| 摘要 | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-36页 |
| 1. 山西老陈醋及其醋醅的研究概况 | 第14-15页 |
| 1.1 山西老陈醋 | 第14页 |
| 1.1.1 山西老陈醋生产工艺流程 | 第14页 |
| 1.1.2 山西老陈醋与微生物 | 第14页 |
| 1.2 醋醅中微生物的研究进展 | 第14-15页 |
| 2. 细菌素 | 第15-19页 |
| 2.1 细菌素的定义 | 第15-16页 |
| 2.2 细菌素的分类 | 第16-17页 |
| 2.3 细菌素与抗生素 | 第17页 |
| 2.4 细菌素抗菌活性的测定方法 | 第17-18页 |
| 2.4.1 琼脂扩散法 | 第17-18页 |
| 2.4.2 稀释梯度法 | 第18页 |
| 2.4.3 微孔比浊法 | 第18页 |
| 2.5 细菌素的应用 | 第18-19页 |
| 3. 细菌素的分离、提纯及鉴定 | 第19-24页 |
| 3.1 细菌素的粗分离 | 第19-21页 |
| 3.1.1 盐析法 | 第19-20页 |
| 3.1.2 等电点沉淀法 | 第20页 |
| 3.1.3 低温有机溶剂沉淀法 | 第20页 |
| 3.1.4 透析法 | 第20页 |
| 3.1.5 超滤技术 | 第20页 |
| 3.1.6 有机溶剂萃取法 | 第20-21页 |
| 3.1.7 菌体吸附法 | 第21页 |
| 3.1.8 热变性法 | 第21页 |
| 3.2 中度纯化阶段 | 第21-23页 |
| 3.2.1 离子交换层析 | 第22页 |
| 3.2.2 亲和层析 | 第22页 |
| 3.2.3 凝胶层析 | 第22-23页 |
| 3.2.4 疏水交换层析 | 第23页 |
| 3.3 精细纯化阶段 | 第23页 |
| 3.4 细菌素的鉴定 | 第23-24页 |
| 4. 芽孢杆菌及枯草芽孢杆菌 | 第24-26页 |
| 4.1 芽孢杆菌 | 第24页 |
| 4.2 枯草芽孢杆菌 | 第24-26页 |
| 5. 本研究的目的和意义 | 第26-28页 |
| 6. 本研究的技术流程 | 第28-29页 |
| 参考文献 | 第29-36页 |
| 第二章 醋醅中产抑菌物质菌株的筛选及其抑菌物质的定性研究 | 第36-54页 |
| 1. 技术路线 | 第36页 |
| 2. 材料和仪器 | 第36-38页 |
| 2.1 待测菌株 | 第36-37页 |
| 2.2 指示菌 | 第37页 |
| 2.3 主要仪器和试剂 | 第37页 |
| 2.3.1 仪器 | 第37页 |
| 2.3.2 试剂 | 第37页 |
| 2.4 培养基 | 第37-38页 |
| 3. 实验方法 | 第38-40页 |
| 3.1 牛津杯法 | 第38页 |
| 3.2 指示菌浓度的确定 | 第38-39页 |
| 3.3 抑菌物质的定性试验 | 第39-40页 |
| 3.3.1 酸抑制作用的排除 | 第39页 |
| 3.3.2 过氧化氢排除试验 | 第39页 |
| 3.3.3 蛋白酶消化试验 | 第39页 |
| 3.3.4 菌株A32对蛋白类抑菌物质自身免疫性的测定 | 第39页 |
| 3.3.5 菌株A32生长曲线及蛋白类抗菌物质生成曲线的构建 | 第39-40页 |
| 3.3.6 菌株A32质粒的提取 | 第40页 |
| 4. 结果和分析 | 第40-50页 |
| 4.1 醋醅中产抑菌物质菌株的初筛 | 第40-42页 |
| 4.2 醋醅中产抑菌物质窗株的复筛 | 第42-46页 |
| 4.2.1 指示菌浓度的确定 | 第42-43页 |
| 4.2.2 初筛菌株抑菌活性的测定 | 第43页 |
| 4.2.3 初筛菌株的液体培养特征 | 第43-44页 |
| 4.2.4 初筛菌株的固体培养特征 | 第44-45页 |
| 4.2.5 初筛菌株的个体形态特征 | 第45-46页 |
| 4.3 菌株A32抑菌物质的定性试验 | 第46-48页 |
| 4.3.1 酸抑制排除试验 | 第46-47页 |
| 4.3.2 过氧化氢排除试验 | 第47-48页 |
| 4.3.3 蛋白酶消化试验 | 第48页 |
| 4.4 菌株A32对蛋白类抑菌物质自身免疫性的确定 | 第48-49页 |
| 4.5 抑菌蛋白的生成与菌株生长的关系 | 第49-50页 |
| 4.6 菌株A32质粒的提取 | 第50页 |
| 5. 讨论 | 第50-51页 |
| 6. 小结 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-54页 |
| 第三章 芽孢杆菌A32的鉴定 | 第54-80页 |
| 1. 技术路线 | 第54-55页 |
| 2. 仪器与材料 | 第55-57页 |
| 2.1 实验材料 | 第55-56页 |
| 2.1.1 菌株 | 第55页 |
| 2.1.2 试剂 | 第55页 |
| 2.1.3 培养基 | 第55-56页 |
| 2.2 主要仪器 | 第56-57页 |
| 3. 实验方法 | 第57-63页 |
| 3.1 培养方法 | 第57页 |
| 3.2 菌落形态观察 | 第57页 |
| 3.3 菌体形态观察 | 第57页 |
| 3.4 菌体运动性观察 | 第57-58页 |
| 3.5 生理生化鉴定 | 第58-60页 |
| 3.5.1 硝酸盐还原试验 | 第58页 |
| 3.5.2 接触酶试验 | 第58页 |
| 3.5.3 V-P测定试验 | 第58页 |
| 3.5.4 淀粉水解试验 | 第58页 |
| 3.5.5 柠檬酸盐利用试验 | 第58页 |
| 3.5.6 苯丙氨酸脱氨酶试验 | 第58页 |
| 3.5.7 耐盐性和需盐性试验 | 第58页 |
| 3.5.8 甲基红(M.R)试验 | 第58-59页 |
| 3.5.9 吲哚试验 | 第59页 |
| 3.5.10 卵磷脂酶试验 | 第59页 |
| 3.5.11 糖氧化发酵试验 | 第59页 |
| 3.5.12 明胶液化试验 | 第59页 |
| 3.5.13 酪素水解试验 | 第59页 |
| 3.5.14 水解马尿酸试验 | 第59页 |
| 3.5.15 吲哚丙酮酸钠(IPA)测定 | 第59页 |
| 3.5.16 乙醇氧化试验 | 第59页 |
| 3.5.17 乙酸氧化试验 | 第59页 |
| 3.5.18 初始生长pH值的测定 | 第59-60页 |
| 3.5.19 生长温度的测定 | 第60页 |
| 3.6 16S rDNA序列系统发育分析 | 第60-63页 |
| 3.6.1 细菌总DNA的提取 | 第60页 |
| 3.6.2 16S rDNA的PCR扩增 | 第60页 |
| 3.6.3 PCR产物电泳 | 第60-61页 |
| 3.6.4 PCR产物的纯化 | 第61页 |
| 3.6.5 目的片断TA克隆 | 第61-63页 |
| 3.6.6 蓝白斑筛选 | 第63页 |
| 3.6.7 16S rDNA的的序列测定及分析 | 第63页 |
| 4. 结果和分析 | 第63-78页 |
| 4.1 菌株A32的菌落形态 | 第63-64页 |
| 4.2 菌株A32的液体培养特征 | 第64页 |
| 4.3 菌株A32的形态特征 | 第64-65页 |
| 4.4 菌株A32的生理生化实验 | 第65-74页 |
| 4.4.1 接触酶实验 | 第65页 |
| 4.4.2 葡萄糖产酸产气实验 | 第65页 |
| 4.4.3 碳源利用实验 | 第65-66页 |
| 4.4.4 明胶液化实验 | 第66-67页 |
| 4.4.5 乙醇氧化实验 | 第67页 |
| 4.4.6 淀粉水解实验 | 第67-68页 |
| 4.4.7 需盐性实验 | 第68页 |
| 4.4.8 溶菌酶实验 | 第68-69页 |
| 4.4.9 牛奶分解实验 | 第69页 |
| 4.4.10 酪素水解实验 | 第69-70页 |
| 4.4.11 甲基红实验 | 第70页 |
| 4.3.12 苯丙氨基酸脱氨酶实验 | 第70-71页 |
| 4.4.13 V-P实验 | 第71页 |
| 4.4.14 硝酸盐还原实验 | 第71-72页 |
| 4.4.15 乙酸氧化 | 第72页 |
| 4.4.16 初始生长pH值的测定 | 第72页 |
| 4.4.17 生长温度的测定 | 第72-73页 |
| 4.4.18 生理生化实验结果汇总 | 第73-74页 |
| 4.5 菌株A32 16S rDNA 鉴定 | 第74-78页 |
| 4.5.1 菌株A32基因组DNA | 第74页 |
| 4.5.2 菌株A32 16S rDNA序列的PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳 | 第74-75页 |
| 4.5.3 菌株A32 16S rDNA序列的测序及分析 | 第75-76页 |
| 4.5.4 菌株A32 16S rDNA鉴定 | 第76-77页 |
| 4.5.5 菌株A32 16S rDNA序列的系统发育分析 | 第77-78页 |
| 5. 讨论 | 第78页 |
| 6. 小结 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-80页 |
| 第四章 枯草芽孢杆菌HJD.A32产类细菌素的生物学特性 | 第80-89页 |
| 1. 技术路线 | 第80页 |
| 2. 材料与仪器 | 第80-82页 |
| 2.1 材料 | 第80-82页 |
| 2.1.1 菌株 | 第80-81页 |
| 2.1.2 试剂 | 第81页 |
| 2.1.3 培养基 | 第81-82页 |
| 2.2 仪器 | 第82页 |
| 3. 方法 | 第82-83页 |
| 3.1 类细菌素活性效价的测定 | 第82页 |
| 3.2 类细菌素抑菌谱的测定 | 第82页 |
| 3.3 蛋白酶稳定性的测定 | 第82页 |
| 3.4 热稳定性测定 | 第82页 |
| 3.5 酸碱稳定性测定 | 第82-83页 |
| 3.6 化学试剂耐受性测定 | 第83页 |
| 4. 结果与分析 | 第83-86页 |
| 4.1 类细菌素的抑菌效价 | 第83页 |
| 4.2 类细菌素的抑菌谱 | 第83-84页 |
| 4.3 类细菌素的蛋白酶稳定性 | 第84-85页 |
| 4.4 类细菌素的热稳定性 | 第85页 |
| 4.5 类细菌素的酸碱稳定性 | 第85-86页 |
| 4.6 类细菌素的化学试剂耐受性 | 第86页 |
| 5. 讨论 | 第86-87页 |
| 6. 小结 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-89页 |
| 第五章 枯草芽孢杆菌HJD.A32产类细菌素的分离纯化 | 第89-111页 |
| 1. 技术路线 | 第89-90页 |
| 2. 材料与仪器 | 第90-92页 |
| 2.1 菌株 | 第90页 |
| 2.2 试剂 | 第90页 |
| 2.3 仪器和耗材 | 第90页 |
| 2.4 溶液的配制 | 第90-92页 |
| 2.4.1 培养基 | 第90-91页 |
| 2.4.2 电泳溶液的配制 | 第91页 |
| 2.4.3 蛋白浓度测定溶液的配置 | 第91页 |
| 2.4.4 分子量标准 | 第91页 |
| 2.4.5 磷酸缓冲溶液的配制 | 第91-92页 |
| 3. 方法 | 第92-96页 |
| 3.1 超滤法分离类细菌素 | 第92页 |
| 3.2 硫酸铵梯度法提取类细菌素 | 第92页 |
| 3.3 有机溶剂沉淀法提取类细菌素 | 第92-93页 |
| 3.3.1 乙醇沉淀法提取类细菌素 | 第92-93页 |
| 3.3.2 丙酮沉淀法提取类细菌素 | 第93页 |
| 3.4 酸沉淀法提取类细菌素 | 第93页 |
| 3.5 类细菌素粗蛋白的电泳及抑菌活性测定 | 第93-94页 |
| 3.6 蛋白质含量的测定 | 第94页 |
| 3.7 类细菌素粗提物的保存 | 第94-95页 |
| 3.8 类细菌素粗提物的溶解 | 第95页 |
| 3.9 样品的浓缩及活性的测定 | 第95页 |
| 3.10 阴离子交换色谱 | 第95-96页 |
| 4. 结果与分析 | 第96-108页 |
| 4.1 芽孢杆菌HJD.A32产类细菌素分子量的估测 | 第96-97页 |
| 4.2 硫酸铵沉淀类细菌素 | 第97-98页 |
| 4.3 有机溶剂沉淀类细菌素 | 第98-99页 |
| 4.4 酸沉淀法提取类细菌素 | 第99页 |
| 4.5 不同方法提取的类细菌素粗提物的蛋白含量 | 第99页 |
| 4.6 不同方法提取类细菌素的比较研究 | 第99-100页 |
| 4.7 类细菌素粗提物Tricine-SDS-PAGE电泳结果及抑菌活性的检测 | 第100-101页 |
| 4.8 类细菌素粗提物的溶解方法及最适溶解度的确定 | 第101-103页 |
| 4.8.1 水溶法 | 第101-102页 |
| 4.8.2 磷酸缓冲溶液溶解法 | 第102-103页 |
| 4.9 干粉样品的活性测定 | 第103-104页 |
| 4.10 阴离子交换色谱 | 第104-105页 |
| 4.11 MALDI-TOF-MS质谱分析 | 第105-106页 |
| 4.12 甲醇、乙腈对类细菌素粗提物抑菌活性的影响 | 第106-108页 |
| 5. 讨论 | 第108页 |
| 6. 小结 | 第108-110页 |
| 参考文献 | 第110-111页 |
| 结论 | 第111-112页 |
| 攻读博±学位期间发表的论文及成果 | 第112-114页 |
| Abstract | 第114-116页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 附件 | 第119-125页 |
