| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第1章 综述 | 第10-16页 |
| 1.1 引言 | 第10页 |
| 1.2 分枝杆菌Ⅶ型分泌系统简介 | 第10-11页 |
| 1.3 结核分枝杆菌ESX-5分泌系统的组成 | 第11-13页 |
| 1.3.1 ESX-5基因簇内的ESX核心组分 | 第11-12页 |
| 1.3.2 ESX-5基因簇内部的PE/PPE基因 | 第12页 |
| 1.3.3 ESX-5通道组分 | 第12-13页 |
| 1.3.4 ESX-5基因簇内其他基因 | 第13页 |
| 1.4 ESX-5的功能介绍 | 第13-14页 |
| 1.4.1 ESX-5分泌系统分泌多种蛋白 | 第13页 |
| 1.4.2 ESX-5分泌的效应分子激活巨噬细胞诱导炎性产生 | 第13-14页 |
| 1.5 目前已知的通过ESX-5分泌系统进行分泌的蛋白及可能的机制 | 第14-15页 |
| 1.5.1 目前已知的通过ESX-5分泌系统进行分泌的蛋白 | 第14页 |
| 1.5.2 ESX-5分泌模式及机制 | 第14-15页 |
| 1.6 总结和展望 | 第15-16页 |
| 第2章 前言 | 第16-17页 |
| 第3章 实验材料和方法 | 第17-30页 |
| 3.1 实验材料 | 第17-19页 |
| 3.1.1 实验菌株、载体和细胞 | 第17页 |
| 3.1.2 培养条件及培养基 | 第17-18页 |
| 3.1.3 实验所需试剂 | 第18-19页 |
| 3.1.4 试验仪器 | 第19页 |
| 3.2 实验方法 | 第19-30页 |
| 3.2.1 结核分枝杆菌PPE19(Rv1361c)基因的扩增 | 第19-20页 |
| 3.2.2 Rvl361c PCR产物的回收 | 第20页 |
| 3.2.3 制备大肠杆菌感受态细胞 | 第20页 |
| 3.2.4 大肠杆菌的转化(热激法) | 第20-21页 |
| 3.2.5 PPE19(Rv1361c)基因的TA克隆 | 第21页 |
| 3.2.6 重组质粒的提取 | 第21页 |
| 3.2.7 PPE19(Rv1361c)重组质粒的构建 | 第21-22页 |
| 3.2.8 PPE19(Rv1361c)重组蛋白在大肠杆菌中的表达和纯化 | 第22-23页 |
| 3.2.9 PPE19(Rv1361c)重组耻垢分枝杆菌的构建 | 第23-25页 |
| 3.2.10 PPE19(Rv1361c)重组蛋白在耻垢分枝杆菌中的亚细胞定位分析 | 第25-26页 |
| 3.2.11 过表达PPE19(Rv1361c)对耻垢分枝杆菌对SDS耐受的影响 | 第26页 |
| 3.2.12 过表达PPE19(Rv1361c)蛋白对耻垢分枝杆菌饥饿、酸性以及氧化压力的影响 | 第26页 |
| 3.2.13 过表达PPE19(Rv1361c)重组蛋白对耻垢分枝杆菌抗生素耐受的影响 | 第26页 |
| 3.2.14 过表达PPE19(Rv1361c)重组蛋白对耻垢分枝杆菌亚硝酸钠耐受的影响 | 第26-27页 |
| 3.2.15 Rv1361c对相关基因转录水平的影响 | 第27-28页 |
| 3.2.16 M.s-pNIT-Rv1361c重组菌侵染RAW264.7巨噬细胞后存活率检测 | 第28-30页 |
| 第4章 结果与分析 | 第30-41页 |
| 4.1 从基因组中扩增Rvl361c基因 | 第30页 |
| 4.2 构建BL21-pET-28(+)-Rv1361c重组大肠杆菌 | 第30-31页 |
| 4.3 PPE19(Rv1361c)重组蛋白在大肠杆菌BL21中的表达纯化 | 第31-32页 |
| 4.4 构建pNIT-Rv1361c重组耻垢分枝杆菌 | 第32页 |
| 4.5 pNIT(Myc)-PPE19重组蛋白在耻垢分枝杆菌中成功表达 | 第32-33页 |
| 4.6 PPE19定位在耻垢分枝杆菌细胞表面 | 第33-34页 |
| 4.7 PPE19对重组耻垢分枝杆菌菌落形态和生物膜形成没有明显影响 | 第34-35页 |
| 4.8 PPE19增强耻垢分枝杆菌在稳定期的生长 | 第35页 |
| 4.9 PPE19增强耻垢分枝杆菌在营养饥饿以及酸性条件下的存活 | 第35-36页 |
| 4.10 PPE19增强耻垢分枝杆菌对SDS的耐受 | 第36-37页 |
| 4.11 PPE19增强耻垢分枝杆菌对氧化剂联氨的耐受 | 第37页 |
| 4.12 PPE19增强耻垢分枝杆菌对异烟肼药物的耐受 | 第37-38页 |
| 4.13 PPE19增强耻垢分枝杆菌对诺氟沙星的敏感性 | 第38页 |
| 4.14 PPE19增强耻垢分枝杆菌对RNS的敏感 | 第38-39页 |
| 4.15 PPE19增强耻垢分枝杆菌在RAW264.7巨噬细胞中的存活 | 第39-40页 |
| 4.16 PPE19对巨噬细胞内细胞因子没有明显改变 | 第40-41页 |
| 第5章 结论与展望 | 第41-43页 |
| 5.1 实验结论 | 第41页 |
| 5.2 讨论分析 | 第41-42页 |
| 5.3 展望 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-47页 |
| 致谢 | 第47-49页 |
| 在学期间所发表的文章 | 第49页 |
