| 本研究创新点 | 第5-8页 |
| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 第一章 前言 | 第14-48页 |
| 1 极端微生物 | 第14-18页 |
| 1.1 极端环境微生物的类型 | 第14-16页 |
| 1.2 极端环境微生物的应用 | 第16-18页 |
| 2 微生物培养与胞外酶表达 | 第18-20页 |
| 3 蛋白酶 | 第20-23页 |
| 3.1 蛋白酶简介和分类 | 第20-21页 |
| 3.2 嗜热蛋白酶 | 第21-22页 |
| 3.3 碱性蛋白酶 | 第22页 |
| 3.4 丝氨酸蛋白酶 | 第22-23页 |
| 4 外源基因重组表达 | 第23-28页 |
| 4.1 表达系统 | 第23-24页 |
| 4.2 大肠杆菌表达系统 | 第24-25页 |
| 4.3 多包涵体与蛋白质复性 | 第25-28页 |
| 5 角蛋白 | 第28-42页 |
| 5.1 角蛋白的结构 | 第28-29页 |
| 5.2 羽毛与羽毛角蛋白的结构与组成 | 第29-31页 |
| 5.3 角蛋白降解 | 第31-40页 |
| 5.4 角蛋白酶的综合应用 | 第40-42页 |
| 6 降解角蛋白的嗜热微生物 | 第42-45页 |
| 7 本课题的研究目的、意义和内容 | 第45-48页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第48-66页 |
| 1 材料 | 第48-54页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第48-49页 |
| 1.2 药品试剂和培养基 | 第49-50页 |
| 1.3 实验使用溶液 | 第50-54页 |
| 1.4 实验仪器 | 第54页 |
| 2 实验方法 | 第54-66页 |
| 2.1 羽毛处理 | 第54页 |
| 2.2 细菌培养接种 | 第54-55页 |
| 2.3 PCR技术 | 第55-56页 |
| 2.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第56页 |
| 2.5 DNA样品的酚-乙醇抽提沉淀处理 | 第56-57页 |
| 2.6 DNA片段的凝胶回收与试剂盒纯化 | 第57页 |
| 2.7 限制性内切酶酶切和连接反应 | 第57-58页 |
| 2.8 大肠杆菌感受态细胞的制备与转化(钙转法) | 第58页 |
| 2.9 碱裂解法小量制备质粒DNA | 第58页 |
| 2.10 重组蛋白在大肠杆菌中的诱导表达 | 第58-59页 |
| 2.11 包涵体制备 | 第59页 |
| 2.12 包涵体的溶解和蛋白质复性 | 第59页 |
| 2.13 SDS-PAGE | 第59-60页 |
| 2.14 制备抗体及western-blot检测 | 第60-62页 |
| 2.15 重组蛋白的纯化 | 第62-63页 |
| 2.16 以Azocasein为底物进行活性测定 | 第63-64页 |
| 2.17 细菌染色 | 第64-66页 |
| 第三章 培养条件对两种嗜热菌生长和产胞外蛋白酶的影响 | 第66-84页 |
| 1. 结果与分析 | 第66-79页 |
| 1.1 不同培养条件对芽胞杆菌WF146生长和胞外蛋白酶表达的影响 | 第66-74页 |
| 1.2 不同培养条件对高温放线菌CDF生长和胞外蛋白酶表达的影响 | 第74-79页 |
| 2. 讨论 | 第79-82页 |
| 2.1 营养条件对芽胞杆菌WF146生长、产酶的影响 | 第79-81页 |
| 2.2 营养条件对高温放线菌CDF生长、产酶的影响 | 第81-82页 |
| 3. 本章小结 | 第82-84页 |
| 第四章 嗜热芽胞杆菌WF146和高温放线菌CDF降解羽毛特性的比较分析 | 第84-112页 |
| 1. 结果与分析 | 第84-104页 |
| 1.1 芽胞杆菌WF146对羽毛的降解作用 | 第84-89页 |
| 1.2 高温放线菌CDF对羽毛的降解作用 | 第89-94页 |
| 1.3 寡营养条件下两种细菌生长、产胞外蛋白酶和羽毛降解能力 | 第94-104页 |
| 2. 讨论 | 第104-111页 |
| 2.1 羽毛底物对芽胞杆菌WF146和高温放线菌CDF生长和产胞外蛋白酶的影响 | 第104-107页 |
| 2.2 两种嗜热细菌降解羽毛特性比较 | 第107-111页 |
| 3. 本章小结 | 第111-112页 |
| 第五章 芽胞杆菌WF146和高温放线菌CDF降解羽毛机制的初步研究 | 第112-136页 |
| 1. 结果与分析 | 第112-129页 |
| 1.1 胞外蛋白酶对羽毛的降解 | 第112-118页 |
| 1.2 蛋白酶WF146和C2蛋白酶的羽毛降解活性比较 | 第118-122页 |
| 1.3 两种嗜热菌细胞成分对降解羽毛的影响 | 第122-127页 |
| 1.4 羽毛降解过程中两种细菌的显微观察 | 第127-129页 |
| 2. 讨论 | 第129-134页 |
| 2.1 蛋白酶WF146和蛋白酶C2的降解羽毛活性差异 | 第129-130页 |
| 2.2 芽胞杆菌WF146和高温放线菌CDF降解羽毛机制及比较 | 第130-132页 |
| 2.3 两种嗜热菌降解羽毛的机制比较 | 第132-134页 |
| 3. 本章小结 | 第134-136页 |
| 总结与展望 | 第136-138页 |
| 参考文献 | 第138-152页 |
| 致谢 | 第152-153页 |
