| 摘要 | 第6-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 绪论 | 第16-28页 |
| 1.1 肝脏再生 | 第16-17页 |
| 1.2 肝脏再生的分子机理 | 第17-20页 |
| 1.3 肝脏再生模型 | 第20页 |
| 1.4 趋化因子CCL2 及其受体CCR2 | 第20-23页 |
| 1.5 钙离子结合蛋白S100A11 和S100A6 | 第23-25页 |
| 1.6 论文的主要研究内容和创新点 | 第25-28页 |
| 第二章 材料与方法 | 第28-58页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第28页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第28页 |
| 2.1.3 常用试剂 | 第28-29页 |
| 2.2 实验仪器与设备 | 第29-30页 |
| 2.3 常用溶液的配制 | 第30-36页 |
| 2.3.1 常规溶液 | 第30-31页 |
| 2.3.2 SDS 碱裂解法大量制备质粒DNA 相关溶液 | 第31-32页 |
| 2.3.3 蛋白电泳相关溶液 | 第32-33页 |
| 2.3.4 Western blot 相关溶液 | 第33-34页 |
| 2.3.5 ELISA 相关溶液 | 第34-35页 |
| 2.3.6 HE 染色和免疫组织化学相关溶液 | 第35-36页 |
| 2.4 方法 | 第36-58页 |
| 2.4.1 肝脏组织总RNA 的提取 | 第36页 |
| 2.4.2 肝脏组织总cDNA 的合成 | 第36-37页 |
| 2.4.3 检测RT-PCR 的cDNA 质量 | 第37-38页 |
| 2.4.4 基因的克隆和表达载体的构建 | 第38-43页 |
| 2.4.5 大量制备高纯度的pcDNA3.1 以及插入外源基因的pcDNA3.1 重组质粒 | 第43-45页 |
| 2.4.6 高纯度质粒中内毒素的清除以及内毒素含量的测定 | 第45-46页 |
| 2.4.7 小鼠肝损伤模型 | 第46页 |
| 2.4.8 质粒电转染方法 | 第46-47页 |
| 2.4.9 小鼠血液和肝脏样品的采集 | 第47页 |
| 2.4.10 组织包埋程序 | 第47-48页 |
| 2.4.11 组织石蜡切片的制作 | 第48页 |
| 2.4.12 常规HE 染色步骤 | 第48-49页 |
| 2.4.13 PCNA 免疫组织化学 | 第49-51页 |
| 2.4.14 血清中谷丙转氨酶（ALT）活力的测定 | 第51页 |
| 2.4.15 重组蛋白的小量原核表达 | 第51-52页 |
| 2.4.16 重组蛋白的大量诱导表达 | 第52页 |
| 2.4.17 蛋白裂解处理方案 | 第52-53页 |
| 2.4.18 Glutathione Sepharose 48 纯化GST 融合蛋白及用Thrombin 酶解融合蛋白 | 第53页 |
| 2.4.19 Glutathione Sepharose 48 树脂的回收 | 第53页 |
| 2.4.20 Bradford 法测蛋白溶液浓度 | 第53-54页 |
| 2.4.21 多克隆抗体的制备 | 第54-55页 |
| 2.4.22 抗体纯化 | 第55页 |
| 2.4.23 Western blot 检测抗体效价 | 第55-56页 |
| 2.4.24 酶联免疫吸附实验（ELISA） | 第56-57页 |
| 2.4.25 His-Select~(TM) Nichel Affinity Gel 亲和纯化融合蛋白 | 第57页 |
| 2.4.26 包涵体的变性和复性 | 第57-58页 |
| 第三章 结果 | 第58-88页 |
| 3.1 CCL2 及其受体CCR2 在肝再生过程中的作用 | 第58-74页 |
| 3.1.1 RT-PCR 获得cDNA | 第58页 |
| 3.1.2 CCL2 真核表达载体的构建和鉴定 | 第58-59页 |
| 3.1.3 pcDNA-CCL2 质粒小鼠电转染实验结果 | 第59-62页 |
| 3.1.4 CCR2 氨基端55 个氨基残基多肽的原核表达载体的构建 | 第62-63页 |
| 3.1.5 CCR2_(Δ1-55) 的原核表达及纯化 | 第63-67页 |
| 3.1.6 CCR2_(Δ1-55) 多克隆抗体的制备 | 第67-69页 |
| 3.1.7 CCR2_(Δ1-55) 抗体阻断的实验结果 | 第69-70页 |
| 3.1.8 CCL2 原核表达载体的构建 | 第70-71页 |
| 3.1.9 CCL2 的原核表达及纯化 | 第71-74页 |
| 3.2 S100A11 在肝再生过程中的作用 | 第74-81页 |
| 3.2.1 S100A11 真核表达载体的构建和鉴定 | 第74-75页 |
| 3.2.2 pcDNA-S100A11 质粒小鼠电转染实验结果 | 第75-78页 |
| 3.2.3 S100A11 原核表达载体的构建 | 第78-79页 |
| 3.2.4 S100A11 的原核表达及纯化 | 第79-81页 |
| 3.3 S100A6 在肝再生过程中的作用 | 第81-88页 |
| 3.3.1 S100A6 真核表达载体的构建和鉴定 | 第81-83页 |
| 3.3.2 pcDNA-S100A6 质粒小鼠电转染实验结果 | 第83-85页 |
| 3.3.3 S100A6 原核表达载体的构建 | 第85-88页 |
| 第四章 讨论 | 第88-93页 |
| 第五章 结论和展望 | 第93-95页 |
| 5.1 本文研究总结 | 第93页 |
| 5.2 课题研究展望 | 第93-95页 |
| 参考文献 | 第95-100页 |
| 附录 | 第100-110页 |
| 附录1 克隆基因的开放阅读框序列 | 第100-102页 |
| 附录2 各种试剂盒使用步骤 | 第102-106页 |
| 附录3 pcDNA3.1，pGEX-4T-2 和pET-28 质粒图谱 | 第106-110页 |
| 致谢 | 第110-112页 |
| 攻读硕士学位期间发表或录用的论文 | 第112页 |
