| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 主要英文缩略词表 | 第9-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-36页 |
| 1.1 ESC 体外大规模扩增与 TCHM 的潜在作用 | 第15-17页 |
| 1.1.1 细胞治疗对 ESC 的需求 | 第16页 |
| 1.1.2 TCHM 对促进细胞生长的潜在作用 | 第16-17页 |
| 1.2 体外 ESC 的培养体系 | 第17-19页 |
| 1.2.1 饲养层细胞培养体系 | 第17-18页 |
| 1.2.2 条件培养基无饲养层体系 | 第18页 |
| 1.2.3 确定成分培养基体系 | 第18-19页 |
| 1.3 体外 ESC 的培养方式 | 第19-21页 |
| 1.3.1 ECM 涂层 | 第19-20页 |
| 1.3.2 微载体培养 | 第20页 |
| 1.3.3 悬浮培养 | 第20-21页 |
| 1.4 支架材料与生物反应器 | 第21-25页 |
| 1.4.1 支架材料的选择 | 第21-23页 |
| 1.4.2 生物反应器大规模培养 | 第23-24页 |
| 1.4.3 剪切力对反应器中细胞的影响 | 第24-25页 |
| 1.5 新的 ESC 生长促进因子 | 第25-26页 |
| 1.5.1 药物筛选方法的选择 | 第25-26页 |
| 1.5.2 TCHM 的特点 | 第26页 |
| 1.6 CBDS 方法 | 第26-31页 |
| 1.6.1 CBDS 的特点 | 第26-27页 |
| 1.6.2 实现 HTS 的常用 CBDS 方法 | 第27页 |
| 1.6.3 电化学检测法 | 第27-28页 |
| 1.6.4 光学检测法 | 第28-31页 |
| 1.7 TCHM 和药用天然产物筛选方法 | 第31-33页 |
| 1.7.1 TCHM 筛选模型 | 第31页 |
| 1.7.2 整体动物模型用于 TCHM 筛选 | 第31-32页 |
| 1.7.3 分子水平高通量 TCHM 筛选 | 第32页 |
| 1.7.4 细胞水平高通量 TCHM 筛选 | 第32-33页 |
| 1.8 以 GFP 为基础的细胞水平 HTS 在 TCHM 评估中的应用 | 第33-34页 |
| 1.9 本研究的意义及技术路线 | 第34-36页 |
| 第二章 用于 TCHM 筛选的 CBDS 平台建立 | 第36-51页 |
| 2.1 实验材料 | 第36-38页 |
| 2.1.1 细胞系与材料 | 第36-37页 |
| 2.1.2 药品与试剂 | 第37页 |
| 2.1.3 仪器与设备 | 第37-38页 |
| 2.1.4 候选 TCHM | 第38页 |
| 2.2 实验方法 | 第38-42页 |
| 2.2.1 TCHM 提取物制备 | 第38页 |
| 2.2.2 GFP 细胞系建立与细胞培养 | 第38-40页 |
| 2.2.3 3D 荧光 HTS 体系 | 第40页 |
| 2.2.4 扫描电镜观察材料中细胞形态 | 第40-41页 |
| 2.2.5 数据分析方法 | 第41-42页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第42-50页 |
| 2.3.1 CBDS 方法检测 DCA 对细胞生长的影响 | 第42-44页 |
| 2.3.2 Gls 对细胞生长的作用 | 第44-45页 |
| 2.3.3 Gb 对细胞生长的作用 | 第45-46页 |
| 2.3.4 Eb 对细胞生长的作用 | 第46-48页 |
| 2.3.5 CBDS 方法的筛选结果与优势分析 | 第48-49页 |
| 2.3.6 CDBS 平台可靠性分析 | 第49-50页 |
| 2.4 本章小结 | 第50-51页 |
| 第三章 GLS 对细胞生长的影响 | 第51-62页 |
| 3.1 实验材料 | 第51-52页 |
| 3.1.1 细胞系 | 第51页 |
| 3.1.2 药品与试剂 | 第51-52页 |
| 3.1.3 仪器与设备 | 第52页 |
| 3.2 实验方法 | 第52-54页 |
| 3.2.1 细胞 2D 环境下生长检测 | 第52-53页 |
| 3.2.2 3D 静态和动态 mESC 扩增 | 第53页 |
| 3.2.3 Gls 有效成分提取 | 第53页 |
| 3.2.4 数据分析 | 第53-54页 |
| 3.2.5 细胞周期检测 | 第54页 |
| 3.2.6 FACS 对 mESC 表面标记检测 | 第54页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第54-60页 |
| 3.3.1 Gls 对 2D 培养细胞的影响 | 第54-56页 |
| 3.3.2 Gls 在 mESC 扩增中的作用 | 第56-57页 |
| 3.3.3 PSS 和 TTS 对 mESC 的影响 | 第57-59页 |
| 3.3.4 Gls 对细胞周期的影响 | 第59-60页 |
| 3.4 本章小结 | 第60-62页 |
| 第四章 CBDS 平台筛选促 MESC 增殖的 TCHM | 第62-81页 |
| 4.1 实验材料 | 第62-63页 |
| 4.1.1 细胞系 | 第62页 |
| 4.1.2 药品与试剂 | 第62-63页 |
| 4.1.3 仪器与设备 | 第63页 |
| 4.2 实验方法 | 第63-66页 |
| 4.2.1 TCHM 提取物制备 | 第63-64页 |
| 4.2.2 细胞培养方法 | 第64页 |
| 4.2.3 3D 培养筛选 TCHM | 第64页 |
| 4.2.4 旋转瓶扩增培养 | 第64-65页 |
| 4.2.5 FACS 对 mESC 表面标记检测 | 第65页 |
| 4.2.6 检测与分析方法 | 第65-66页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第66-79页 |
| 4.3.1 3D 荧光 CBDS 体系对 TCHM 筛选结果 | 第66-71页 |
| 4.3.2 组合 TCHM 对 mESC 生长的影响 | 第71-77页 |
| 4.3.3 Pn/Gls 对 mESC 细胞 3D 培养的影响 | 第77-79页 |
| 4.4 本章小结 | 第79-81页 |
| 第五章 TCHM 组合 PN/GLS 对 MESC 生长的影响 | 第81-95页 |
| 5.1 实验材料 | 第81-82页 |
| 5.1.1 细胞系 | 第81页 |
| 5.1.2 药品与试剂 | 第81-82页 |
| 5.1.3 仪器与设备 | 第82页 |
| 5.2 实验方法 | 第82-84页 |
| 5.2.1 旋转瓶扩增 mESC | 第82-83页 |
| 5.2.2 细胞核型分析 | 第83页 |
| 5.2.3 免疫荧光染色 | 第83页 |
| 5.2.4 细胞周期检测 | 第83-84页 |
| 5.2.5 快速 MTT 法检测细胞增殖 | 第84页 |
| 5.2.6 HPLC 检测活性成分 | 第84页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第84-93页 |
| 5.3.1 旋转瓶中 mESC 扩增 | 第84-86页 |
| 5.3.2 药物 Pn/Gls 对 mESC 的影响 | 第86-88页 |
| 5.3.3 血清饥饿胁迫下 Pn/Gls 对 mESC 抗凋亡的影响 | 第88-91页 |
| 5.3.4 人参皂苷 Rg1 对 mESC 增殖的影响 | 第91-93页 |
| 5.4 本章小结 | 第93-95页 |
| 第六章 结论与展望 | 第95-97页 |
| 6.1 结论 | 第95-96页 |
| 6.2 展望 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-111页 |
| 附录 | 第111-112页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第112-113页 |
| 致谢 | 第113-114页 |
| 附件 | 第114页 |
