| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 1 前言 | 第12-19页 |
| 1.1 Germins和GLPs的结构特点 | 第12-14页 |
| 1.2 GLPs的生化功能 | 第14-15页 |
| 1.2.1 SOD活性 | 第14页 |
| 1.2.2 Ox O活性 | 第14-15页 |
| 1.2.3 丝氨酸蛋白酶抑制剂活性和焦磷酸酶/磷酸二酯酶活性 | 第15页 |
| 1.3 GLPs的生理功能 | 第15-18页 |
| 1.3.1 参与植物的发育 | 第15-16页 |
| 1.3.2 作为受体参与信号转导途径 | 第16页 |
| 1.3.3 充当结构蛋白 | 第16-17页 |
| 1.3.4 参与生物和非生物胁迫应答 | 第17-18页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 2 材料和方法 | 第19-37页 |
| 2.1 材料 | 第19-25页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第19页 |
| 2.1.2 菌株及载体 | 第19-21页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第21页 |
| 2.1.4 试剂（盒）和培养基 | 第21-23页 |
| 2.1.5 引物 | 第23-25页 |
| 2.2 方法 | 第25-37页 |
| 2.2.1 SDS法提取水稻叶片DNA | 第25页 |
| 2.2.2 Trizol法抽提水稻RNA | 第25页 |
| 2.2.3 水稻过表达载体p Ox-Os GLP1和p Ox-Os GLP1-His的构建 | 第25-27页 |
| 2.2.4 农杆菌介导的水稻愈伤组织侵染法 | 第27-28页 |
| 2.2.5 CRISPR/Cas9多靶点载体的构建 | 第28-30页 |
| 2.2.6 农杆菌介导的水稻种子侵染法 | 第30-31页 |
| 2.2.7 p ET30a-Os GLP1原核表达载体的构建 | 第31-32页 |
| 2.2.8 目的蛋白的诱导表达及分析 | 第32-33页 |
| 2.2.9 抗体的制备 | 第33-34页 |
| 2.2.10 亚细胞定位载体p BI121-Os GLP1:GFP的构建 | 第34-35页 |
| 2.2.11 p BI121-Os GLP1:GFP在烟草叶片中的瞬时表达 | 第35页 |
| 2.2.12 H_2O_2和O_2~-的原位检测 | 第35-36页 |
| 2.2.13 SOD、CAT、POD的酶活测定方法 | 第36页 |
| 2.2.14 水稻的生长条件及表型分析 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-61页 |
| 3.1 Os GLP1的氨基酸序列分析 | 第37-39页 |
| 3.2 q RT-PCR分析水稻幼苗不同组织中Os GLP1的表达 | 第39-40页 |
| 3.3 过表达Os GLP1或Os GLP1-His水稻转基因植株的构建 | 第40-42页 |
| 3.3.1 p Ox-Os GLP1载体的构建 | 第40-41页 |
| 3.3.2 p Ox-Os GLP1-His载体的构建 | 第41-42页 |
| 3.3.3 转基因植株的获得 | 第42页 |
| 3.4 CRISPR/Cas9系统介导的水稻Os GLP1突变体的构建 | 第42-46页 |
| 3.5 原核表达Os GLP1及兔多克隆抗体的制备 | 第46-48页 |
| 3.5.1 p ET30a-Os GLP1载体的构建 | 第46-47页 |
| 3.5.2 p ET30a-Os GLP1在大肠杆菌中的表达 | 第47页 |
| 3.5.3 Os GLP1兔多克隆抗体的制备 | 第47-48页 |
| 3.6 Os GLP1的亚细胞定位 | 第48-51页 |
| 3.7 转基因植株的检测 | 第51页 |
| 3.8 过表达Os GLP1和定点突变Os GLP1水稻转基因植株的表型分析 | 第51-54页 |
| 3.9 过表达Os GLP1和定点突变Os GLP1水稻转基因植株叶片中的SOD活性 | 第54-60页 |
| 3.10 Os GLP1突变导致类病斑形成的原因分析 | 第60-61页 |
| 3.10.1 过表达Os GLP1和定点突变Os GLP1对水稻叶片H_2O_2和O_2~-含量的影响 | 第60页 |
| 3.10.2 甲基紫精处理过表达Os GLP1和Os GLP1突变植株叶片 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-66页 |
| 4.1 Os GLP1不具有SOD活性 | 第61-62页 |
| 4.2 Os GLP1的分子量 | 第62-63页 |
| 4.3 Os GLP1可调控水稻的株高和分蘖数 | 第63-64页 |
| 4.4 Os GLP1突变导致水稻叶片出现褐色斑点可能与H_2O_2和O_2~-积累无关 | 第64页 |
| 4.5 Os GLP1可能定位在细胞外基质或细胞壁 | 第64-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
