 实验设计与方法 | 第102-105页 |
| 5.2.2 实验结果 | 第105-107页 |
| 5.3 在荷瘤小鼠模型中,LSD1对TGF β1及EMT相关蛋白的调控作用 | 第107-109页 |
| 5.3.1 实验设计和方法 | 第107页 |
| 5.3.2 实验结果 | 第107-109页 |
| 5.4 胃癌组织中,LSD1和TGF β1及EMT相关蛋白表达的相关性分析 | 第109-114页 |
| 5.4.1 实验材料与方法 | 第109-111页 |
| 5.4.2 实验结果 | 第111-114页 |
| 5.5 LSD1在胃癌细胞MGC-803内的功能性研究 | 第114-119页 |
| 5.5.1 实验设计与目的 | 第114页 |
| 5.5.2 实验方法 | 第114-116页 |
| 5.5.3 实验结果分析 | 第116-119页 |
| 小结 | 第119-120页 |
| 参考文献 | 第120-122页 |
| 6 LSD1对胃癌转移的影响及在TGF β1诱导胃癌细胞EMT过程中的功能研究 | 第122-130页 |
| 引言 | 第122页 |
| 6.1 LSD1在TGF β1诱导胃癌细胞EMT过程中的调节功能 | 第122-125页 |
| 6.1.1 Transwell实验原理 | 第122页 |
| 6.1.2 实验材料与方法 | 第122-123页 |
| 6.1.3 实验结果 | 第123-125页 |
| 6.2 LSD1的低表达对胃癌细胞MGC-803体内转移的影响 | 第125-128页 |
| 6.2.1 小动物活体成像原理及应用 | 第125-126页 |
| 6.2.2 实验材料和方法 | 第126-127页 |
| 6.2.3 实验结果 | 第127-128页 |
| 小结 | 第128-129页 |
| 参考文献 | 第129-130页 |
| 7 在胃粘膜上皮细胞GES-1中TGF β1对ERK1/2和NF-κB的调控作用 | 第130-132页 |
| 7.1 实验设计与目的 | 第130页 |
| 7.2 实验方法 | 第130页 |
| 7.3 实验结果 | 第130-131页 |
| 小结 | 第131-132页 |
| 8 雌激素抑制胃癌细胞MGC-803转移机制的初步研究 | 第132-142页 |
| 引言 | 第132-133页 |
| 8.1 雌激素对胃癌细胞增殖的影响 | 第133-134页 |
| 8.1.1 实验原理和方法 | 第133页 |
| 8.1.2 实验结果 | 第133-134页 |
| 8.2 雌激素对胃癌细胞转移的影响 | 第134-136页 |
| 8.2.1 划痕实验的原理 | 第134页 |
| 8.2.2 实验方法 | 第134页 |
| 8.2.3 实验结果 | 第134-136页 |
| 8.3 雌激素对LSD1的调控机制研究 | 第136-140页 |
| 8.3.1 实验设计与目的 | 第136页 |
| 8.3.2 实验材料与方法 | 第136-138页 |
| 8.3.3 实验结果 | 第138-140页 |
| 小结 | 第140页 |
| 参考文献 | 第140-142页 |
| 结论 | 第142-144页 |
| 个人简历及在学期间发表论文及研究成果 | 第144-146页 |
| 致谢 | 第146页 |
