| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3页 |
| 引言 | 第6-7页 |
| 第1章 材料与方法 | 第7-20页 |
| 1.1 材料 | 第7-8页 |
| 1.1.1 主要仪器设备 | 第7页 |
| 1.1.2 质粒、菌株与细胞株 | 第7页 |
| 1.1.3 主要实验试剂 | 第7-8页 |
| 1.2 方法 | 第8-20页 |
| 1.2.1 LAT-EGFP重组质粒的构建 | 第8-15页 |
| 1.2.1.1 PCR扩增引物的设计 | 第8页 |
| 1.2.1.2 Jurkat细胞的培养 | 第8页 |
| 1.2.1.3 Jurkat细胞内总RNA的提取 | 第8-9页 |
| 1.2.1.4 目的基因的扩增 | 第9-10页 |
| 1.2.1.5 LAT-T重组克隆载体的构建及鉴定 | 第10-12页 |
| 1.2.1.6 LAT-EGFP重组载体的构建和鉴定 | 第12-15页 |
| 1.2.2 Jurkat细胞的转染 | 第15-17页 |
| 1.2.2.1 Jurkat细胞的培养 | 第15页 |
| 1.2.2.2 Jurkat细胞的电转染 | 第15-16页 |
| 1.2.2.3 转染细胞阳性克隆的鉴定 | 第16-17页 |
| 1.2.3 功能检测 | 第17-19页 |
| 1.2.3.1 Jurkat细胞固定观察LAT-EGFP,LAT-EGFP-M与CD59在细胞膜上的自然分布情况 | 第17-18页 |
| 1.2.3.2 抗体交联CD59后激光共聚焦显微镜下观察LAT-EGFP,LAT-EGFP-M与CD59在细胞膜上的分布变化 | 第18页 |
| 1.2.3.3 MTT比色法检测Jurkat细胞增殖活性 | 第18页 |
| 1.2.3.4 IL-2 ELISA的检测 | 第18-19页 |
| 1.2.3.5 Western blot法检测 | 第19页 |
| 1.2.4 统计学分析 | 第19-20页 |
| 第2章 实验结果 | 第20-27页 |
| 2.1 LAT-EGFP重组真核表达载体的构建 | 第20-22页 |
| 2.1.1 LAT基因片段的扩增 | 第20页 |
| 2.1.2 LAT-T克隆载体的PCR及酶切鉴定 | 第20-21页 |
| 2.1.3 PEGFP-N3-Linker的单酶切鉴定 | 第21页 |
| 2.1.4 阳性重组质粒LAT-EGFP的PCR及酶切鉴定 | 第21-22页 |
| 2.2 重组质粒转染Jurkat细胞及鉴定 | 第22-24页 |
| 2.2.1 重组质粒电转染Jurkat细胞后观察荧光量表达 | 第22页 |
| 2.2.2 LAT-EGFP融合基因在RNA水平上的表达鉴定 | 第22-23页 |
| 2.2.3 共聚焦显微镜下观察LAT-EGFP的分布 | 第23页 |
| 2.2.4 Western blot鉴定融合蛋白的表达 | 第23-24页 |
| 2.3 功能检测结果 | 第24-27页 |
| 2.3.1 转染后固定的Jurkat细胞上CD59和LAT-EGFP,LAT-EGFP-M分布情况 | 第24-25页 |
| 2.3.2 抗体交联CD59后观察膜上分子的分布变化 | 第25页 |
| 2.3.3 MTT检测结果 | 第25-26页 |
| 2.3.4 IL-2 ELISA检测结果 | 第26页 |
| 2.3.5 Western blot的结果 | 第26-27页 |
| 第3章 讨论 | 第27-30页 |
| 结论 | 第30-31页 |
| 参考文献 | 第31-34页 |
| 综述 | 第34-45页 |
| 综述参考文献 | 第40-45页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第45-46页 |
| 附录1 | 第46-50页 |
| 附录2 | 第50-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
