| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 英文缩略表 | 第16-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-32页 |
| 1.1 转基因作物发展概述 | 第18页 |
| 1.2 植物启动子研究进展 | 第18-30页 |
| 1.2.1 植物启动子的基本结构 | 第18-19页 |
| 1.2.2 植物启动子的类型 | 第19-23页 |
| 1.2.3 植物启动子分离克隆方法 | 第23-26页 |
| 1.2.4 植物启动子研究分析方法 | 第26-30页 |
| 1.3 玉米损伤诱导基因WIP1简介 | 第30页 |
| 1.4 马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ基因PINⅡ启动子研究概况 | 第30-31页 |
| 1.5 本研究的目的意义 | 第31-32页 |
| 第二章 玉米损伤诱导基因WIP1启动子的功能分析 | 第32-60页 |
| 2.1 实验材料、试剂和仪器 | 第32-33页 |
| 2.1.1 材料 | 第32页 |
| 2.1.2 试剂 | 第32页 |
| 2.1.3 仪器 | 第32页 |
| 2.1.4 引物 | 第32-33页 |
| 2.2 实验方法 | 第33-47页 |
| 2.2.1 试剂配制 | 第33-35页 |
| 2.2.2 玉米基因组DNA提取 | 第35页 |
| 2.2.3 玉米WIP1启动子克隆 | 第35-38页 |
| 2.2.4 玉米WIP1启动子序列的生物信息学分析 | 第38页 |
| 2.2.5 玉米WIP1启动子缺失片段PCR扩增 | 第38-39页 |
| 2.2.6 表达载体构建 | 第39-40页 |
| 2.2.7 烟草转化 | 第40-41页 |
| 2.2.8 拟南芥转化 | 第41-42页 |
| 2.2.9 水稻转化 | 第42页 |
| 2.2.10 转基因烟草、水稻叶片损伤处理 | 第42页 |
| 2.2.11 GUS组织化学染色 | 第42-43页 |
| 2.2.12 GUS酶活性测定 | 第43-44页 |
| 2.2.13 qRT-PCR RNA表达水平分析 | 第44-46页 |
| 2.2.14 5'-RACE转录起始位点分析 | 第46-47页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第47-60页 |
| 2.3.1 wip1737启动子片段扩增、测序 | 第47-48页 |
| 2.3.2 WIP1启动子序列的生物信息学分析 | 第48-49页 |
| 2.3.3 wip1737片段及各缺失片段在转基因烟草和拟南芥中的活性分析 | 第49-52页 |
| 2.3.4 损伤诱导处理转WIP1启动子烟草 | 第52-53页 |
| 2.3.5 WIP1启动子在转基因烟草各器官中活性分析 | 第53-54页 |
| 2.3.6 转WIP1启动子烟草GUS基因转录水平分析 | 第54-55页 |
| 2.3.7 玉米和转基因烟草中WIP1启动子转录起始位点分析 | 第55-56页 |
| 2.3.8 5'-UTR序列中uORF分析 | 第56-58页 |
| 2.3.9 邻近35S启动子的作用分析 | 第58页 |
| 2.3.10 转基因水稻损伤前后的酶活分析 | 第58-60页 |
| 第三章 马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ基因PINⅡ启动子的功能分析 | 第60-75页 |
| 3.1 实验材料、试剂和仪器 | 第60-61页 |
| 3.1.1 材料 | 第60页 |
| 3.1.2 试剂、仪器 | 第60页 |
| 3.1.3 引物 | 第60-61页 |
| 3.2 实验方法 | 第61-63页 |
| 3.2.1 试剂配制 | 第61页 |
| 3.2.2 马铃薯基因组DNA提取 | 第61页 |
| 3.2.3 PINⅡ启动子克隆 | 第61页 |
| 3.2.4 表达载体构建 | 第61-62页 |
| 3.2.5 烟草、拟南芥转化 | 第62页 |
| 3.2.6 转基因烟草叶片损伤处理 | 第62页 |
| 3.2.7 GUS酶活测定 | 第62页 |
| 3.2.8 转基因烟草草甘膦抗性分析 | 第62-63页 |
| 3.2.9 qRT-PCR转录水平分析 | 第63页 |
| 3.2.10 5'-RACE转录起始位点分析 | 第63页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第63-75页 |
| 3.3.1 PINⅡ启动子克隆、表达载体构建 | 第63-65页 |
| 3.3.2 转基因烟草GUS酶活检测 | 第65页 |
| 3.3.3 转基因烟草RNA转录水平分析 | 第65-66页 |
| 3.3.4 PINⅡ5'-UTR功能验证 | 第66-72页 |
| 3.3.5 邻近CaMV 35S启动子影响PINⅡ启动子活性 | 第72-73页 |
| 3.3.6 邻近CaMV 35S启动子影响PINⅡ启动子损伤诱导特性 | 第73页 |
| 3.3.7 转基因植株转录起始位点5'-RACE分析 | 第73-75页 |
| 第四章 讨论 | 第75-80页 |
| 4.1 功能研究模式植物的选择 | 第75页 |
| 4.2 转pWip1231植株GUS基因高效表达的可能原因 | 第75-76页 |
| 4.3 转pWip1737植株GUS基因表达很弱的可能原因 | 第76页 |
| 4.4 PINⅡ5'-UTR具有增强翻译的特征 | 第76-77页 |
| 4.5 PINⅡ5'-UTR增强翻译功能有待进一步验证 | 第77-78页 |
| 4.6 研究PINⅡ过程中各转基因株系GUSmRNA水平不一致的可能原因 | 第78页 |
| 4.7 研究启动子功能过程中值得注意的几点 | 第78-80页 |
| 第五章 结论 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 作者简介 | 第92页 |
