| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-20页 |
| 1.1 鱼类疾病和免疫 | 第10-11页 |
| 1.1.1 迟钝爱德华氏菌及迟钝爱德华氏菌病 | 第10页 |
| 1.1.2 鱼类的免疫 | 第10-11页 |
| 1.2 白三烯B_4及其受体 | 第11-13页 |
| 1.2.1 白三烯B_4及其生物合成途径 | 第11-12页 |
| 1.2.2 白三烯B_4在生物体中的作用 | 第12-13页 |
| 1.2.3 白三烯B_4受体 | 第13页 |
| 1.3 多肽类趋化因子 | 第13-15页 |
| 1.3.1 趋化因子简介 | 第13-14页 |
| 1.3.2 多肽类趋化因子的分类 | 第14页 |
| 1.3.3 趋化因子受体 | 第14-15页 |
| 1.3.4 趋化因子系统的功能 | 第15页 |
| 1.4 斑马鱼在科研中的应用 | 第15-17页 |
| 1.4.1 斑马鱼及其特点 | 第15页 |
| 1.4.2 斑马鱼在神经生物学中的应用 | 第15-16页 |
| 1.4.3 斑马鱼在疾病模型的应用 | 第16页 |
| 1.4.4 斑马鱼在药物筛选中的应用 | 第16-17页 |
| 1.5 全长cDNA的克隆与RACE技术 | 第17-19页 |
| 1.5.1 全长cDNA序列的克隆 | 第17页 |
| 1.5.2 RACE克隆实验技术 | 第17-19页 |
| 1.6 本课题研究的意义 | 第19-20页 |
| 第2章 预测白三烯B_4受体cDNA的克隆 | 第20-38页 |
| 2.1 前言 | 第20页 |
| 2.2 实验材料 | 第20-24页 |
| 2.2.1 实验动物 | 第20页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第20-21页 |
| 2.2.3 菌株、质粒和培养基 | 第21-22页 |
| 2.2.4 实验耗材 | 第22页 |
| 2.2.5 引物设计及其它软件 | 第22-24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-30页 |
| 2.3.1 RNA的抽提和cDNA模板的制备 | 第24-27页 |
| 2.3.2 白三烯B_4受体预测序列的5’端和3’的克隆 | 第27-28页 |
| 2.3.3 PCR产物回收 | 第28-29页 |
| 2.3.4 DNA片段的连接和转化及感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| 2.4 克隆结果和序列的分析 | 第30-32页 |
| 2.4.1 预测BLT1序列的克隆结果 | 第30页 |
| 2.4.2 克隆序列的序列分析 | 第30-32页 |
| 2.5 两条LTBR序列的分析 | 第32-37页 |
| 2.5.1 BLT1-like1和BLT1-like2的全长cDNA和编码的氨基酸序列 | 第32-33页 |
| 2.5.2 蛋白序列比对和进化树分析 | 第33-37页 |
| 2.6 本章小结 | 第37-38页 |
| 第3章 LTBR在细胞水平上的分析 | 第38-46页 |
| 3.1 前言 | 第38页 |
| 3.2 实验材料 | 第38-39页 |
| 3.2.1 实验所用菌株、质粒和引物 | 第38页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第38-39页 |
| 3.2.3 培养基及溶液配制 | 第39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-43页 |
| 3.3.1 质粒的构建 | 第39页 |
| 3.3.2 无内毒素质粒的抽提 | 第39-40页 |
| 3.3.3 蛋白电泳 | 第40页 |
| 3.3.4 Western blotting实验 | 第40-41页 |
| 3.3.5 脂质体转染实验 | 第41页 |
| 3.3.6 激光共聚焦用玻片样品的制备 | 第41页 |
| 3.3.7 G418对CHO细胞最低致死浓度的测定 | 第41-42页 |
| 3.3.8 单克隆CHO细胞的筛选 | 第42页 |
| 3.3.9 钙离子流动实验 | 第42页 |
| 3.3.10 趋化实验 | 第42-43页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第43-45页 |
| 3.4.1 细胞转染条件的优化 | 第43页 |
| 3.4.2 BLT1-like受体在细胞中的亚定位分析 | 第43-44页 |
| 3.4.3 Western blotting验证单克隆细胞 | 第44-45页 |
| 3.4.4 胞内钙离子流动实验 | 第45页 |
| 3.4.5 细胞趋化实验 | 第45页 |
| 3.5 本章小结 | 第45-46页 |
| 第4章 LTBR在个体水平上的功能考察 | 第46-55页 |
| 4.1 前言 | 第46页 |
| 4.2 实验材料和方法 | 第46-47页 |
| 4.2.1 实验仪器和耗材 | 第46页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第46-47页 |
| 4.2.3 实验动物 | 第47页 |
| 4.3 实验方法 | 第47-50页 |
| 4.3.1 斑马鱼亲鱼交配和胚胎培养 | 第47页 |
| 4.3.2 胚胎RNA抽提及逆转录 | 第47-49页 |
| 4.3.3 RT-qPCR | 第49页 |
| 4.3.4 E.tarda感染斑马鱼的模型 | 第49-50页 |
| 4.3.5 斑马鱼肠炎模型的建立 | 第50页 |
| 4.3.6 重组FBA蛋白的纯化 | 第50页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第50-54页 |
| 4.4.1 LTBR的组织表达分布 | 第50页 |
| 4.4.2 LTBR在斑马鱼胚胎发育过程中的表达情况 | 第50-51页 |
| 4.4.3 BLT1-like1与BLT1-like2两个基因在病原感染时各组织的表达情况 | 第51-53页 |
| 4.4.4 BLT1-like1与BLT1-like2两个基因在蛋白免疫中的作用 | 第53-54页 |
| 4.5 本章小结 | 第54-55页 |
| 第5章 结论与展望 | 第55-56页 |
| 5.1 结论 | 第55页 |
| 5.2 展望 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
