| 符号说明 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 1 前言 | 第10-19页 |
| 1.1 菜豆普通花叶病毒(BCMV) | 第10-14页 |
| 1.1.1 菜豆普通花叶病毒引起的花生条纹病 | 第10页 |
| 1.1.2 BCMV的分子生物学特征 | 第10-12页 |
| 1.1.3 BCMV编码的部分蛋白功能 | 第12-14页 |
| 1.1.3.1 HC-Pro蛋白 | 第12-13页 |
| 1.1.3.2 核内含体蛋白b(Nib) | 第13页 |
| 1.1.3.3 VPg蛋白 | 第13-14页 |
| 1.2 植物RNA病毒基因组的翻译调控 | 第14-16页 |
| 1.3 植物RNA病毒基因组的复制调控 | 第16-18页 |
| 1.3.1 正单链RNA病毒基因组复制 | 第16-17页 |
| 1.3.2 病毒编码的RdRp蛋白的获得 | 第17-18页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 2 材料和方法 | 第19-33页 |
| 2.1 材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 质粒,种子和菌株 | 第19页 |
| 2.1.2 花生条纹病的疑似样品 | 第19页 |
| 2.1.3 试验仪器及设备 | 第19页 |
| 2.1.4 分子生物学试剂 | 第19页 |
| 2.1.5 引物及测序 | 第19-20页 |
| 2.2 方法 | 第20-33页 |
| 2.2.1 植物总RNA的提取 | 第20页 |
| 2.2.2 RT-PCR检测 | 第20-21页 |
| 2.2.3 重叠PCR | 第21-22页 |
| 2.2.4 cDNA末端快速扩增(RACE) | 第22-24页 |
| 2.2.4.1 3 ’RACE(cDNA3’末端快速扩增) | 第22页 |
| 2.2.4.2 5 ’RACE(cDNA5’末端快速扩增) | 第22-24页 |
| 2.2.5 核酸的沉淀和浓缩 | 第24页 |
| 2.2.6 PCR产物或酶切产物的胶回收 | 第24-25页 |
| 2.2.7 连接反应 | 第25页 |
| 2.2.8 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第25页 |
| 2.2.9 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第25-26页 |
| 2.2.10 菌落PCR筛选重组质粒 | 第26页 |
| 2.2.11 碱裂解法小量提质粒 | 第26-27页 |
| 2.2.12 酶切反应 | 第27页 |
| 2.2.13 体外转录 | 第27-28页 |
| 2.2.14 在麦胚提取物(WGE)中的体外翻译 | 第28-29页 |
| 2.2.15 原核表达 | 第29-30页 |
| 2.2.16 可溶性检测 | 第30页 |
| 2.2.17 蛋白亲和层析(MBP标签) | 第30-31页 |
| 2.2.18 RdRp介导的体外复制实验 | 第31-32页 |
| 2.2.19 进化分析 | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-48页 |
| 3.1 BCMV5’UTR和3’UTR对不依赖帽子翻译的调控作用 | 第33-40页 |
| 3.1.1 不同地区花生病样的BCMV检测 | 第33-34页 |
| 3.1.2 不同地区BCMV分离物的基因组5’UTR和3’UTR的克隆 | 第34-38页 |
| 3.1.2.1 BCMV3’RACE及3’UTR序列进化分析 | 第34-37页 |
| 3.1.2.2 BCMV5’RACE及5’UTR序列进化分析 | 第37-38页 |
| 3.1.3 BCMV的5’UTR和3’UTR对翻译的调控作用 | 第38页 |
| 3.1.4 BCMV的5’UTR核心调控区域的定位 | 第38-40页 |
| 3.2 BCMVNib介导的体外复制体系的创建 | 第40-48页 |
| 3.2.1 BCMVNib编码序列克隆及分析 | 第40-44页 |
| 3.2.2 BCMVNib原核表达载体构建 | 第44页 |
| 3.2.3 BCMVNib原核表达 | 第44-46页 |
| 3.2.4 BCMVRdRp可溶性蛋白的亲和层析 | 第46页 |
| 3.2.5 体外转录制备BCMV的不同RNA片段 | 第46-47页 |
| 3.2.6 BCMVNib介导的体外复制实验 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 4.1 BCMV5’末端和3’末端序列 | 第48页 |
| 4.2 BCMV翻译调控 | 第48页 |
| 4.3 BCMVNib的纯化 | 第48-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 附表 | 第58-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
