| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-27页 |
| 1.1 PPR蛋白简介 | 第10-16页 |
| 1.1.1 PPR基因家族结构特征及其分类 | 第10-13页 |
| 1.1.2 PPR基因家族的分布 | 第13-14页 |
| 1.1.3 PPR蛋白的生物学功能 | 第14-16页 |
| 1.2 重复序列蛋白对核苷酸的模块化识别及基因操作相关领域技术研究状况 | 第16-23页 |
| 1.2.1 TALE蛋白模块化识别及TALEN介导的基因靶向修饰 | 第16-19页 |
| 1.2.2 PUF蛋白的模块化识别及功能研究 | 第19-21页 |
| 1.2.3 PPR蛋白的模块化识别 | 第21-23页 |
| 1.3 Godern Gate克隆 | 第23-25页 |
| 1.3.1 Type IIs限制性内切酶 | 第23页 |
| 1.3.2 Golden Gate克隆技术原理 | 第23-25页 |
| 1.4 研究目的及意义 | 第25-27页 |
| 2 实验材料与实验方法 | 第27-51页 |
| 2.1 实验仪器 | 第27-29页 |
| 2.2 实验试剂 | 第29-34页 |
| 2.2.1 实验所用的菌株和载体 | 第29-31页 |
| 2.2.2 实验所用的缓冲液、培养基及其配置方法 | 第31-34页 |
| 2.2.3 实验所用化学试剂和酶 | 第34页 |
| 2.2.4 实验所用试剂盒 | 第34页 |
| 2.3 实验方法 | 第34-51页 |
| 2.3.1 聚合酶链式反应 | 第34-35页 |
| 2.3.2 T-A克隆 | 第35-36页 |
| 2.3.3 表达载体的构建 | 第36-41页 |
| 2.3.4 滚环突变法构建点突变 | 第41-42页 |
| 2.3.5 Golden Gate cloning依赖的克隆构建 | 第42-45页 |
| 2.3.6 蛋白的表达纯化 | 第45-47页 |
| 2.3.7 蛋白浓度的测定 | 第47-48页 |
| 2.3.8 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第48-49页 |
| 2.3.9 凝胶迁移实验 | 第49-51页 |
| 3 实验结果分析 | 第51-84页 |
| 3.1 人工设计PPR序列信息 | 第51-52页 |
| 3.2 组装dPPR方法的探索 | 第52-61页 |
| 3.2.1 分析dPPR序列得到构建模块 | 第53-54页 |
| 3.2.2 组装所用模板的克隆构建 | 第54-55页 |
| 3.2.3 探究一步法组装dPPR重复序列个数 | 第55-59页 |
| 3.2.4 依据Golden Gate克隆原理验证构建组合 | 第59-61页 |
| 3.3 组装方法的成功确立 | 第61-64页 |
| 3.3.1 组装方法的确立 | 第61-63页 |
| 3.3.2 构建的dPPR序列的蛋白表达纯化 | 第63-64页 |
| 3.4 组装方法的应用 | 第64-84页 |
| 3.4.1 探究dPPR code识别RNA碱基 | 第64-75页 |
| 3.4.2 构建任意氨基酸组合密码的序列 | 第75-77页 |
| 3.4.3 构建含有不同数目repeat的序列 | 第77-78页 |
| 3.4.4 构建任意code的dPPR序列并验证其活性 | 第78-81页 |
| 3.4.5 在每个重复序列上同时引入多个突变 | 第81-84页 |
| 4 总结与讨论展望 | 第84-87页 |
| 4.1 总结 | 第84-85页 |
| 4.2 讨论展望 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-94页 |
| 附录 | 第94-102页 |
| 附录A T-A克隆所用引物列表 | 第94-96页 |
| 附录B 探究一步法构建所用引物 | 第96-97页 |
| 附录C 以 2R、3R、4R为元件构建所需引物列表 | 第97-100页 |
| 附录D 合成的基因ND-Vector序列质粒图谱 | 第100-101页 |
| 附录E 论文中图片引用获得的许可 | 第101页 |
| 附录F 个人简历、在学期间参与发表的学术论文与研究成果 | 第101-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
