中文摘要 | 第3-4页 |
英文摘要 | 第4-5页 |
英文缩略词对照表 | 第10-12页 |
1 绪论 | 第12-22页 |
1.1 哺乳动物的排卵 | 第12页 |
1.2 PGR对排卵过程的影响 | 第12-15页 |
1.2.1 PGR对排卵的重要性 | 第12-13页 |
1.2.2 PGR的结构 | 第13-14页 |
1.2.3 PGR调控的主要基因 | 第14-15页 |
1.3 低氧微环境对排卵的作用 | 第15-19页 |
1.3.1 低氧微环境的产生 | 第15-16页 |
1.3.2 低氧及低氧诱导因子发挥作用的机制 | 第16-17页 |
1.3.3 低氧调控排卵过程的相关因子 | 第17-19页 |
1.4 Edn2对排卵过程的影响 | 第19页 |
1.5 PPARγ 对排卵过程的影响 | 第19-20页 |
1.6 研究目的与意义 | 第20-22页 |
2 PGR及低氧诱导因子1对排卵基因的调控 | 第22-46页 |
2.1 引言 | 第22页 |
2.2 实验材料 | 第22-27页 |
2.2.1 实验仪器 | 第22-23页 |
2.2.2 实验试剂 | 第23页 |
2.2.3 实验试剂盒 | 第23-24页 |
2.2.4 抗体 | 第24页 |
2.2.5 内切酶及载体 | 第24页 |
2.2.6 实验动物的饲养 | 第24页 |
2.2.7 实验所需溶液及配制 | 第24-25页 |
2.2.8 引物设计 | 第25-27页 |
2.2.9 分析软件 | 第27页 |
2.3 实验方法与步骤 | 第27-39页 |
2.3.1 外源促性腺激素(PMSG/hCG)刺激小鼠超排卵和颗粒细胞提取 | 第27-28页 |
2.3.2 细胞的培养、接种、冻存及复苏 | 第28-29页 |
2.3.3 载体的构建 | 第29-31页 |
2.3.4 质粒的提取 | 第31-32页 |
2.3.5 细胞转染 | 第32-33页 |
2.3.6 实时荧光定量PCR检测 | 第33-35页 |
2.3.7 Western-blot检测 | 第35-37页 |
2.3.8 酶联免疫(ELISA)检测Edn2的蛋白表达 | 第37-39页 |
2.3.9 结果分析 | 第39页 |
2.4 实验结果 | 第39-44页 |
2.4.1 PGR及其拮抗剂(RU486)对Edn2、PPARγ 的影响 | 第39-40页 |
2.4.2 低氧对Edn2、PPARγ 的影响 | 第40-41页 |
2.4.3 低氧诱导因子1对Edn2、PPARγ 的调控 | 第41-44页 |
2.5 讨论 | 第44-45页 |
2.6 本章小结 | 第45-46页 |
3 HIF1α 敲除细胞的构建及对排卵基因的影响 | 第46-58页 |
3.1 引言 | 第46-47页 |
3.2 实验材料 | 第47-48页 |
3.2.1 实验仪器 | 第47页 |
3.2.2 主要实验试剂与耗材 | 第47-48页 |
3.2.3 试剂盒 | 第48页 |
3.2.4 抗体 | 第48页 |
3.2.5 内切酶及载体 | 第48页 |
3.2.6 实验所需溶液及配制 | 第48页 |
3.2.7 实验引物 | 第48页 |
3.3 实验方法与步骤 | 第48-52页 |
3.3.1 CAS9-gRNA-HIF-1α 载体的构建 | 第48-50页 |
3.3.2 HIF1α 敲除细胞系的构建 | 第50-51页 |
3.3.3 HIF1α 敲除细胞系的验证及对排卵基因的影响 | 第51-52页 |
3.4 实验结果 | 第52-56页 |
3.4.1 HIF1α 敲除细胞系的构建 | 第52-54页 |
3.4.2 HIF1α 的敲除对排卵基因的影响 | 第54-56页 |
3.5 讨论 | 第56页 |
3.6 本章小结 | 第56-58页 |
4 PGR调控的分子机制 | 第58-66页 |
4.1 引言 | 第58页 |
4.2 实验材料 | 第58-60页 |
4.2.1 实验仪器和试剂 | 第58页 |
4.2.2 实验试剂盒 | 第58页 |
4.2.4 抗体 | 第58-59页 |
4.2.5 内切酶及载体 | 第59页 |
4.2.6 实验所需溶液及配制 | 第59页 |
4.2.7 引物设计 | 第59页 |
2.2.9 分析软件 | 第59-60页 |
4.3 实验方法与步骤 | 第60-61页 |
4.3.1 PGRA、PGRB超表达载体的构建 | 第60-61页 |
4.4 实验结果 | 第61-64页 |
4.4.1 PGR两种亚型的表达 | 第61页 |
4.4.2 PGR对相关基因的调控方式 | 第61-64页 |
4.5 讨论 | 第64-65页 |
4.6 本章小结 | 第65-66页 |
5 孕酮信号通路中靶基因的预测 | 第66-76页 |
5.1 引言 | 第66-67页 |
5.2 实验材料 | 第67-68页 |
5.2.1 实验引物 | 第67-68页 |
5.3 实验方法与步骤 | 第68-69页 |
5.3.1 数据的获得及分析标准 | 第68页 |
5.3.2 功能和信号通路的富集分析 | 第68页 |
5.3.3 基因网络的构建 | 第68页 |
5.3.4 实时荧光定量PCR检测预测基因 | 第68-69页 |
5.4 实验结果 | 第69-74页 |
5.4.1 功能与信号通路富集分析 | 第69-70页 |
5.4.2 信号通路的调节和基因网络分析 | 第70-72页 |
5.4.3 预测基因的实时荧光定量PCR检测 | 第72-74页 |
5.5 讨论 | 第74-75页 |
5.6 结论 | 第75-76页 |
6 全文讨论 | 第76-80页 |
7 后期展望 | 第80-82页 |
致谢 | 第82-84页 |
参考文献 | 第84-92页 |
附录 | 第92页 |
A. 作者在攻读硕士学位期间发表的论文目录 | 第92页 |
B. 作者在攻读学位期间参与的科研项目目录 | 第92页 |