| 中文摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 缩略语表 | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第11-23页 |
| 1.1 结核分枝杆菌耐药分子机制 | 第11-18页 |
| 1.1.1 耐一线抗结核药物的分子机制 | 第12-14页 |
| 1.1.2 药物外排泵 | 第14-18页 |
| 1.2 药物外排泵与基因调控 | 第18页 |
| 1.3 Mmr外排泵研究现状 | 第18-19页 |
| 1.4 TetR家族转录因子概况 | 第19-20页 |
| 1.5 转录因子Rv3066研究现状 | 第20-21页 |
| 1.6 课题研究的目的与意义 | 第21-22页 |
| 1.7 课题研究主要内容 | 第22-23页 |
| 2 实验材料和方法 | 第23-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-27页 |
| 2.1.1 培养基 | 第23页 |
| 2.1.2 酶和抗生素 | 第23-24页 |
| 2.1.3 菌株 | 第24-25页 |
| 2.1.4 质粒 | 第25-26页 |
| 2.1.5 引物 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-39页 |
| 2.2.1 分子生物学基本操作 | 第27页 |
| 2.2.2 细菌单杂交 | 第27-28页 |
| 2.2.3 M.bovis BCG感受态细胞的制备 | 第28页 |
| 2.2.4 电转化 | 第28-29页 |
| 2.2.5 质粒提取 | 第29页 |
| 2.2.6 蛋白质表达纯化及透析 | 第29-30页 |
| 2.2.7 抗血清制备 | 第30页 |
| 2.2.8 凝胶迁移率实验 | 第30-31页 |
| 2.2.9 DNA酶足迹实验(DNaseI footprinting) | 第31-32页 |
| 2.2.10 敲除菌株的获得 | 第32-33页 |
| 2.2.11 Southern Blot | 第33-35页 |
| 2.2.12 染色质免疫共沉淀(ChIP) | 第35-36页 |
| 2.2.13 实时定量PCR(qRT-PCR) | 第36-38页 |
| 2.2.14 β-半乳糖苷酶活性测定 | 第38页 |
| 2.2.15 生长曲线测定 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-60页 |
| 3.1 细菌单杂交实验证明Rv3066与mmrp存在潜在的物理相互作用 | 第39-42页 |
| 3.1.1 rv3066基因片段及mmrp片段的获得 | 第39-40页 |
| 3.1.2 pBX-mmrp及pTRG-Rv3066质粒的构建 | 第40-41页 |
| 3.1.3 细菌单杂交实验证实Rv3066与mmrp存在相互作用 | 第41-42页 |
| 3.2 EMSA实验证实转录因子Rv3066与mmrp存在相互作用 | 第42-44页 |
| 3.2.1 表达载体的构建及蛋白质表达纯化 | 第42-44页 |
| 3.2.2 EMSA实验证实转录因子Rv3066与mmrp存在相互作用 | 第44页 |
| 3.3 染色质免疫共沉淀实验证实Rv3066与mmrp在体内也存在相互作用 | 第44-46页 |
| 3.4 启动子截短后EMSA实验进一步锁定结合位点 | 第46-48页 |
| 3.5 DNA酶足迹实验鉴定结合模体 | 第48-50页 |
| 3.5.1 DNA酶足迹实验 | 第48-49页 |
| 3.5.2 保守位点缺失后的EMSA实验 | 第49-50页 |
| 3.6 pMind-BCG3091敲除载体的构建及BCG/BCG3091::hyg菌株的获得 | 第50-56页 |
| 3.6.1 pMind-BCG3091敲除载体的构建 | 第50-52页 |
| 3.6.2 BCG/BCG3091：：hyg敲除菌株获得 | 第52-54页 |
| 3.6.3 Southern Blot证实bcg_3091已被成功敲除 | 第54-56页 |
| 3.7 转录因子Rv3066为转录抑制子 | 第56-58页 |
| 3.7.1 β-半乳糖苷酶实验证实Rv3066对mmrp起阻遏调节作用 | 第56-57页 |
| 3.7.2 qRT-PCR实验证实Rv3066抑制mmr基因的表达 | 第57-58页 |
| 3.8 药物敏感性实验证明Rv3066的调控与M.tuberculosis抗药性有关 | 第58-60页 |
| 4 总结与讨论 | 第60-63页 |
| 4.1 总结 | 第60页 |
| 4.2 讨论 | 第60-63页 |
| 参考文献 | 第63-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
