中文摘要 | 第9-12页 |
ABSTRACT | 第12-15页 |
英文缩略词(Abbreviation) | 第16-18页 |
前言 | 第18-20页 |
第一部分 Ferrostatin-1 对MPP~+损伤PC12细胞的保护作用 | 第20-31页 |
1 实验材料及仪器 | 第20-21页 |
1.1 细胞株 | 第20页 |
1.2 药物 | 第20页 |
1.3 主要试剂 | 第20页 |
1.4 主要试剂配制 | 第20页 |
1.5 主要仪器 | 第20-21页 |
2.实验方法 | 第21-24页 |
2.1 细胞复苏 | 第21页 |
2.2 细胞传代和培养 | 第21-22页 |
2.3 细胞冻存 | 第22页 |
2.4 细胞计数 | 第22页 |
2.5 MPP~+药液和Ferrostatin-1 的配制 | 第22页 |
2.6 MPP~+浓度筛选 | 第22-23页 |
2.7 实验分组 | 第23页 |
2.8 Ferrostatin-1 对MPP~+损伤PC12细胞的药物敏感性试验 | 第23-24页 |
2.9 倒置显微镜观察Ferrostatin-1 对MPP~+损伤PC12细胞形态 | 第24页 |
2.10 LDH 试剂盒检测细胞漏出率 | 第24页 |
2.11 统计学方法 | 第24页 |
3 实验结果 | 第24-29页 |
3.1 MPP~+浓度筛选 | 第24-25页 |
3.2 Ferrostatin-1 对MPP~+损伤的PC12细胞活力的影响 | 第25-27页 |
3.3 Ferrostatin-1 对MPP~+损伤PC12细胞的形态学观察 | 第27-28页 |
3.4 Ferrostatin-1 对MPP~+损伤的PC12细胞的LDH漏出的影响 | 第28-29页 |
4 讨论 | 第29-30页 |
4.1 Ferrostatin-1 对MPP~+损伤的PC12细胞存活率的影响 | 第29页 |
4.2 Ferrostatin-1 对MPP~+诱导PC12细胞损伤的保护作用 | 第29-30页 |
5 小结 | 第30-31页 |
第二部分 MPP~+诱导PC12细胞损伤中Ferroptosis的存在 | 第31-50页 |
1 实验材料及仪器 | 第31-33页 |
1.1 细胞株 | 第31页 |
1.2 药物 | 第31页 |
1.3 主要试剂 | 第31-32页 |
1.4 主要试剂配制 | 第32页 |
1.5 主要仪器 | 第32-33页 |
2 实验方法 | 第33-37页 |
2.1 细胞复苏、传代、培养和冻存 | 第33页 |
2.2 实验分组及药物处理 | 第33页 |
2.3 5种抑制剂对MPP~+诱导PC12细胞的影响 | 第33-34页 |
2.4 倒置荧光显微镜及流式细胞术检测 | 第34页 |
2.5 酶标仪检测Caspase-3 在细胞中的表达 | 第34页 |
2.6 氧化应激指标的检测 | 第34-36页 |
2.7 Western blot检测Ferroportin 1(FP1)蛋白的表达 | 第36-37页 |
2.8 透射电子显微镜观察线粒体形态变化 | 第37页 |
2.9 统计学处理 | 第37页 |
3 结果 | 第37-46页 |
3.1 5种抑制剂对MPP~+诱导PC12细胞损伤的保护作用 | 第37-38页 |
3.2 MDC染色检测细胞自噬 | 第38-39页 |
3.3 流式细胞术对MDC染色的结果分析 | 第39-40页 |
3.4 Caspase-3 表达检测 | 第40-41页 |
3.5 细胞内胞质活性氧(ROS)的检测 | 第41-42页 |
3.6 细胞内脂质活性氧(ROS)的检测 | 第42-43页 |
3.7 超氧化物歧化酶(SOD)的检测 | 第43-44页 |
3.8 丙二醛(MDA)的检测 | 第44-45页 |
3.9 谷胱甘肽含量检测 | 第45页 |
3.10 Western blot检测细胞内Ferroportin 1(FP1)蛋白的表达情况 | 第45-46页 |
3.11 线粒体形态的检测 | 第46页 |
4 讨论 | 第46-48页 |
5 小结 | 第48-50页 |
第三部分 MPP~+诱导PC12细胞Ferroptosis的分子机制 | 第50-65页 |
1 实验材料及仪器 | 第50-52页 |
1.1 细胞株 | 第50页 |
1.2 药物 | 第50页 |
1.3 主要试剂 | 第50-51页 |
1.4 主要试剂配制 | 第51页 |
1.5 主要仪器 | 第51-52页 |
2 实验方法 | 第52-58页 |
2.1 细胞复苏、传代、培养和冻存 | 第52页 |
2.2 实验分组及药物处理 | 第52页 |
2.3 细胞处理 | 第52页 |
2.4 细胞总蛋白提取(蛋白样品的制备) | 第52-53页 |
2.5 蛋白含量的测定 | 第53-54页 |
2.6 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第54-56页 |
2.7 细胞总RNA提取(RNA样品的制备) | 第56-57页 |
2.8 cDNA的合成 | 第57页 |
2.9 聚合酶链式反应 | 第57-58页 |
2.10 琼脂糖凝胶电泳 | 第58页 |
2.11 统计学处理 | 第58页 |
3 结果 | 第58-62页 |
3.1 Western blot检测细胞Ptgs2蛋白的表达情况 | 第58-59页 |
3.2 Western blot检测细胞GPX4蛋白的表达情况 | 第59页 |
3.3 Western blot检测DJ-1 蛋白表达 | 第59-60页 |
3.4 Ptgs2基因的表达水平 | 第60-61页 |
3.5 RT-PCR法检测DJ-1 基因水平 | 第61-62页 |
4 讨论 | 第62-64页 |
4.1 氧化应激与Ferroptosis | 第62-63页 |
4.2 DJ-1 与Ferroptosis | 第63-64页 |
5 小结 | 第64-65页 |
讨论 | 第65-67页 |
总结 | 第67-71页 |
参考文献 | 第71-75页 |
综述 | 第75-85页 |
参考文献 | 第82-85页 |
附录 | 第85-86页 |
致谢 | 第86页 |