| 摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 绪论 | 第15-68页 |
| 1.1 基因治疗概述 | 第15-17页 |
| 1.1.1 基因治疗的概念和分类 | 第15页 |
| 1.1.2 基因治疗的发展现状 | 第15-17页 |
| 1.2 治疗基因概述 | 第17-20页 |
| 1.2.1 含致癌基因编码的寡聚核苷酸和siRNA | 第17页 |
| 1.2.2 肿瘤抑制基因 | 第17-18页 |
| 1.2.3 血管生成抑制基因 | 第18页 |
| 1.2.4 肿瘤自杀基因 | 第18页 |
| 1.2.5 药物抗性基因 | 第18-19页 |
| 1.2.6 血管疾病相关基因 | 第19页 |
| 1.2.7 信使RNA | 第19-20页 |
| 1.3 基因治疗的物理手段 | 第20-22页 |
| 1.4 基因治疗的生物手段 | 第22-24页 |
| 1.4.1 基于病毒载体的基因治疗 | 第22-23页 |
| 1.4.2 基于细胞载体的基因治疗 | 第23-24页 |
| 1.5 基因治疗的化学手段 | 第24-36页 |
| 1.5.1 基于聚乙烯亚胺(PEI)载体的基因治疗 | 第25页 |
| 1.5.2 基于聚赖氨酸(PLL)载体的基因治疗 | 第25-26页 |
| 1.5.3 基于壳聚糖(Chitosan)载体的基因治疗 | 第26-27页 |
| 1.5.4 基于树枝状大分子(Dendrimer)载体的基因治疗 | 第27-28页 |
| 1.5.5 基于多肽(Peptide)载体的基因治疗 | 第28-35页 |
| 1.5.6 基于阳离子脂质体(Liposome)载体的基因治疗 | 第35-36页 |
| 1.6 亲和素-生物素系统概述 | 第36-40页 |
| 1.6.1 亲和素-生物素系统 | 第36-38页 |
| 1.6.2 亲和素-生物素系统在生化检测中的应用 | 第38页 |
| 1.6.3 亲和素-生物素系统在高效液相色谱中的应用 | 第38-39页 |
| 1.6.4 亲和素-生物素系统在生物诊断中的应用 | 第39页 |
| 1.6.5 亲和素-生物素系统在疾病治疗中的应用 | 第39-40页 |
| 1.6.6 亲和素-生物素系统在层层自组装中的应用 | 第40页 |
| 1.7 选题思路 | 第40-43页 |
| 参考文献 | 第43-68页 |
| 第二章 含穿膜肽和核定位信号肽的基因载体用于体外与体内基因治疗的研究 | 第68-93页 |
| 2.1 前言 | 第68-70页 |
| 2.2 实验部分 | 第70-78页 |
| 2.2.1 试剂 | 第70页 |
| 2.2.2 细胞培养 | 第70-71页 |
| 2.2.3 质粒DNA的扩增、提取和纯化 | 第71页 |
| 2.2.4 多肽固相合成与表征 | 第71-72页 |
| 2.2.5 多肽/DNA复合物的制备 | 第72页 |
| 2.2.6 琼脂糖凝胶电泳 | 第72-73页 |
| 2.2.7 多肽/DNA复合物粒径和zeta-电位的测定 | 第73页 |
| 2.2.8 体外细胞毒性检测 | 第73-74页 |
| 2.2.9 多肽介导的体外转染实验 | 第74页 |
| 2.2.10 多肽介导的体外VEGF蛋白表达实验 | 第74-75页 |
| 2.2.11 大鼠后肢缺血模型造模 | 第75页 |
| 2.2.12 体内基因治疗方案 | 第75-76页 |
| 2.2.13 体内毒性检测 | 第76-77页 |
| 2.2.14 体内VEGF蛋白表达检测 | 第77页 |
| 2.2.15 促进血管新生效果检测 | 第77页 |
| 2.2.16 统计学分析 | 第77-78页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第78-87页 |
| 2.3.1 多肽的合成与表征 | 第78-79页 |
| 2.3.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第79-80页 |
| 2.3.3 复合物的粒径和zeta-电位 | 第80-81页 |
| 2.3.4 多肽的体外细胞毒性 | 第81页 |
| 2.3.5 多肽介导的体外基因转染 | 第81-83页 |
| 2.3.6 多肽介导的体外VEGF蛋白表达 | 第83-84页 |
| 2.3.7 多肽介导的体内基因转染 | 第84页 |
| 2.3.8 多肽的体内毒性 | 第84-85页 |
| 2.3.9 体内VEGF蛋白的表达 | 第85-86页 |
| 2.3.10 体内血管新生效果检测 | 第86-87页 |
| 2.4 结论 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-93页 |
| 第三章 多肽/亲和素/生物素化人转铁蛋白偶联基因载体的制备及肿瘤靶向性研究 | 第93-119页 |
| 3.1 前言 | 第93-95页 |
| 3.2 实验部分 | 第95-101页 |
| 3.2.1 试剂 | 第95-96页 |
| 3.2.2 细胞培养 | 第96页 |
| 3.2.3 质粒DNA的扩增、提取和纯化 | 第96页 |
| 3.2.4 多肽固相合成与表征 | 第96页 |
| 3.2.5 多肽/DNA复合物的制备 | 第96-97页 |
| 3.2.6 琼脂糖凝胶电泳 | 第97页 |
| 3.2.7 复合物粒径和zeta-电位的测定 | 第97-98页 |
| 3.2.8 复合物形态观测 | 第98页 |
| 3.2.9 复合物稳定性检测 | 第98页 |
| 3.2.10 体外细胞毒性检测 | 第98-99页 |
| 3.2.11 复合物的体外转染实验 | 第99-100页 |
| 3.2.12 复合物介导的体外p53蛋白表达实验 | 第100页 |
| 3.2.13 统计学分析 | 第100-101页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第101-112页 |
| 3.3.1 多肽的合成与表征 | 第101页 |
| 3.3.2 多肽/DNA复合物的制备 | 第101-102页 |
| 3.3.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第102-103页 |
| 3.3.4 复合物的粒径和zeta-电位 | 第103-104页 |
| 3.3.5 复合物形态观测 | 第104-105页 |
| 3.3.6 复合物稳定性 | 第105-106页 |
| 3.3.7 体外细胞毒性 | 第106-107页 |
| 3.3.8 体外基因转染 | 第107-109页 |
| 3.3.9 体外p53蛋白的表达 | 第109-112页 |
| 3.4 结论 | 第112页 |
| 参考文献 | 第112-119页 |
| 第四章 亲和素偶联生物素化多肽基因载体的体外及体内肿瘤治疗研究 | 第119-143页 |
| 4.1 前言 | 第119-121页 |
| 4.2 实验部分 | 第121-128页 |
| 4.2.1 试剂 | 第121页 |
| 4.2.2 细胞培养 | 第121-122页 |
| 4.2.3 质粒DNA的扩增、提取和纯化 | 第122页 |
| 4.2.4 生物素化多肽的固相合成与表征 | 第122页 |
| 4.2.5 亲和素偶联生物素化多肽基因载体(TAC)的制备 | 第122-123页 |
| 4.2.6 琼脂糖凝胶电泳 | 第123页 |
| 4.2.7 复合物粒径和zeta-电位的测定 | 第123页 |
| 4.2.8 体外细胞毒性检测 | 第123-124页 |
| 4.2.9 体外转染实验 | 第124-125页 |
| 4.2.10 复合物介导的体外p53蛋白表达实验 | 第125页 |
| 4.2.11 Western Blotting免疫印迹检测 | 第125-126页 |
| 4.2.12 小鼠实体瘤模型造模 | 第126-127页 |
| 4.2.13 体内基因治疗方案 | 第127页 |
| 4.2.14 逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测 | 第127页 |
| 4.2.15 统计学分析 | 第127-128页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第128-138页 |
| 4.3.1 生物素化多肽的合成与表征 | 第128-129页 |
| 4.3.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第129-130页 |
| 4.3.3 复合物的粒径和zeta-电位 | 第130-131页 |
| 4.3.4 体外细胞毒性 | 第131-132页 |
| 4.3.5 体外基因转染 | 第132-134页 |
| 4.3.6 体外p53蛋白的表达 | 第134-136页 |
| 4.3.7 体内肿瘤抑制效应 | 第136-138页 |
| 4.3.8 p53基因的瘤内表达 | 第138页 |
| 4.4 结论 | 第138-139页 |
| 参考文献 | 第139-143页 |
| 第五章 亲和素-生物素系统介导的多肽基因载体靶向性转运研究 | 第143-163页 |
| 5.1 前言 | 第143-144页 |
| 5.2 实验部分 | 第144-151页 |
| 5.2.1 试剂 | 第144-145页 |
| 5.2.2 细胞培养 | 第145页 |
| 5.2.3 质粒DNA的扩增、提取和纯化 | 第145-146页 |
| 5.2.4 生物素化多肽的固相合成与表征 | 第146页 |
| 5.2.5 多肽/DNA复合物的制备 | 第146页 |
| 5.2.6 琼脂糖凝胶电泳 | 第146页 |
| 5.2.7 多肽/DNA复合物粒径和zeta-电位的测定 | 第146-147页 |
| 5.2.8 体外细胞毒性检测 | 第147页 |
| 5.2.9 体外细胞修饰及表征 | 第147-148页 |
| 5.2.10 体外修饰细胞的转染及吞噬 | 第148-149页 |
| 5.2.11 体内基因治疗方案 | 第149-150页 |
| 5.2.12 逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测 | 第150页 |
| 5.2.13 Western Blotting免疫印迹检测 | 第150页 |
| 5.2.14 促进血管新生效果检测 | 第150页 |
| 5.2.15 体内VEGF蛋白表达检测 | 第150页 |
| 5.2.16 统计学分析 | 第150-151页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第151-159页 |
| 5.3.1 生物素化多肽的合成与表征 | 第151页 |
| 5.3.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第151-152页 |
| 5.3.3 复合物的粒径和zeta-电位 | 第152-153页 |
| 5.3.4 多肽的体外细胞毒性 | 第153页 |
| 5.3.5 体外细胞修饰及表征 | 第153-156页 |
| 5.3.6 体外修饰细胞的转染及吞噬 | 第156-157页 |
| 5.3.7 VEGF基因和蛋白的体内表达 | 第157-158页 |
| 5.3.8 体内促进血管新生效果与VEGF蛋白的表达 | 第158-159页 |
| 5.4 结论 | 第159-160页 |
| 参考文献 | 第160-163页 |
| 附录 作者在攻读博士学位期间已发表和待发表的论文 | 第163-164页 |
| 致谢 | 第164页 |
