| 摘要 | 第6-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 缩略词 | 第21-23页 |
| 第一部分 microRNA分子生物学特性及窦房结细胞电生理 | 第23-41页 |
| 1.1 microRNAs概述 | 第23-30页 |
| 1.1.1 microRNA生化 | 第23-24页 |
| 1.1.2 microRNAs组织分布特异性 | 第24-27页 |
| 1.1.3 microRNAs与心脏疾病 | 第27-30页 |
| 1.2 心脏传导系统 | 第30-38页 |
| 1.2.1 心脏解剖基础 | 第30-31页 |
| 1.2.2 心脏传导系统 | 第31-32页 |
| 1.2.3 心肌细胞电生理 | 第32-37页 |
| 1.2.4 窦房结的解剖与功能 | 第37-38页 |
| 1.3 小结 | 第38-41页 |
| 第二部分 老年窦房结功能减退患者血浆microRNAs表达谱差异及靶基因预测 | 第41-45页 |
| 2.1 前言 | 第41页 |
| 2.2 材料和方法 | 第41-42页 |
| 2.3 结果 | 第42-45页 |
| 第三部分 荧光素酶报告系统证实老年窦房结功能减退患者异常升高的microRNAs靶向作用于窦房结起搏相关基因 | 第45-49页 |
| 3.1 前言 | 第45页 |
| 3.2 材料和方法 | 第45-47页 |
| 3.3 实验结果 | 第47-49页 |
| 第四部分 异常升高的microRNAs对人ips源性窦房结细胞中起搏相关离子通道蛋白CACNA1C、CACNA1D、CACNA11、KCNQ1和KCNH2表达水平的影响 | 第49-87页 |
| 4.1 前言 | 第49页 |
| 4.2 材料 | 第49-55页 |
| 4.2.1 材料来源 | 第49-50页 |
| 4.2.2 实验试剂及主要配置方法 | 第50-54页 |
| 4.2.3 主要仪器 | 第54-55页 |
| 4.3 实验方法 | 第55-71页 |
| 4.3.1 质粒提取 | 第55-57页 |
| 4.3.2 细胞复苏及支原体检测 | 第57-60页 |
| 4.3.3 瞬转前细胞照片、视频资料收集 | 第60页 |
| 4.3.4 免疫荧光 | 第60-61页 |
| 4.3.5 免疫荧光图片信息采集 | 第61页 |
| 4.3.6 质粒瞬转 | 第61-63页 |
| 4.3.7 瞬转后细胞照片、视频资料收集 | 第63页 |
| 4.3.8 RNA提取 | 第63-64页 |
| 4.3.9 RNA浓度及RNA质量测定 | 第64-65页 |
| 4.3.10 cDNA的合成 | 第65-66页 |
| 4.3.11 引物设计与合成由上海迅捷生物工程有限公司完成 | 第66-67页 |
| 4.3.12 实时荧光定量PCR | 第67-68页 |
| 4.3.13 蛋白的免疫印迹分析 | 第68-71页 |
| 4.4 实验结果 | 第71-87页 |
| 4.4.1 质粒提取检测结果 | 第71-72页 |
| 4.4.2 支原体检测结果 | 第72-73页 |
| 4.4.3 细胞免疫荧光结果 | 第73-74页 |
| 4.4.4 质粒瞬转心肌细胞结果 | 第74-77页 |
| 4.4.5 质粒瞬转心肌细胞前,与质粒瞬转培养72h后,不同组别不同视野心肌细胞跳动节律变化统计 | 第77-82页 |
| 4.4.6 RNA提取结果分析 | 第82-83页 |
| 4.4.7 rtPCR结果分析 | 第83-85页 |
| 4.4.8 蛋白免疫印迹结果分析 | 第85-87页 |
| 第五部分 讨论 | 第87-93页 |
| 第六部分 展望 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-108页 |
| 硕士期间发表论文 | 第108页 |
