| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第11-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-52页 |
| 1.1 引言 | 第16-17页 |
| 1.2 纤维素酶概述 | 第17-21页 |
| 1.2.1 纤维素酶的结构 | 第17-19页 |
| 1.2.2 纤维素酶的作用机制 | 第19-21页 |
| 1.3 内切型-β-葡聚糖酶基因的克隆与表达 | 第21-32页 |
| 1.3.1 在原核细胞中的克隆与表达 | 第22-24页 |
| 1.3.2 在酵母细胞中的表达 | 第24-25页 |
| 1.3.3 在丝状真菌中的表达 | 第25-32页 |
| 1.4 内切型-β-葡聚糖酶的主要应用 | 第32-39页 |
| 1.4.1 在纺织工业中的应用 | 第33-37页 |
| 1.4.2 在造纸工业中的应用 | 第37-38页 |
| 1.4.3 在啤酒工业中的应用 | 第38页 |
| 1.4.4 在饲料工业中的应用 | 第38-39页 |
| 1.5 根瘤农杆菌介导转化丝状真菌的研究 | 第39-49页 |
| 1.5.1 ATMT技术的原理 | 第40-45页 |
| 1.5.2 影响转化效率的因素 | 第45-47页 |
| 1.5.3 根瘤农杆菌介导转化的应用 | 第47-49页 |
| 1.6 本工作的研究思路及拟研究内容 | 第49-52页 |
| 第二章 厌氧真菌内切型-β-葡聚糖酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第52-69页 |
| 2.1 引言 | 第52页 |
| 2.2 材料与方法 | 第52-58页 |
| 2.2.1 材料与试剂 | 第52-53页 |
| 2.2.2 培养基 | 第53-54页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第54页 |
| 2.2.4 实验方法 | 第54-58页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第58-68页 |
| 2.3.1 重组质粒pET28a(+)-celE的构建 | 第58-59页 |
| 2.3.2 重组质粒的验证分析 | 第59-60页 |
| 2.3.3 SDS-PAGE检测蛋白产物的表达 | 第60-61页 |
| 2.3.4 内切型-β-葡聚糖酶最适作用条件 | 第61-63页 |
| 2.3.5 重组大肠杆菌诱导表达条件的优化 | 第63-68页 |
| 2.4 小结 | 第68-69页 |
| 第三章 厌氧真菌内切型-β-葡聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第69-85页 |
| 3.1 引言 | 第69页 |
| 3.2 材料与方法 | 第69-76页 |
| 3.2.1 材料与试剂 | 第69-71页 |
| 3.2.2 培养基 | 第71-72页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第72-73页 |
| 3.2.4 实验方法 | 第73-76页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第76-84页 |
| 3.3.1 毕赤酵母表达载体的构建及质粒验证 | 第76-78页 |
| 3.3.2 毕赤酵母的转化及高抗G418转化子的筛选 | 第78页 |
| 3.3.3 高抗G418重组子基因组PCR验证 | 第78页 |
| 3.3.4 重组子表达产物的SDS-PAGE蛋白电泳 | 第78-79页 |
| 3.3.5 重组毕赤酵母对CMC的利用 | 第79-80页 |
| 3.3.6 重组酶的最适作用条件研究 | 第80-81页 |
| 3.3.7 诱导剂甲醇添加浓度的研究 | 第81-82页 |
| 3.3.8 重组毕赤酵母的产酶进程 | 第82-84页 |
| 3.4 小结 | 第84-85页 |
| 第四章 根瘤农杆菌介导里氏木霉高效转化体系的构建 | 第85-102页 |
| 4.1 引言 | 第85页 |
| 4.2 材料与方法 | 第85-92页 |
| 4.2.1 材料与试剂 | 第85-87页 |
| 4.2.2 培养基 | 第87-88页 |
| 4.2.4 主要仪器 | 第88页 |
| 4.2.5 实验方法 | 第88-92页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第92-100页 |
| 4.3.1 重组质粒pCB-hPsT的构建 | 第92-94页 |
| 4.3.2 抗生素筛选浓度的确定 | 第94页 |
| 4.3.3 IM共培养基pH对转化效率的影响 | 第94-95页 |
| 4.3.4 共培养温度对转化效率的影响 | 第95-96页 |
| 4.3.5 乙酰丁香酮浓度对转化效率的影响 | 第96-97页 |
| 4.3.6 农杆菌浓度对转化效率的影响 | 第97-98页 |
| 4.3.7 孢子预萌发时间对转化效率的影响 | 第98-100页 |
| 4.3.8 里氏木霉转化子的传代稳定性 | 第100页 |
| 4.4 小结 | 第100-102页 |
| 第五章 厌氧真菌内切型-β-葡聚糖酶基因在里氏木霉中的表达 | 第102-121页 |
| 5.1 引言 | 第102页 |
| 5.2 材料与方法 | 第102-107页 |
| 5.2.1 材料和试剂 | 第102-103页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第103页 |
| 5.2.3 培养基 | 第103-104页 |
| 5.2.4 实验方法 | 第104-107页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第107-119页 |
| 5.3.1 催化区域的扩增 | 第107-108页 |
| 5.3.2 催化区域的密码子优化 | 第108-109页 |
| 5.3.3 介导转化载体的构建 | 第109-110页 |
| 5.3.4 里氏木霉转化子平板筛选 | 第110-112页 |
| 5.3.5 新序列celEn在里氏木霉宿主中的表达 | 第112-114页 |
| 5.3.6 里氏木霉转化子Treesei/En的摇瓶产酶筛选 | 第114-115页 |
| 5.3.7 高产CelEn重组子的摇瓶发酵时间进程 | 第115-118页 |
| 5.3.8 高产CelEn重组子所产EG的酶学性质 | 第118-119页 |
| 5.4 小结 | 第119-121页 |
| 第六章 里氏木霉内切型-β-葡聚糖酶基因的同源表达 | 第121-135页 |
| 6.1 引言 | 第121页 |
| 6.2 材料与方法 | 第121-124页 |
| 6.2.1 材料和试剂 | 第121-122页 |
| 6.2.2 实验仪器 | 第122页 |
| 6.2.3 培养基 | 第122页 |
| 6.2.4 实验方法 | 第122-124页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第124-133页 |
| 6.3.1 里氏木霉内切型-β-葡聚糖酶基因cel5a的PCR合成 | 第124页 |
| 6.3.2 介导转化载体pCB-h5A的构建 | 第124-125页 |
| 6.3.3 同源表达转化子的平板筛选 | 第125-126页 |
| 6.3.4 SDS-PAGE检测蛋白胞外表达 | 第126-127页 |
| 6.3.5 里氏木霉转化子T.reesei/5An的摇瓶产酶筛选 | 第127-129页 |
| 6.3.6 高产Cel5A重组子的摇瓶发酵时间进程 | 第129页 |
| 6.3.7 高产Cel5A重组子所产EG的pH适用范围 | 第129-130页 |
| 6.3.8 高产CelEn/Cel5A重组子产酶特性比较 | 第130-133页 |
| 6.4 小结 | 第133-135页 |
| 第七章 结论与展望 | 第135-138页 |
| 7.1 结论 | 第135-136页 |
| 7.2 论文创新点 | 第136-137页 |
| 7.3 展望 | 第137-138页 |
| 参考文献 | 第138-156页 |
| 作者简历 | 第156页 |
