| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-25页 |
| 1.1 自然界中的锰循环 | 第12-16页 |
| 1.1.1 锰的地球化学循环 | 第12-13页 |
| 1.1.2 Mn(Ⅱ)氧化的分子生化机制 | 第13-15页 |
| 1.1.3 可溶性 | 第15-16页 |
| 1.2 锰氧化相关基因 | 第16-19页 |
| 1.2.1 多酮氧化酶MCO | 第16-18页 |
| 1.2.2 过氧化氢酶 | 第18-19页 |
| 1.3 RT-qPCR技术 | 第19-22页 |
| 1.3.1 RTq-PCR的分类 | 第20-21页 |
| 1.3.2 RTq-PCR技术的主要应用 | 第21-22页 |
| 1.4 基因敲除 | 第22-23页 |
| 1.4.1 λ噬菌体Red重组 | 第22-23页 |
| 1.5 研究目的及意义 | 第23-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-32页 |
| 2.1.1 实验菌种及材料 | 第25-26页 |
| 2.1.2 菌株 | 第26页 |
| 2.1.3 培养基 | 第26-27页 |
| 2.1.4 PCR反应的引物 | 第27-30页 |
| 2.1.5 实验中所用试剂 | 第30-32页 |
| 2.1.6 主要仪器 | 第32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-40页 |
| 2.2.1 锰氧化活性的测定 | 第32-33页 |
| 2.2.2 生长曲线测定 | 第33页 |
| 2.2.3 细菌的总DNA抽提 | 第33页 |
| 2.2.4 琼脂糖凝胶电泳及产物回收 | 第33页 |
| 2.2.5 DNA测序及分析 | 第33页 |
| 2.2.6 酶切 | 第33-34页 |
| 2.2.7 酶连 | 第34页 |
| 2.2.8 大肠杆菌钙转感受态细胞制备 | 第34页 |
| 2.2.9 大肠杆菌Red重组电转感受态制备 | 第34页 |
| 2.2.10 大肠杆菌钙转化 | 第34-35页 |
| 2.2.11 电转化 | 第35页 |
| 2.2.12 大肠杆菌质粒的快速检测 | 第35页 |
| 2.2.13 SDS-PAGE | 第35页 |
| 2.2.14 细菌的锰氧化活性测定 | 第35-36页 |
| 2.2.15 KMnO_4标准曲线的制作方法 | 第36页 |
| 2.2.16 PCR产物的T-A克隆 | 第36页 |
| 2.2.17 菌种保藏 | 第36页 |
| 2.2.18 RT-qPCR | 第36-39页 |
| 2.2.19 基因敲除 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-61页 |
| 3.1 大肠杆菌MB266的生长曲线和锰氧化活性曲线的测定 | 第40-50页 |
| 3.1.1 Real time-qPCR分析的基因的引物与功能 | 第41-43页 |
| 3.1.2 总RNA提取 | 第43页 |
| 3.1.3 RT-qPCR的结果与分析 | 第43-50页 |
| 3.2 基因敲除 | 第50-57页 |
| 3.2.1 mco266基因的中断 | 第50-52页 |
| 3.2.2 mco266基因的补偿实验 | 第52-53页 |
| 3.2.3 以MB266为出发菌株进行katE基因的中断 | 第53-55页 |
| 3.2.4 对MB279进行katE基因的补偿实验 | 第55-56页 |
| 3.2.5 以MB267为出发菌株,进行基因katE的中断 | 第56-57页 |
| 3.2.6 对MB277进行基因katE补偿实验 | 第57页 |
| 3.3 多铜氧化酶MCO266与细胞色素C蛋白的共表达和锰氧化活性分析 | 第57-61页 |
| 3.3.1 共表达质粒图谱及酶切验证图 | 第58-60页 |
| 3.3.2 多铜氧化酶MC0266与细胞色素C蛋白的共表达 | 第60页 |
| 3.3.3 重组菌活性的测定 | 第60-61页 |
| 4 小结 | 第61-62页 |
| 5 讨论 | 第62-65页 |
| 参考文献 | 第65-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
