| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 插图和附件列表 | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-30页 |
| 1.1 支原体 | 第14-17页 |
| 1.1.1 支原体的基因组 | 第16页 |
| 1.1.2 支原体的生长需求 | 第16页 |
| 1.1.3 支原体病的发病机理 | 第16-17页 |
| 1.2 牛支原体 | 第17-26页 |
| 1.2.1 发病机理 | 第17-20页 |
| 1.2.2 传播与危害 | 第20-22页 |
| 1.2.3 临床症状和病例变化 | 第22-25页 |
| 1.2.4 流行病学 | 第25页 |
| 1.2.5 经济损失 | 第25-26页 |
| 1.3 支原体质粒 | 第26-28页 |
| 1.3.1 内源质粒 | 第26-27页 |
| 1.3.2 基于转座子的自杀质粒 | 第27-28页 |
| 1.3.3 基于oriC的自我复制质粒 | 第28页 |
| 1.4 载体在牛支原体中的应用 | 第28-29页 |
| 1.5 本研究目的和意义 | 第29-30页 |
| 第二章 牛支原体自我复制载体的构建及功能验证 | 第30-53页 |
| 2.1 材料 | 第30-33页 |
| 2.1.1 支原体 | 第30页 |
| 2.1.2 菌种 | 第30页 |
| 2.1.3 质粒及载体 | 第30页 |
| 2.1.4 酶和试剂盒 | 第30-31页 |
| 2.1.5 DNA Marker及核酸染料 | 第31页 |
| 2.1.6 溶液配制 | 第31页 |
| 2.1.7 培养基配方 | 第31-32页 |
| 2.1.8 其他试剂及耗材 | 第32页 |
| 2.1.9 仪器 | 第32-33页 |
| 2.2 方法 | 第33-44页 |
| 2.2.1 牛支原体的复苏与培养 | 第33页 |
| 2.2.2 牛支原体标准株PG45的药物敏感性验证 | 第33页 |
| 2.2.3 牛支原体全基因组DNA的提取 | 第33页 |
| 2.2.4 载体pJH1.0的构建 | 第33-37页 |
| 2.2.5 载体pJH2.0的构建 | 第37-39页 |
| 2.2.6 载体pJH2.1的构建 | 第39-41页 |
| 2.2.7 载体pJH3.0的构建 | 第41-42页 |
| 2.2.8 载体pJH1.0、pJH2.0、pJH2.1和pJH3.0的功能验证 | 第42-44页 |
| 2.3 结果 | 第44-52页 |
| 2.3.1 牛支原体标准株PG45的药物敏感性验证 | 第44页 |
| 2.3.2 载体pJH1.0的构建 | 第44-46页 |
| 2.3.3 载体pJH2.0的构建 | 第46-48页 |
| 2.3.4 载体pJH2.1的构建 | 第48-50页 |
| 2.3.5 载体pJH3.0的构建 | 第50-51页 |
| 2.3.6 载体pJH1.0、pJH2.0、pJH2.1和pJH3.0的功能验证 | 第51-52页 |
| 2.4 讨论 | 第52页 |
| 2.4.1 牛支原体标准株PG45的药物敏感性 | 第52页 |
| 2.4.2 载体pJH1.0、pJH2.0、pJH2.1和pJH3.0的构建及功能分析 | 第52页 |
| 2.5 小结 | 第52-53页 |
| 第三章 载体电击转化条件的优化 | 第53-61页 |
| 3.1 材料 | 第53-55页 |
| 3.1.1 支原体 | 第53页 |
| 3.1.2 试剂盒 | 第53页 |
| 3.1.3 溶液配制 | 第53-54页 |
| 3.1.4 培养基配方 | 第54页 |
| 3.1.5 其他试剂及耗材 | 第54页 |
| 3.1.6 仪器 | 第54-55页 |
| 3.2 方法 | 第55-57页 |
| 3.2.1 牛支原体生长曲线的绘制 | 第55页 |
| 3.2.2 牛支原体生长时间的优化 | 第55-56页 |
| 3.2.3 电击电压的优化 | 第56页 |
| 3.2.4 质粒浓度的优化 | 第56-57页 |
| 3.3 结果 | 第57-59页 |
| 3.3.1 牛支原体生长曲线的绘制 | 第57页 |
| 3.3.2 牛支原体不同生长时间对电击转化效率的影响 | 第57-58页 |
| 3.3.3 不同电压对电击转化效率的影响 | 第58页 |
| 3.3.4 不同质粒浓度对电击转化效率的影响 | 第58-59页 |
| 3.4 讨论 | 第59-60页 |
| 3.4.1 牛支原体生长曲线的绘制 | 第59页 |
| 3.4.2 牛支原体不同生长时间对电击转化效率的影响 | 第59-60页 |
| 3.4.3 不同电压对电击转化效率的影响 | 第60页 |
| 3.4.4 不同质粒浓度对电击转化效率的影响 | 第60页 |
| 3.5 小结 | 第60-61页 |
| 第四章 复制起始位点序列特征分析及截短试验 | 第61-79页 |
| 4.1 材料 | 第61-63页 |
| 4.1.1 支原体 | 第61页 |
| 4.1.2 酶和试剂盒 | 第61页 |
| 4.1.3 DNA Marker及核酸染料 | 第61页 |
| 4.1.4 溶液配制 | 第61-62页 |
| 4.1.5 培养基配方 | 第62-63页 |
| 4.1.6 其他试剂及耗材 | 第63页 |
| 4.1.7 仪器 | 第63页 |
| 4.2 方法 | 第63-71页 |
| 4.2.1 复制起始位点序列特征分析 | 第63页 |
| 4.2.2 牛支原体的复苏与培养 | 第63-64页 |
| 4.2.3 牛支原体全基因组DNA的提取 | 第64页 |
| 4.2.4 载体pJH3.1的构建 | 第64-66页 |
| 4.2.5 载体pJH3.2的构建 | 第66-68页 |
| 4.2.6 载体pJHmini3.0的构建 | 第68-70页 |
| 4.2.7 载体pJH3.0、pJH3.1、pJH3.2和pJHmini3.0的功能验证 | 第70-71页 |
| 4.3 结果 | 第71-77页 |
| 4.3.1 复制起始位点序列特征分析 | 第71-73页 |
| 4.3.2 载体pJH3.1的构建 | 第73-75页 |
| 4.3.3 载体pJH3.2的构建 | 第75-76页 |
| 4.3.4 载体pJHmini3.0的构建 | 第76-77页 |
| 4.3.5 载体pJH3.0、pJH3.1、pJH3.2和pJHmini3.0的功能验证 | 第77页 |
| 4.4 讨论 | 第77-78页 |
| 4.5 小结 | 第78-79页 |
| 第五章 oriC载体稳定性检验 | 第79-95页 |
| 5.1 材料 | 第79-82页 |
| 5.1.1 支原体 | 第79页 |
| 5.1.2 质粒及载体 | 第79页 |
| 5.1.3 酶和试剂盒 | 第79页 |
| 5.1.4 DNA Marker及核酸染料 | 第79-80页 |
| 5.1.5 溶液配制 | 第80-81页 |
| 5.1.6 培养基配方 | 第81-82页 |
| 5.1.7 其他试剂及耗材 | 第82页 |
| 5.1.8 仪器 | 第82页 |
| 5.2 方法 | 第82-86页 |
| 5.2.1 Southern blot方法检验载体稳定性 | 第82-85页 |
| 5.2.2 质粒pJHmini3.0的回收 | 第85页 |
| 5.2.3 无抗性传代稳定性的验证 | 第85-86页 |
| 5.3 结果 | 第86-93页 |
| 5.3.1 Southem blot方法检验载体稳定性 | 第86-91页 |
| 5.3.2 质粒pJHmini3.0的回收 | 第91-92页 |
| 5.3.3 无抗性传代稳定性的检验 | 第92-93页 |
| 5.4 讨论 | 第93-94页 |
| 5.4.1 Southern blot方法检验载体稳定性 | 第93页 |
| 5.4.2 质粒pJHmini3.0在牛支原体中稳定存在并可以回收 | 第93-94页 |
| 5.4.3 无抗性传代稳定性的检验 | 第94页 |
| 5.5 小结 | 第94-95页 |
| 第六章 牛支原体内源及外源蛋白的表达 | 第95-131页 |
| 6.1 材料 | 第95-100页 |
| 6.1.1 支原体 | 第95页 |
| 6.1.2 菌种及细胞系 | 第95-96页 |
| 6.1.3 质粒及载体 | 第96页 |
| 6.1.4 酶和试剂盒 | 第96页 |
| 6.1.5 实验动物 | 第96页 |
| 6.1.6 DNA Marker及核酸染料 | 第96页 |
| 6.1.7 溶液配制 | 第96-97页 |
| 6.1.8 培养基配方 | 第97-98页 |
| 6.1.9 其他试剂及耗材 | 第98-99页 |
| 6.1.10 仪器 | 第99-100页 |
| 6.2 方法 | 第100-116页 |
| 6.2.1 牛支原体外源蛋白的表达 | 第100-104页 |
| 6.2.2 牛支原体内源蛋白的表达 | 第104-113页 |
| 6.2.3 MBOVPG45_0790和P48蛋白过表达株对MDBK细胞的黏附及凋亡的影响 | 第113-116页 |
| 6.3 结果 | 第116-129页 |
| 6.3.1 牛支原体外源蛋白的表达 | 第116-119页 |
| 6.3.2 牛支原体内源蛋白的表达 | 第119-125页 |
| 6.3.3 MBOVPG45_0790和P48蛋白过表达株对MDBK细胞的黏附及凋亡的影响 | 第125-129页 |
| 6.4 讨论 | 第129-130页 |
| 6.4.1 牛支原体外源蛋白的表达 | 第129页 |
| 6.4.2 牛支原体内源蛋白的表达 | 第129页 |
| 6.4.3 过表达载体的鉴定 | 第129页 |
| 6.4.4 MBOVPG45_0790和P48蛋白过表达株对MDBK细胞的黏附及凋亡的影响 | 第129-130页 |
| 6.5 小结 | 第130-131页 |
| 第七章 结论 | 第131-132页 |
| 第八章 创新点 | 第132-133页 |
| 参考文献 | 第133-146页 |
| 致谢 | 第146-147页 |
| 作者简历 | 第147-148页 |
