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探究孕酮信号通路中HIF1对PPARγ和Edn2调控的分子机制

中文摘要第3-4页
英文摘要第4-5页
英文缩略词对照表第10-12页
1 绪论第12-22页
    1.1 哺乳动物的排卵第12页
    1.2 PGR对排卵过程的影响第12-15页
        1.2.1 PGR对排卵的重要性第12-13页
        1.2.2 PGR的结构第13-14页
        1.2.3 PGR调控的主要基因第14-15页
    1.3 低氧微环境对排卵的作用第15-19页
        1.3.1 低氧微环境的产生第15-16页
        1.3.2 低氧及低氧诱导因子发挥作用的机制第16-17页
        1.3.3 低氧调控排卵过程的相关因子第17-19页
    1.4 Edn2对排卵过程的影响第19页
    1.5 PPARγ 对排卵过程的影响第19-20页
    1.6 研究目的与意义第20-22页
2 PGR及低氧诱导因子1对排卵基因的调控第22-46页
    2.1 引言第22页
    2.2 实验材料第22-27页
        2.2.1 实验仪器第22-23页
        2.2.2 实验试剂第23页
        2.2.3 实验试剂盒第23-24页
        2.2.4 抗体第24页
        2.2.5 内切酶及载体第24页
        2.2.6 实验动物的饲养第24页
        2.2.7 实验所需溶液及配制第24-25页
        2.2.8 引物设计第25-27页
        2.2.9 分析软件第27页
    2.3 实验方法与步骤第27-39页
        2.3.1 外源促性腺激素(PMSG/hCG)刺激小鼠超排卵和颗粒细胞提取第27-28页
        2.3.2 细胞的培养、接种、冻存及复苏第28-29页
        2.3.3 载体的构建第29-31页
        2.3.4 质粒的提取第31-32页
        2.3.5 细胞转染第32-33页
        2.3.6 实时荧光定量PCR检测第33-35页
        2.3.7 Western-blot检测第35-37页
        2.3.8 酶联免疫(ELISA)检测Edn2的蛋白表达第37-39页
        2.3.9 结果分析第39页
    2.4 实验结果第39-44页
        2.4.1 PGR及其拮抗剂(RU486)对Edn2、PPARγ 的影响第39-40页
        2.4.2 低氧对Edn2、PPARγ 的影响第40-41页
        2.4.3 低氧诱导因子1对Edn2、PPARγ 的调控第41-44页
    2.5 讨论第44-45页
    2.6 本章小结第45-46页
3 HIF1α 敲除细胞的构建及对排卵基因的影响第46-58页
    3.1 引言第46-47页
    3.2 实验材料第47-48页
        3.2.1 实验仪器第47页
        3.2.2 主要实验试剂与耗材第47-48页
        3.2.3 试剂盒第48页
        3.2.4 抗体第48页
        3.2.5 内切酶及载体第48页
        3.2.6 实验所需溶液及配制第48页
        3.2.7 实验引物第48页
    3.3 实验方法与步骤第48-52页
        3.3.1 CAS9-gRNA-HIF-1α 载体的构建第48-50页
        3.3.2 HIF1α 敲除细胞系的构建第50-51页
        3.3.3 HIF1α 敲除细胞系的验证及对排卵基因的影响第51-52页
    3.4 实验结果第52-56页
        3.4.1 HIF1α 敲除细胞系的构建第52-54页
        3.4.2 HIF1α 的敲除对排卵基因的影响第54-56页
    3.5 讨论第56页
    3.6 本章小结第56-58页
4 PGR调控的分子机制第58-66页
    4.1 引言第58页
    4.2 实验材料第58-60页
        4.2.1 实验仪器和试剂第58页
        4.2.2 实验试剂盒第58页
        4.2.4 抗体第58-59页
        4.2.5 内切酶及载体第59页
        4.2.6 实验所需溶液及配制第59页
        4.2.7 引物设计第59页
        2.2.9 分析软件第59-60页
    4.3 实验方法与步骤第60-61页
        4.3.1 PGRA、PGRB超表达载体的构建第60-61页
    4.4 实验结果第61-64页
        4.4.1 PGR两种亚型的表达第61页
        4.4.2 PGR对相关基因的调控方式第61-64页
    4.5 讨论第64-65页
    4.6 本章小结第65-66页
5 孕酮信号通路中靶基因的预测第66-76页
    5.1 引言第66-67页
    5.2 实验材料第67-68页
        5.2.1 实验引物第67-68页
    5.3 实验方法与步骤第68-69页
        5.3.1 数据的获得及分析标准第68页
        5.3.2 功能和信号通路的富集分析第68页
        5.3.3 基因网络的构建第68页
        5.3.4 实时荧光定量PCR检测预测基因第68-69页
    5.4 实验结果第69-74页
        5.4.1 功能与信号通路富集分析第69-70页
        5.4.2 信号通路的调节和基因网络分析第70-72页
        5.4.3 预测基因的实时荧光定量PCR检测第72-74页
    5.5 讨论第74-75页
    5.6 结论第75-76页
6 全文讨论第76-80页
7 后期展望第80-82页
致谢第82-84页
参考文献第84-92页
附录第92页
    A. 作者在攻读硕士学位期间发表的论文目录第92页
    B. 作者在攻读学位期间参与的科研项目目录第92页

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