| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 序言 | 第9-28页 |
| 1.1 甘蔗的概况 | 第9-12页 |
| 1.1.1 甘蔗简介 | 第9页 |
| 1.1.2 甘蔗是我国重要的糖料作物 | 第9页 |
| 1.1.3 甘蔗是重要的能源作物 | 第9-10页 |
| 1.1.4 甘蔗副产品利用 | 第10页 |
| 1.1.5 甘蔗遗传转化的研究进展 | 第10-12页 |
| 1.2 甘蔗的主要病害 | 第12-16页 |
| 1.2.1 甘蔗的黑穗病病害 | 第12-13页 |
| 1.2.2 甘蔗的赤腐病病害 | 第13页 |
| 1.2.3 甘蔗的梢腐病病害 | 第13-14页 |
| 1.2.4 甘蔗的凤梨病病害 | 第14-15页 |
| 1.2.5 甘蔗的褐条病病害 | 第15页 |
| 1.2.6 甘蔗的黄斑病病害 | 第15-16页 |
| 1.3 防御素的研究进展 | 第16-27页 |
| 1.3.1 防御素的结构和类型 | 第16-18页 |
| 1.3.2 防御素的基本作用机制 | 第18-19页 |
| 1.3.3 防御素的生物活性 | 第19-21页 |
| 1.3.4 植物防御素的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.3.5 蒺藜苜蓿植物防御素的研究进展 | 第22-27页 |
| 1.4 本论文的研究目的,研究内容和技术路线 | 第27-28页 |
| 1.4.1 研究目的 | 第27-28页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第28页 |
| 1.4.3 技术路线 | 第28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-46页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第28页 |
| 2.1.2 质粒及菌种 | 第28-29页 |
| 2.1.3 酶与生化试剂 | 第29页 |
| 2.2 培养基及常用抗生素、激素的配制 | 第29-30页 |
| 2.2.1 培养基的配制 | 第29页 |
| 2.2.2 抗生素及激素的配制 | 第29-30页 |
| 2.3 实验仪器 | 第30页 |
| 2.4 native MsDef1植物表达载体的pMsDN的构建 | 第30-36页 |
| 2.4.1 质粒pPZP-212和pCAMBIA3300的大量提取及纯化 | 第30-31页 |
| 2.4.2 质粒pPZP-212和pCAMBIA3300的酶切、连接和转化 | 第31-33页 |
| 2.4.3 重组质粒DNA的小量提取 | 第33-34页 |
| 2.4.4 重组质粒pMsDN的电泳分析 | 第34页 |
| 2.4.5 重组质粒pMsDN的酶切鉴定 | 第34页 |
| 2.4.6 重组菌pMsDN的保存 | 第34-35页 |
| 2.4.7 植物表达载体pMsDN转化农杆菌 | 第35-36页 |
| 2.5 synthetic MsDef1植物表达载体的pMsDS的构建 | 第36-39页 |
| 2.5.1 质粒pPZP-202和pCAMBIA3300的大量提取及纯化 | 第36页 |
| 2.5.2 质粒pPZP-202和pCAMBIA3300的酶切、连接和转化 | 第36-37页 |
| 2.5.3 重组质粒DNA的小量提取 | 第37页 |
| 2.5.4 重组质粒pMsDS的电泳分析 | 第37-38页 |
| 2.5.5 重组质粒pMsDS的酶切鉴定 | 第38页 |
| 2.5.6 重组菌pMsDS的保存 | 第38页 |
| 2.5.7 植物表达载体pMsDS转化农杆菌 | 第38-39页 |
| 2.6 native MsDef1基因和synthetic MsDef1基因遗传转化甘蔗 | 第39-40页 |
| 2.6.1 甘蔗转化材料及其农杆菌菌液的准备 | 第39页 |
| 2.6.2 农杆菌侵染愈伤组织及共培养 | 第39-40页 |
| 2.6.3 农杆菌侵染后的愈伤组织分化成苗 | 第40页 |
| 2.6.4 甘蔗小植株的筛选培养 | 第40页 |
| 2.6.5 甘蔗抗性苗的炼苗 | 第40页 |
| 2.7 转化植株的分子检测 | 第40-46页 |
| 2.7.1 甘蔗总DNA的微量提取 | 第40-41页 |
| 2.7.2 转化植株的PCR检测 | 第41-42页 |
| 2.7.3 转化植株的RT-PCR检测 | 第42-43页 |
| 2.7.4 转化植株的Southern blot检测 | 第43-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-56页 |
| 3.1 native MsDef1植物表达载体pMsDN的构建 | 第46-47页 |
| 3.2 synthetic MsDef1植物表达载体pMsDS的构建 | 第47-48页 |
| 3.3 植物表达载体导入农杆菌 | 第48-49页 |
| 3.3.1 植物表达载体pMsDN导入农杆菌 | 第48页 |
| 3.3.2 植物表达载体pMsDS导入农杆菌 | 第48-49页 |
| 3.4 农杆菌接到的甘蔗转化 | 第49-51页 |
| 3.4.1 甘蔗胚性愈伤组织的诱导及分化成苗 | 第49页 |
| 3.4.2 农杆菌侵染后的愈伤组织分化成苗及其PPT的筛选 | 第49-50页 |
| 3.4.3 甘蔗抗性苗的炼苗 | 第50-51页 |
| 3.5 转基因植株的分子检测 | 第51-56页 |
| 3.5.1 甘蔗总DNA的微量提取 | 第51页 |
| 3.5.2 转化植株的PCR检测 | 第51-53页 |
| 3.5.3 部分转化植株的RT-PCR检测 | 第53-54页 |
| 3.5.4 Southern Blot检测 | 第54-56页 |
| 4. 结论 | 第56页 |
| 5 讨论 | 第56-59页 |
| 5.1 关于农杆菌菌株EHA105 | 第56页 |
| 5.2 关于甘蔗抗性苗的PPT筛选 | 第56-57页 |
| 5.3 关于蒺藜苜蓿防御素基因MsDef1 | 第57-58页 |
| 5.4 本实验的后续工作 | 第58-59页 |
| 6. 参考文献 | 第59-70页 |
| 7 英文缩写符号及中英文对照表 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
