| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 前言 | 第11-14页 |
| 第一部分 重组免疫毒素分子的构建和表达 | 第14-28页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第14-15页 |
| ·质粒与菌株 | 第14页 |
| ·仪器 | 第14-15页 |
| ·试剂 | 第15页 |
| 2 方法 | 第15-21页 |
| ·构建思路 | 第15-16页 |
| ·设计全基因序列 | 第16-17页 |
| ·引物分割和合成 | 第17-18页 |
| ·第一步 PCR——拼接大片段 | 第18-19页 |
| ·第二步 PCR——拼接全基因 | 第19-20页 |
| ·酶切、连接和转化 | 第20页 |
| ·诱导表达 | 第20-21页 |
| 3 结果 | 第21-23页 |
| ·目的基因片段扩增与拼接 | 第21页 |
| ·原核表达菌种构建 | 第21-22页 |
| ·大肠杆菌的诱导表达 | 第22-23页 |
| 4 讨论 | 第23-27页 |
| ·免疫毒素分子的设计 | 第23-25页 |
| ·CTLA-4 作用机制 | 第25页 |
| ·重叠延伸 PCR 法合成全基因 | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌表达系统的优势 | 第26-27页 |
| 5 小结 | 第27-28页 |
| 第二部分 重组免疫毒素分子的制备与初步分析 | 第28-39页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第28-29页 |
| ·材料 | 第28页 |
| ·试剂 | 第28页 |
| ·仪器 | 第28-29页 |
| 2 方法 | 第29-31页 |
| ·工程菌发酵培养 | 第29页 |
| ·表达产物回收与纯化 | 第29-30页 |
| ·纯化产物理化性质测定 | 第30-31页 |
| 3 结果 | 第31-35页 |
| ·发酵生长曲线 | 第31-32页 |
| ·产物表达形式鉴定 | 第32页 |
| ·复性液 SP-Sepharose Fast Flow 洗脱 | 第32-33页 |
| ·SP 柱洗脱样 Sephacryl S-200 凝胶排阻层析柱洗脱 | 第33页 |
| ·分子量测定结果 | 第33-34页 |
| ·纯度测定结果 | 第34页 |
| ·等电点测定结果 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35-38页 |
| ·工艺研究 | 第35-38页 |
| ·重组蛋白质药物的关键质量控制指标 | 第38页 |
| 5 小结 | 第38-39页 |
| 第三部分 重组免疫毒素体外活性研究 | 第39-46页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第39-40页 |
| ·材料 | 第39页 |
| ·试剂 | 第39页 |
| ·仪器 | 第39页 |
| ·动物 | 第39-40页 |
| ·溶液配制 | 第40页 |
| 2 方法 | 第40-42页 |
| ·体外杀伤特异性分析 | 第40-41页 |
| ·量效关系分析 | 第41-42页 |
| 3 结果 | 第42-44页 |
| ·体外杀伤特异性分析结果 | 第42-43页 |
| ·量效关系分析结果 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-45页 |
| 5 小结 | 第45-46页 |
| 第四部分 重组免疫毒素体内杀伤活性研究 | 第46-71页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第46页 |
| ·材料 | 第46页 |
| ·试剂 | 第46页 |
| ·仪器 | 第46页 |
| ·动物 | 第46页 |
| 2 方法 | 第46-48页 |
| ·肝癌 BEL-7402 移植瘤 | 第46-47页 |
| ·对 S180 移植瘤的影响 | 第47-48页 |
| ·检测指标及结果处理 | 第48页 |
| 3 结果 | 第48-66页 |
| ·重组免疫毒素对 BEL-7402 肝癌移植肿瘤的影响 | 第48-59页 |
| ·重组免疫毒素对 S180小鼠移植瘤的影响 | 第59-66页 |
| 4 讨论 | 第66-70页 |
| ·关于 CTLA-4 及选择其抗体作为毒素导向片段的理论依据 | 第66-68页 |
| ·模型的选择 | 第68页 |
| ·观测指标的选择及意义 | 第68-70页 |
| 5 小结 | 第70-71页 |
| 全文总结 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-77页 |
| 综述一 | 第77-84页 |
| 参考文献 | 第82-84页 |
| 综述二 | 第84-95页 |
| 参考文献 | 第93-95页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 | 第95-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
