| 符号说明 | 第5-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第15-34页 |
| 1.1 甲壳类动物的性别决定 | 第16-20页 |
| 1.1.1 遗传型性别决定 | 第17-18页 |
| 1.1.2 多基因型性别决定 | 第18-19页 |
| 1.1.3 环境因素对性别决定的影响 | 第19-20页 |
| 1.1.4 胞质因子对性别决定的影响 | 第20页 |
| 1.2 甲壳类动物的性别分化 | 第20-22页 |
| 1.2.1 端足目的性别分化 | 第21页 |
| 1.2.2 十足目的性别分化 | 第21-22页 |
| 1.3 促雄腺在性别分化中的作用 | 第22-26页 |
| 1.3.1 促雄腺的发现 | 第22-23页 |
| 1.3.2 促雄腺在雄性性别分化中的作用 | 第23-24页 |
| 1.3.3 胰岛素样促雄腺激素 | 第24-25页 |
| 1.3.4 胰岛素样促雄腺激素的分离 | 第25页 |
| 1.3.5 Mr-IAG基因沉默 | 第25-26页 |
| 1.4 甲壳动物的生殖发育调控 | 第26-32页 |
| 1.4.1 甲壳动物的生殖系统 | 第26-27页 |
| 1.4.2 神经肽的对甲壳动物的生殖调控 | 第27-29页 |
| 1.4.3 促雄腺激素对雄性甲壳动物的生殖调控 | 第29-30页 |
| 1.4.4 神经递质对生殖的调控 | 第30-31页 |
| 1.4.5 阿片肽对甲壳动物的生殖调控 | 第31-32页 |
| 1.4.6 MF对甲壳动物的生殖调控 | 第32页 |
| 1.5 主要研究内容与技术路线 | 第32-33页 |
| 1.6 论文研究的目的和意义 | 第33-34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-51页 |
| 2.1 试验材料 | 第34-37页 |
| 2.1.1 试验动物 | 第34页 |
| 2.1.2 试剂和仪器 | 第34-37页 |
| 2.2 试验方法 | 第37-51页 |
| 2.2.1 总RNA的提取及质量检测 | 第37页 |
| 2.2.2 cDNA文库制备与测序 | 第37页 |
| 2.2.3 表达量注释分析 | 第37-38页 |
| 2.2.4 差异表达分析 | 第38-39页 |
| 2.2.5 实时定量PCR验证 | 第39-40页 |
| 2.2.6 Es-IAG片段的3'RACE扩增 | 第40-41页 |
| 2.2.7 Es-IAG片段的5'RACE扩增 | 第41-42页 |
| 2.2.8 PCR产物胶回收 | 第42页 |
| 2.2.9 连接T载体 | 第42页 |
| 2.2.10 转化感受态细胞及阳性克隆筛选 | 第42-43页 |
| 2.2.11 Es-IAG基因的生物信息学分析 | 第43页 |
| 2.2.12 荧光定量PCR | 第43-44页 |
| 2.2.13 不同发育时期Es-IAG表达分析 | 第44页 |
| 2.2.14 SiRNA体内干扰Es-IAG实验 | 第44-45页 |
| 2.2.15 干扰结果分析 | 第45页 |
| 2.2.16 总RNA的质量检测 | 第45页 |
| 2.2.17 small RNA cDNA文库构建及测序 | 第45-47页 |
| 2.2.18 smallRNA测序原始数据分析 | 第47-48页 |
| 2.2.19 鉴定miRNA | 第48-49页 |
| 2.2.20 miRNA差异表达 | 第49页 |
| 2.2.21 miRNA靶基因预测 | 第49页 |
| 2.2.22 miRNA靶基因GO分析 | 第49-50页 |
| 2.2.23 miRNA靶基因KEGG Pathway分析 | 第50页 |
| 2.2.24 以Es-IAG为靶基因的miRNA分析 | 第50-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-76页 |
| 3.1 中华绒螯蟹比较转录组分析结果 | 第51-58页 |
| 3.1.1 序列聚类 | 第51页 |
| 3.1.2 序列功能注释 | 第51-53页 |
| 3.1.3 差异表达分析 | 第53-55页 |
| 3.1.4 性别发育相关基因筛选 | 第55页 |
| 3.1.5 调控通路分析 | 第55-58页 |
| 3.1.6 测序结果验证 | 第58页 |
| 3.2 Es-IAG基因的克隆、表达及干扰结果 | 第58-67页 |
| 3.2.1 Es-IAG基因特征分析 | 第58-60页 |
| 3.2.2 Es-IAG氨基酸序列分析 | 第60-62页 |
| 3.2.3 IAG氨基酸序列的系统进化分析 | 第62-64页 |
| 3.2.4 中华绒螯蟹不同发育阶段Es-IAG的表达分析 | 第64-65页 |
| 3.2.5 siRNA干扰结果 | 第65-67页 |
| 3.3 中华绒螯蟹small RNA分析结果 | 第67-76页 |
| 3.3.1 测序质量评估 | 第67-68页 |
| 3.3.2 数据质量及长度分布 | 第68-69页 |
| 3.3.3 基因组比对 | 第69-70页 |
| 3.3.4 已知miRNA比对 | 第70页 |
| 3.3.5 small RNA分类注释 | 第70-71页 |
| 3.3.6 新miRNA预测 | 第71页 |
| 3.3.7 已知miRNA和新miRNA的靶基因预测 | 第71-72页 |
| 3.3.8 miRNA差异表达分析 | 第72页 |
| 3.3.9 靶基因分析 | 第72-73页 |
| 3.3.10 靶基因GO分析与通路分析 | 第73-75页 |
| 3.3.11 miRNA筛选 | 第75-76页 |
| 4 讨论 | 第76-85页 |
| 4.1 差异表达基因及相关通路分析 | 第77-82页 |
| 4.1.1 核糖体通路分析 | 第77页 |
| 4.1.2 性别分化相关基因分析 | 第77-79页 |
| 4.1.3 精子发生相关差异表达基因 | 第79-80页 |
| 4.1.4 胰岛素信号通路分析 | 第80-81页 |
| 4.1.5 具神经活性配体受体相互作用 | 第81-82页 |
| 4.2 不同发育时期Es-IAG基因分析 | 第82-84页 |
| 4.2.1 Es-IAG基因进化的保守性 | 第82-83页 |
| 4.2.2 中华绒螯蟹性别分化期 | 第83页 |
| 4.2.3 RNAi效率及意义 | 第83-84页 |
| 4.3 性别发育相关miRNA | 第84-85页 |
| 5 结论 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-99页 |
| 致谢 | 第99页 |
