| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第14-30页 |
| 1 菊粉酶的研究进展 | 第14-26页 |
| 1.1 菊粉 | 第14-16页 |
| 1.1.1 菊粉的结构 | 第14-15页 |
| 1.1.2 菊粉的物化性质 | 第15页 |
| 1.1.3 菊粉的来源和应用 | 第15-16页 |
| 1.2 菊粉酶 | 第16-19页 |
| 1.2.1 菊粉酶的性质 | 第16-19页 |
| 1.3 可产菊粉酶的微生物 | 第19-21页 |
| 1.3.1 丝状真菌 | 第19页 |
| 1.3.2 酵母菌 | 第19-20页 |
| 1.3.3 细菌 | 第20-21页 |
| 1.3.4 放线菌 | 第21页 |
| 1.4 产菊粉酶微生物的遗传改良 | 第21-25页 |
| 1.4.1 物理、化学诱变 | 第22-23页 |
| 1.4.2 基因敲除 | 第23页 |
| 1.4.3 菊粉酶基因的外源表达 | 第23-25页 |
| 1.5 菊粉酶的应用 | 第25-26页 |
| 1.5.1 生产低聚果糖 | 第25页 |
| 1.5.2 生产高果糖浆 | 第25页 |
| 1.5.3 生产生物燃料 | 第25-26页 |
| 2 以菊芋为原料产生物乙醇的研究进展 | 第26-28页 |
| 2.1 菊芋作为生产原料来源生产生物乙醇 | 第26-27页 |
| 2.2 工业中产酒精微生物 | 第27页 |
| 2.3 生物乙醇的生产工艺 | 第27-28页 |
| 3 本论文研究背景、内容及意义 | 第28-30页 |
| 第二章 外切菊粉酶基因W14-3-INU1在Saccharomyces sp.W0中表达 | 第30-54页 |
| 前言 | 第30-31页 |
| 1 材料 | 第31-35页 |
| 1.1 菌株与质粒 | 第31-32页 |
| 1.2 培养基与试剂 | 第32-35页 |
| 1.2.1 培养基 | 第32-33页 |
| 1.2.2 试剂 | 第33-35页 |
| 2 方法 | 第35-44页 |
| 2.1 密码子偏好性分析 | 第35页 |
| 2.2 酵母表达载体的构建 | 第35-41页 |
| 2.2.1 海洋酵母C. membranifaciens subsp.flavinogenie W14-3菌株基因组DNA的提取 | 第36-37页 |
| 2.2.2 PCR扩增菊粉内切酶基因 | 第37-38页 |
| 2.2.3 PCR产物与T载体连接 | 第38页 |
| 2.2.4 转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第38-39页 |
| 2.2.5 筛选阳性转化子 | 第39页 |
| 2.2.6 双酶切 | 第39-40页 |
| 2.2.7 利用T_4连接酶连接目的基因和表达载体 | 第40页 |
| 2.2.8 表达载体转化大肠杆菌DH5α | 第40-41页 |
| 2.2.9 表达载体pMIRSC11-W14-3-INU1线性化处理并回收 | 第41页 |
| 2.3 转化Saccharomyces sp.W0 | 第41-43页 |
| 2.3.1 线性片段pMIRSC11-W14-3-INU1转化Saccharomyces sp.W0 | 第41-42页 |
| 2.3.2 获得阳性转化子 | 第42页 |
| 2.3.3 基因组插入片段的检测 | 第42-43页 |
| 2.4 转化子外切重组菊粉酶活力测定 | 第43页 |
| 2.5 实时荧光定量PCR比较外切菊粉酶基因的表达量 | 第43-44页 |
| 2.6 测定转化子的产酶时间和细胞干重 | 第44页 |
| 3 结果与讨论 | 第44-53页 |
| 3.1 菊粉外切酶基因密码子在酿酒酵母中的使用情况 | 第44-46页 |
| 3.2 含W14-3-INU1菊粉酶基因表达载体的构建 | 第46-49页 |
| 3.2.1 双酶切pMD19-T-W14-3-INU1和pMIRSC11 | 第46-48页 |
| 3.2.2 表达质粒pMIRSC11-W14-3-INU1线性化 | 第48页 |
| 3.2.3 转化Saccharomyces sp.W12d | 第48-49页 |
| 3.3 转化子的筛选和验证 | 第49-51页 |
| 3.3.1 转化子插入片段的检测 | 第50页 |
| 3.3.2 转化子W14与Saccharomyces sp.W0的荧光定量测定 | 第50-51页 |
| 3.4 产酶与细胞生长的关系 | 第51-53页 |
| 4 本章小结 | 第53-54页 |
| 第三章 利用转化子W14以菊粉为原料同步生产酒精 | 第54-62页 |
| 0 前言 | 第54-55页 |
| 1 材料 | 第55-56页 |
| 1.1 菌株 | 第55页 |
| 1.2 培养基、试剂和仪器 | 第55-56页 |
| 2 方法 | 第56-57页 |
| 2.1 制备发酵种子液 | 第56页 |
| 2.2 测定发酵液中还原糖和总糖含量 | 第56页 |
| 2.3 测定发酵液酒精含量 | 第56页 |
| 2.4 不同种子液接种量对转化子生产乙醇的影响 | 第56-57页 |
| 2.5 转化子W14与W0菌株产酒精的比较 | 第57页 |
| 2.6 2.0-L密闭发酵体系发酵生产酒精 | 第57页 |
| 3 结果和讨论 | 第57-61页 |
| 3.1 不同接种量与发酵失重的关系 | 第57-58页 |
| 3.2 转化子W14与W0菌株产酒精的比较 | 第58-59页 |
| 3.3 2.0-L密闭发酵体系同步糖化发酵生产酒精 | 第59-61页 |
| 4 本章小结 | 第61-62页 |
| 第四章 内切菊粉酶基因EinuA和外切菊粉酶基因W14-3-INU1在Saccharomyces sp.W0中共同表达 | 第62-77页 |
| 0 前言 | 第62-63页 |
| 1 材料 | 第63-64页 |
| 1.1 菌株、基因与质粒 | 第63-64页 |
| 1.2 培养基与试剂 | 第64页 |
| 1.2.1 培养基 | 第64页 |
| 1.2.2 试剂 | 第64页 |
| 2 方法 | 第64-69页 |
| 2.1 酵母表达载体的构建流程图 | 第64-68页 |
| 2.1.1 菊粉内切酶基因和菊粉外切酶基因共同转化Saccharomycessp.W0流程图 | 第66页 |
| 2.1.2 PCR扩增菊粉内切酶基因 | 第66-67页 |
| 2.1.3 PCR产物与T载体连接,双酶切质粒 | 第67页 |
| 2.1.4 利用T_4连接酶连接目的基因和表达载体 | 第67-68页 |
| 2.1.5 表达载体pMIDSC31-EinuA线性化处理并回收 | 第68页 |
| 2.2 线性化片段pMD19-T-EinuA与pMD19-T-W14-3-INU1共同转化Saccharomyces sp. W12d | 第68页 |
| 2.3 实时荧光定量分析EinuA和W14-3-INU1基因在Saccharomyces sp.W0中的表达情况 | 第68-69页 |
| 3 结果与讨论 | 第69-76页 |
| 3.1 酵母表达载体pMIDSC31-EinuA的构建 | 第69-70页 |
| 3.1.1 利用PCR技术扩增菊粉内切酶基因EinuA | 第69页 |
| 3.1.2 双酶切质粒pMDl9-T-EinuA和pMIDSC31 | 第69-70页 |
| 3.2 EinuA和W14-3-INU1基因共同转化Saccharomyces sp.W0株 | 第70-71页 |
| 3.3 目的基因在转化子中的检测 | 第71页 |
| 3.4 阳性转化子筛选 | 第71-72页 |
| 3.5 通过荧光定量PCR分析菊粉内切和外切酶基因的表达量 | 第72-73页 |
| 3.6 以菊粉为底物在150mL的发酵体系中生产酒精 | 第73页 |
| 3.7 转化子WE85、W0菌株和转化子W14产酒精的比较 | 第73-76页 |
| 4 本章小结 | 第76-77页 |
| 论文总结与创新点 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-83页 |
| 个人简历 | 第83页 |
| 发表的学术论文 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
