| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 中英文缩略词表 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-21页 |
| 1 鱼类性别决定 | 第13-14页 |
| 2 Gadd45g 基因的研究进展 | 第14-16页 |
| 3 半滑舌鳎研究概况 | 第16-18页 |
| 3.1 半滑舌鳎简介 | 第16-17页 |
| 3.2 半滑舌鳎研究进展 | 第17-18页 |
| 4 染色体荧光原位杂交 | 第18-20页 |
| 5 本研究的目的与意义 | 第20-21页 |
| 第二章 Gadd45g 基因在半滑舌鳎中的克隆与功能分析 | 第21-51页 |
| 1 材料 | 第21-22页 |
| 1.1 实验用鱼 | 第21页 |
| 1.2 主要试剂 | 第21-22页 |
| 1.3 信息材料 | 第22页 |
| 1.4 主要仪器 | 第22页 |
| 2 方法 | 第22-32页 |
| 2.1 样品采集 | 第22-23页 |
| 2.2 生理性别及遗传性别鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2.1 生理性别的鉴定 | 第23页 |
| 2.2.2 遗传性别的鉴定 | 第23-24页 |
| 2.3 组织中总 RNA 的提取 | 第24-25页 |
| 2.4 cDNA 第一链的合成 | 第25页 |
| 2.5 基因组序列片段在 cDNA 中验证 | 第25-27页 |
| 2.5.1 序列验证引物的设计 | 第25-26页 |
| 2.5.2 PCR 反应验证序列 | 第26页 |
| 2.5.3 PCR 产物的纯化 | 第26-27页 |
| 2.5.4 目的片段的连接、转化 | 第27页 |
| 2.5.5 目的片段的测序 | 第27页 |
| 2.6 RACE 反应 | 第27-30页 |
| 2.6.1 RACE-Ready cDNA 的合成： | 第27-28页 |
| 2.6.2 RACE 引物的设计 | 第28-29页 |
| 2.6.3 两步 PCR | 第29-30页 |
| 2.6.4 目的片段回收与测序 | 第30页 |
| 2.7 序列拼接及理化性质分析 | 第30页 |
| 2.8 基因进化分析 | 第30页 |
| 2.9 半滑舌鳎 3 个 Gadd45g 同源基因的表达分析 | 第30-32页 |
| 2.9.1 定量引物的设计 | 第30-31页 |
| 2.9.2 半滑舌鳎 3 个 Gadd45g 同源基因的组织表达 | 第31页 |
| 2.9.3 半滑舌鳎 3 个 Gadd45g 同源基因的在性腺发育中的表达 | 第31-32页 |
| 3. 结果 | 第32-44页 |
| 3.1 半滑舌鳎遗传性别和生理性别的确定 | 第32页 |
| 3.2 半滑舌鳎 Gadd45g 同源基因 cDNA 序列的克隆与序列分析 | 第32-37页 |
| 3.2.1 半滑舌鳎 Gadd45g1 cDNA 序列的克隆与序列分析 | 第33-34页 |
| 3.2.2 半滑舌鳎 Gadd45g2 cDNA 序列的克隆与序列分析 | 第34-35页 |
| 3.2.3 半滑舌鳎 Gadd45g3 cDNA 序列的克隆与序列分析 | 第35-37页 |
| 3.3 半滑舌鳎 3 种 Gadd45g 同源基因的氨基酸序列比对及系统进化树的构建 | 第37-39页 |
| 3.4 Gadd45g 同源基因间的 Ka/Ks 比值 | 第39-41页 |
| 3.4.1 半滑舌鳎和其他硬骨鱼中的 Gadd45g 型基因 Ka/Ks 比值 | 第39-40页 |
| 3.4.2 半滑舌鳎 Gadd45g3 基因与其他同源基因 Ka/Ks 比值 | 第40-41页 |
| 3.5 半滑舌鳎中 3 种 Gadd45g 同源基因的表达 | 第41-44页 |
| 3.5.1 半滑舌鳎中 3 种 Gadd45g 同源基因在成鱼各组织中的表达 | 第41-42页 |
| 3.5.2 半滑舌鳎中 3 种 Gadd45g 基因在伪雄鱼性腺中的表达 | 第42-43页 |
| 3.5.3 半滑舌鳎中 3 种 Gadd45g 同源基因在仔鱼性腺发育各时期中的表达 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-51页 |
| 4.1 半滑舌鳎中 3 种 Gadd45g 同源基因的结构与序列分析 | 第44-46页 |
| 4.2 半滑舌鳎 3 种 Gadd45g 基因的适应性进化分析 | 第46-47页 |
| 4.2.1 半滑舌鳎 Gadd45g1 和 Gadd45g2 基因的适应性进化分析 | 第46页 |
| 4.2.2 半滑舌鳎 Gadd45g3 基因的适应性进化分析 | 第46-47页 |
| 4.3 半滑舌鳎中 3 种 Gadd45g 基因的表达分析 | 第47-51页 |
| 4.3.1 半滑舌鳎中 3 种 Gadd45g 基因的组织表达分析 | 第47-48页 |
| 4.3.2 半滑舌鳎中 3 种 Gadd45g 基因的性腺表达分析 | 第48页 |
| 4.3.3 半滑舌鳎 3 种 Gadd45g 基因的仔鱼性腺表达及功能分析 | 第48-51页 |
| 第三章 半滑舌鳎 Gadd45g 基因的染色体荧光定位 | 第51-63页 |
| 1 材料 | 第51-52页 |
| 1.1 实验用鱼及文库 | 第51页 |
| 1.2 主要仪器 | 第51页 |
| 1.3 主要试剂 | 第51-52页 |
| 2 方法 | 第52-57页 |
| 2.1 半滑舌鳎相关基因的 FISH 引物设计 | 第52页 |
| 2.2 基因在半滑舌鳎 BAC 文库中的筛选定位 | 第52-55页 |
| 2.2.1 基因在一级混合池中的筛选 | 第52-53页 |
| 2.2.2 二级池的构建 | 第53-54页 |
| 2.2.3 质粒的提取 | 第54页 |
| 2.2.4 基因在二级池中的筛选 | 第54页 |
| 2.2.5 目的基因在 BAC 文库阳性克隆的验证 | 第54-55页 |
| 2.3 BAC 克隆在染色体中的 FISH 定位 | 第55-57页 |
| 2.3.1 标记探针的制备 | 第55页 |
| 2.3.2 染色体标本的制备 | 第55-56页 |
| 2.3.3 探针与染色体杂交 | 第56页 |
| 2.3.4 杂交后洗脱和镜检 | 第56-57页 |
| 3 结果 | 第57-60页 |
| 3.1 基因在半滑舌鳎 BAC 文库中的位置 | 第57页 |
| 3.1.1 3 个基因在半滑舌鳎 BAC 文库板池的检出 | 第57页 |
| 3.1.2 3 个基因在半滑舌鳎 BAC 文库二级池的检出 | 第57页 |
| 3.2 染色体和探针成功制备 | 第57-58页 |
| 3.3 BAC 克隆在染色体中的定位 | 第58-60页 |
| 4 讨论 | 第60-63页 |
| 4.1 半滑舌鳎 BAC-FISH 技术体系 | 第60-61页 |
| 4.2 Gadd45g 基因在半滑舌鳎染色体上的位置 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 个人简历 | 第74页 |
| 发表的学术论文 | 第74-75页 |
