| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-27页 |
| 1.1 植物次生代谢物与植物源农药 | 第12页 |
| 1.2 雷公藤生物活性次生代谢物 | 第12-14页 |
| 1.3 植物离体培养研究进展 | 第14-19页 |
| 1.3.1 植物离体培养的意义 | 第14页 |
| 1.3.2 植物离体培养体系的建立、优化和放大 | 第14-18页 |
| 1.3.3 雷公藤离体培养研究进展 | 第18-19页 |
| 1.4 植物次生代谢物生物合成途径及其调控 | 第19-25页 |
| 1.4.1 植物次生代谢物生物合成途径 | 第19-20页 |
| 1.4.2 植物次生代谢物生物合成途径的调控 | 第20-23页 |
| 1.4.3 雷公藤活性次生代谢物生物合成及其调控研究进展 | 第23-25页 |
| 1.5 问题的提出和论文设计思路 | 第25-27页 |
| 第二章 悬浮细胞团培养体系生产雷公藤内酯醇、吉碱和次碱研究 | 第27-35页 |
| 2.1 材料和方法 | 第27-28页 |
| 2.1.1 悬浮细胞团液体培养体系的建立 | 第27页 |
| 2.1.2 悬浮细胞团的筛分 | 第27-28页 |
| 2.1.3 高效液相色谱法（HPLC）测定雷公藤内酯醇，吉碱和次碱的含量 | 第28页 |
| 2.2 结果与分析 | 第28-32页 |
| 2.2.1 雷公藤愈伤组织和悬浮细胞团的形态 | 第28-30页 |
| 2.2.2 悬浮细胞团的生长 | 第30-31页 |
| 2.2.3 雷公藤内酯醇，吉碱和次碱含量在不同大小细胞团内的累积 | 第31-32页 |
| 2.3 讨论 | 第32-34页 |
| 2.3.1 雷公藤悬浮细胞团的形态特点 | 第32-33页 |
| 2.3.2 雷公藤较大白色细胞团分裂产生较小细胞团 | 第33页 |
| 2.3.3 雷公藤悬浮细胞团的大小和生长阶段对内酯醇、吉碱和次碱的累积具有影响 | 第33-34页 |
| 2.4 小结 | 第34-35页 |
| 第三章 不定根培养体系生产雷公藤内酯醇、吉碱和次碱研究 | 第35-45页 |
| 3.1 材料和方法 | 第35-36页 |
| 3.1.1 化合物 | 第35页 |
| 3.1.2 不定根诱导和培养 | 第35页 |
| 3.1.3 诱导子制备和应用 | 第35页 |
| 3.1.4 XAD-7 制备和应用 | 第35页 |
| 3.1.5 生物反应器的设计和应用 | 第35-36页 |
| 3.1.6 目标化合物提取和 HPLC 分析 | 第36页 |
| 3.2 结果和分析 | 第36-42页 |
| 3.2.1 形态和不同处理影响雷公藤不定根的生长 | 第36-38页 |
| 3.2.2 诱导子影响代谢物在摇瓶培养体系中的合成和释放 | 第38-40页 |
| 3.2.3 诱导和原位吸附结合影响代谢物在摇瓶培养体系中的合成和释放 | 第40-41页 |
| 3.2.4 不定根在改良的柱式冒泡生物反应器内生长和生产良好 | 第41-42页 |
| 3.3 讨论 | 第42-44页 |
| 3.4 小结 | 第44-45页 |
| 第四章 雷公藤内酯醇和倍半萜吡啶生物碱生物合成相关基因的克隆和表达分析 | 第45-60页 |
| 4.1 材料和方法 | 第45-48页 |
| 4.1.1 不定根的诱导、培养和诱导子处理 | 第45页 |
| 4.1.2 SSH 文库的构建 | 第45-46页 |
| 4.1.3 PCR 和反向 Northern 杂交评价差减效率 | 第46页 |
| 4.1.4 测序和序列分析 | 第46页 |
| 4.1.5 cDNA 合成和实时定量 PCR（qRT-PCR） | 第46-48页 |
| 4.2 结果和讨论 | 第48-52页 |
| 4.2.1 差减效率检测和差减 cDNA 文库的特性 | 第48-51页 |
| 4.2.2 qRT-PCR 分析 MeJA 处理后的基因表达 | 第51-52页 |
| 4.3 讨论 | 第52-58页 |
| 4.3.1 SSH 文库内的 11 个基因推测与萜类和生物碱生物合成相关 | 第52-57页 |
| 4.3.2 SSH 文库内的 9 个基因推测为次生代谢物生物合成相关的转录因子 | 第57-58页 |
| 4.3.3 基因表达与 MeJA 处理具有相关性 | 第58页 |
| 4.4 小结 | 第58-60页 |
| 第五章 TwHf714 基因的功能鉴定 | 第60-66页 |
| 5.1 材料和方法 | 第60-62页 |
| 5.1.1 基因克隆和序列分析 | 第60页 |
| 5.1.2 载体构建 | 第60页 |
| 5.1.3 原核表达和蛋白纯化 | 第60-61页 |
| 5.1.4 代谢物提取分离 | 第61页 |
| 5.1.5 酶活测定 | 第61页 |
| 5.1.6 HPLC 和 LC-MS 分析 | 第61-62页 |
| 5.2 结果和分析 | 第62-64页 |
| 5.2.1 TwHf714 序列分析 | 第62页 |
| 5.2.2 TwHf714 蛋白表达与功能鉴定 | 第62-64页 |
| 5.3 讨论 | 第64-65页 |
| 5.4 小结 | 第65-66页 |
| 第六章 RNAi 鉴定 TwHfCYP-1 基因功能 | 第66-72页 |
| 6.1 材料和方法 | 第66-68页 |
| 6.1.1 植物材料，载体和菌株 | 第66-67页 |
| 6.1.2 RNA 干扰重组载体的构建 | 第67页 |
| 6.1.3 重组子转化发根农杆菌 | 第67页 |
| 6.1.4 发状根的诱导和筛选 | 第67-68页 |
| 6.1.5 qRT-PCR 分析 | 第68页 |
| 6.1.6 转基因雷公藤发状根内内酯醇的含量检测 | 第68页 |
| 6.2 结果与分析 | 第68-69页 |
| 6.2.1 发状根培养体系的建立 | 第68-69页 |
| 6.2.2 干扰系中 TwHfCYP-1 的表达和代谢物含量同步下调 | 第69页 |
| 6.3 讨论 | 第69-71页 |
| 6.4 小结 | 第71-72页 |
| 第七章 TwMDR1 和 TwMATE1 基因与次碱转运的关系研究 | 第72-80页 |
| 7.1 材料和方法 | 第72-73页 |
| 7.1.1 不定根和发状根的诱导和培养 | 第72页 |
| 7.1.2 生物信息学分析 | 第72页 |
| 7.1.3 代谢物含量检测与 qRT-PCR 分析 | 第72-73页 |
| 7.2 结果与讨论 | 第73-79页 |
| 7.2.1 TwMDR1 和 TwMATE1 分别与 CjMDR1 和 NtJAT1 高度同源 | 第73-75页 |
| 7.2.2 次碱在雷公藤不定根和发状根液体培养中具有不同分布 | 第75-77页 |
| 7.2.3 受茉莉酸甲酯诱导后次碱转运与两个转运蛋白的表达相关 | 第77-79页 |
| 7.3 小结 | 第79-80页 |
| 第八章 讨论与结论 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 作者简介 | 第95页 |
