| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第10-26页 |
| 1.1 木聚糖酶的种类 | 第10-11页 |
| 1.2 木聚糖酶的结构 | 第11-12页 |
| 1.3 木聚糖酶的应用 | 第12-16页 |
| 1.3.1 饲料工业中木聚糖酶的应用情况 | 第12-13页 |
| 1.3.2 食品工业中木聚糖酶的应用情况 | 第13-14页 |
| 1.3.3 造纸工业中木聚糖酶的应用情况 | 第14-15页 |
| 1.3.4 能源转化方面木聚糖酶的应用情况 | 第15-16页 |
| 1.4 木聚糖酶基因的发掘与利用 | 第16-18页 |
| 1.5 木聚糖酶的分子改造 | 第18-23页 |
| 1.5.1 理性设计 | 第19-21页 |
| 1.5.2 非理性设计 | 第21-23页 |
| 1.6 碱性酶耐碱性机制的研究 | 第23-25页 |
| 1.7 研究目的和意义 | 第25-26页 |
| 2 实验材料与方法 | 第26-48页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 菌株与载体 | 第26页 |
| 2.1.2 酶及主要试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.3 仪器 | 第27-28页 |
| 2.2 溶液试剂 | 第28-31页 |
| 2.2.1 抗生素溶液 | 第28页 |
| 2.2.2 DNS溶液配制 | 第28-29页 |
| 2.2.3 核酸电泳试剂 | 第29页 |
| 2.2.4 蛋白纯化所需溶液 | 第29页 |
| 2.2.5 蛋白电泳所需溶液 | 第29-30页 |
| 2.2.6 实验所需其他溶液配制 | 第30-31页 |
| 2.3 实验方法 | 第31-34页 |
| 2.3.1 菌种的活化与培养 | 第31-32页 |
| 2.3.2 质粒提取与DNA产物纯化 | 第32页 |
| 2.3.3 DNA浓度和纯度的测定 | 第32页 |
| 2.3.4 化转感受态的制备方法 | 第32页 |
| 2.3.5 化转感受态细胞的使用方法 | 第32-33页 |
| 2.3.6 电转感受态细胞的制备 | 第33页 |
| 2.3.7 电转感受态细胞的使用 | 第33-34页 |
| 2.4 木聚糖酶基因随机突变库的建立 | 第34-42页 |
| 2.4.1 质粒突变体的构建 | 第34-36页 |
| 2.4.2 载体的重构建 | 第36-38页 |
| 2.4.3 随机突变文库的筛选方法 | 第38页 |
| 2.4.4 定点突变的实施过程 | 第38-39页 |
| 2.4.5 定点突变引物设计 | 第39-42页 |
| 2.4.6 组合突变体的构建 | 第42页 |
| 2.5 木聚糖酶的表达和纯化 | 第42-44页 |
| 2.5.1 蛋白的表达和粗酶液收集 | 第42页 |
| 2.5.2 蛋白纯化 | 第42-43页 |
| 2.5.3 蛋白浓度和纯度的测定 | 第43页 |
| 2.5.4 D-xylose木糖标准曲线的绘制 | 第43页 |
| 2.5.5 木聚糖酶活性的测定 | 第43-44页 |
| 2.6 木聚糖酶特性的表征 | 第44-48页 |
| 2.6.1 酶的最适作用pH测定 | 第44页 |
| 2.6.2 酶的最适作用温度测定 | 第44-45页 |
| 2.6.3 酶的温度稳定性测定 | 第45页 |
| 2.6.4 酶的pH稳定性测定 | 第45页 |
| 2.6.5 酶动力学参数测定 | 第45-48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-62页 |
| 3.1 随机突变文库的建立 | 第48页 |
| 3.2 随机突变文库的筛选 | 第48-49页 |
| 3.3 蛋白质的纯化与其浓度测定 | 第49-50页 |
| 3.4 木糖浓度的测定 | 第50页 |
| 3.5 定点突变位点的确定 | 第50-55页 |
| 3.5.1 定点突变酶的pH曲线测定 | 第51-55页 |
| 3.6 组合突变酶的酶学性质表征 | 第55-60页 |
| 3.6.1 双位点突变酶E109R+E160R的酶学性质表征 | 第56-57页 |
| 3.6.2 三位点突变酶E109R+E160R+D89R的酶学性质表征 | 第57-59页 |
| 3.6.3 四位点突变酶E109R+E160R+D89R+E135R的酶学性质表征 | 第59-60页 |
| 3.7 组合突变酶的酶动力学参数 | 第60-61页 |
| 3.8 突变酶分子大小的确定 | 第61-62页 |
| 讨论 | 第62-64页 |
| 结论 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 在学期间的研究成果 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
