| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 主要符号对照表 | 第12-13页 |
| 第1章 前言 | 第13-19页 |
| 1.1 食药用真菌多糖的研究进展 | 第13页 |
| 1.2 真菌多糖粗提取与分离纯化的研究 | 第13-14页 |
| 1.3 真菌多糖的结构研究 | 第14-15页 |
| 1.4 真菌多糖生物活性及机制的研究 | 第15-16页 |
| 1.4.1 真菌多糖免疫调节活性的研究 | 第15页 |
| 1.4.2 真菌多糖抗肿瘤活性的研究 | 第15页 |
| 1.4.3 真菌多糖免疫调节活性机制的研究 | 第15-16页 |
| 1.5 华美牛肝菌的研究现状 | 第16页 |
| 1.6 本课题研究背景、意义及研究的主要内容 | 第16-19页 |
| 1.6.1 本课题的研究背景和意义 | 第16-17页 |
| 1.6.2 本课题的创新点 | 第17页 |
| 1.6.3 研究内容 | 第17-19页 |
| 1.6.3.1 华美牛肝菌多糖(BSF-X)提取、分离纯化的研究 | 第17页 |
| 1.6.3.2 华美牛肝菌多糖(BSF-X)化学结构的研究 | 第17页 |
| 1.6.3.3 华美牛肝菌多糖(BSF-X)生物活性的研究 | 第17-18页 |
| 1.6.3.4 华美牛肝菌多糖(BSF-1)免疫机制的初步研究 | 第18-19页 |
| 第2章 华美牛肝菌多糖的提取与分离纯化 | 第19-25页 |
| 2.1 实验材料、试剂与仪器 | 第19页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第19页 |
| 2.1.2 药品与试剂 | 第19页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-22页 |
| 2.2.1 华美牛肝菌子实体粗多糖的提取 | 第19-20页 |
| 2.2.1.1 预处理 | 第19页 |
| 2.2.1.2 热水浸提法 | 第19页 |
| 2.2.1.3 浓缩 | 第19-20页 |
| 2.2.1.4 醇沉 | 第20页 |
| 2.2.1.5 蒸馏水溶解除蛋白质 | 第20页 |
| 2.2.2 粗多糖的分离纯化 | 第20-21页 |
| 2.2.2.1 药品的配制 | 第20页 |
| 2.2.2.2 DEAE-纤维素的活化 | 第20页 |
| 2.2.2.3 装柱与平衡 | 第20-21页 |
| 2.2.2.4 过柱与纯化多糖 | 第21页 |
| 2.2.2.5 高温浓缩洗脱收集液 | 第21页 |
| 2.2.2.6 DEAE-纤维素的再生 | 第21页 |
| 2.2.2.7 超净水透析 | 第21页 |
| 2.2.3 多糖的定性检测 | 第21-22页 |
| 2.2.3.1 定性检测的原理 | 第21-22页 |
| 2.2.3.2 实验操作 | 第22页 |
| 2.2.4 紫外光谱(UV)的检测 | 第22页 |
| 2.2.5 高效凝胶渗透色谱法分析(HPGPC) | 第22页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第22-24页 |
| 2.3.1 华美牛肝菌子实体粗多糖的提取 | 第22页 |
| 2.3.2 华美牛肝菌子实体提取物粗多糖经DEAE-纤维素色谱法的初步分离纯化 | 第22-23页 |
| 2.3.3 样品的紫外光谱分析 | 第23页 |
| 2.3.4 高效凝胶渗透色谱法分析 | 第23-24页 |
| 2.4 本章小结 | 第24-25页 |
| 第3章 华美牛肝菌多糖的结构研究 | 第25-31页 |
| 3.1 材料 | 第25页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第25页 |
| 3.1.2 药品与试剂 | 第25页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第25页 |
| 3.2 实验方法 | 第25-26页 |
| 3.2.1 傅里叶红外光谱分析 | 第25页 |
| 3.2.2 甲基化-气质联用(GC-MS)法分析 | 第25-26页 |
| 3.2.2.1 多糖的甲基化 | 第25页 |
| 3.2.2.2 甲基化多糖的水解 | 第25-26页 |
| 3.2.2.3 水解后的甲基化多糖进行硅烷化衍生 | 第26页 |
| 3.2.2.4 衍生后的甲基化多糖进行GC-MS分析 | 第26页 |
| 3.2.3 核磁共振法分析 | 第26页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第26-30页 |
| 3.3.1 BSF-X的红外光谱分析 | 第26-27页 |
| 3.3.2 甲基化-气质联用(GC-MS)法分析 | 第27-28页 |
| 3.3.3 BSF-X的NMR分析 | 第28-30页 |
| 3.4 本章小结 | 第30-31页 |
| 第4章 华美牛肝菌多糖免疫调节活性及抗肿瘤活性的研究 | 第31-49页 |
| 4.1 实验材料、试剂与仪器 | 第31-32页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第31页 |
| 4.1.2 主要试剂及配制方法 | 第31页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第31-32页 |
| 4.2 实验方法 | 第32-36页 |
| 4.2.1 细胞免疫活性实验 | 第32-34页 |
| 4.2.1.1 CCK-8 法检测BSF-X对三种免疫细胞(Raji、Jurkat以及Raw264.7细胞)增殖的影响 | 第32页 |
| 4.2.1.2 BSF-X对三种免疫细胞(Raji、Jurkat以及Raw264.7 细胞)细胞周期的影响 | 第32-33页 |
| 4.2.1.3 BSF-X对Raw264.7 细胞释放NO水平的影响 | 第33页 |
| 4.2.1.4 BSF-X对Raw264.7 细胞吞噬中性红能力的影响 | 第33页 |
| 4.2.1.5 BSF-X对Raw264.7 细胞释放细胞因子(TNF-α、IL-6 和IL-23)水平的影响 | 第33-34页 |
| 4.2.1.5.1 细胞上清液的收集 | 第33-34页 |
| 4.2.1.5.2 细胞因子(TNF-α、IL-6 和IL-23)标准品及其待测上清液的稀释 | 第34页 |
| 4.2.1.5.3 ELISA法检测细胞因子浓度 | 第34页 |
| 4.2.2 抗肿瘤活性研究 | 第34-36页 |
| 4.2.2.1 体外抗肿瘤活性研究(BSF-X对L929细胞的增殖抑制作用) | 第34-35页 |
| 4.2.2.2 体内抗肿瘤活性研究 | 第35-36页 |
| 4.2.3 统计学处理 | 第36页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第36-48页 |
| 4.3.1 BSF-X对B淋巴细胞的增殖作用 | 第36-37页 |
| 4.3.2 BSF-X对T淋巴细胞的增殖影响 | 第37-38页 |
| 4.3.3 BSF-X对巨噬细胞的增殖作用 | 第38-39页 |
| 4.3.4 BSF-X对B淋巴细胞的周期作用 | 第39-40页 |
| 4.3.5 BSF-X对T淋巴细胞的周期影响 | 第40-41页 |
| 4.3.6 BSF-X对Raw264.7 细胞的周期影响 | 第41-42页 |
| 4.3.7 BSF-X对巨噬细胞NO释放的影响 | 第42-43页 |
| 4.3.8 BSF-X对巨噬细胞吞噬中性红能力的影响 | 第43-44页 |
| 4.3.9 BSF-X对巨噬细胞分泌促炎症细胞因子(TNF-α，IL-6，IL-23)能力的影响 | 第44-46页 |
| 4.3.10 BSF-X体外对L929细胞的增殖抑制作用 | 第46-47页 |
| 4.3.11 BSF-X体内对S180小鼠肿瘤的抑制作用 | 第47-48页 |
| 4.4 本章小结 | 第48-49页 |
| 第5章 华美牛肝菌多糖(BSF-1)免疫活性机制的初步研究 | 第49-62页 |
| 5.1 实验材料、试剂与仪器 | 第49页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第49页 |
| 5.1.2 主要试剂及配制 | 第49页 |
| 5.1.3 主要仪器设备 | 第49页 |
| 5.2 实验方法 | 第49-51页 |
| 5.2.1 对B细胞、T细胞和Raw264.7 细胞刺激的药理评价 | 第49页 |
| 5.2.2 巨噬细胞吞噬测定 | 第49页 |
| 5.2.3 Raw264.7 细胞周期分析流式细胞术 | 第49-50页 |
| 5.2.4 RNA提取、实验室准备和测序 | 第50页 |
| 5.2.5 转录组数据分析 | 第50页 |
| 5.2.6 转录组的差异表达与定量分析 | 第50页 |
| 5.2.7 GO注释和GO/KEGG富集分析 | 第50-51页 |
| 5.3 结果分析与讨论 | 第51-61页 |
| 5.3.1 体外BSF-1 对B细胞增殖的影响 | 第51页 |
| 5.3.2 体外BSF-1 对T细胞增殖的影响 | 第51-52页 |
| 5.3.3 体外BSF-1 对巨噬细胞增殖的影响 | 第52-53页 |
| 5.3.4 巨噬细胞吞噬作用 | 第53页 |
| 5.3.5 BSF-1 对Raw264.7 细胞的细胞周期分布的影响 | 第53-54页 |
| 5.3.6 转录组测序和从头装配 | 第54-56页 |
| 5.3.7 两个Raw264.7 细胞组的转录组图谱 | 第56-57页 |
| 5.3.8 空白对照组和BSF-1 组之间的差异表达基因 | 第57-58页 |
| 5.3.9 差异表达基因的GO和KEGG富集分析 | 第58-61页 |
| 5.4 本章小结 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 致谢 | 第68-71页 |
| 在学期间的科研情况 | 第71-72页 |
