| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 绪论 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-47页 |
| 1.1 引言 | 第15页 |
| 1.2 重组蛋白在E.COLI和其它细胞中的表达 | 第15-18页 |
| 1.3 蛋白质的变性及体外折叠复性的理论基础 | 第18-20页 |
| 1.3.1 蛋白质的变性 | 第18页 |
| 1.3.2 蛋白质折叠的热力学与动力学控制 | 第18-20页 |
| 1.4 包涵体蛋白的分离、溶解及体外复性研究 | 第20-32页 |
| 1.4.1 包涵体的分离纯化 | 第21页 |
| 1.4.2 包涵体的溶解 | 第21-23页 |
| 1.4.3 影响蛋白质体外折叠复性的因素 | 第23-25页 |
| 1.4.4 蛋白质体外复性方法 | 第25-32页 |
| 1.4.4.1 稀释及透析复性 | 第25页 |
| 1.4.4.2 超滤复性 | 第25-26页 |
| 1.4.4.3 反向微团复性法 | 第26-27页 |
| 1.4.4.4 静水压复性方法 | 第27页 |
| 1.4.4.5 分子伴侣及折叠酶协助复性 | 第27-28页 |
| 1.4.4.6 层析折叠复性 | 第28-29页 |
| 1.4.4.7 折叠促进剂协助复性 | 第29-32页 |
| 1.5 温敏型PNIPA凝胶及相关性质 | 第32-34页 |
| 1.5.1 PNIPA温敏型水凝胶的基本性质 | 第33页 |
| 1.5.2 PNIPA凝胶的温敏性 | 第33-34页 |
| 1.5.3 PNIPA水凝胶的常用制备方法 | 第34页 |
| 1.6 PNIPA凝胶用于蛋白质复性的提出及设想 | 第34-37页 |
| 1.6.1 本实验室在蛋白质复性方面的相关研究 | 第34-35页 |
| 1.6.2 设想的提出 | 第35页 |
| 1.6.3 研究思路 | 第35-37页 |
| 参考文献 | 第37-47页 |
| 第二章 温敏型块状PNIPA凝胶的制备及其在溶菌酶复性中的应用 | 第47-63页 |
| 2.1 引言 | 第47-49页 |
| 2.2 实验材料 | 第49-50页 |
| 2.3 实验方法 | 第50-53页 |
| 2.3.1 溶菌酶活性的测定-F.I.P.法 | 第50页 |
| 2.3.2 蛋白质含量的测定-考马斯亮蓝法 | 第50-52页 |
| 2.3.3 块状温敏型凝胶制备 | 第52页 |
| 2.3.4 温敏性能及溶胀速率、缩水速率测试 | 第52页 |
| 2.3.5 溶菌酶的变复性 | 第52-53页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第53-59页 |
| 2.4.1 PNIPA块状凝胶的温敏性能 | 第53-54页 |
| 2.4.2 PNIPA块状凝胶的溶胀性能 | 第54-55页 |
| 2.4.3 PNIPA块状凝胶在溶菌酶复性中的应用 | 第55-58页 |
| 2.4.4 凝胶协助变性蛋白重折叠机理的初步探讨 | 第58-59页 |
| 2.5 本章小结 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-63页 |
| 第三章 粒状PNIPA凝胶的制备及其在溶菌酶复性中的应用 | 第63-87页 |
| 3.1 引言 | 第63-64页 |
| 3.2 实验材料及方法 | 第64-65页 |
| 3.2.1 实验材料及仪器 | 第64页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第64-65页 |
| 3.2.2.1 粒状PNIPA凝胶的制备 | 第64页 |
| 3.2.2.2 粒状PNIPA凝胶的性能研究 | 第64-65页 |
| 3.2.2.3 粒状PNIPA凝胶形态特性的表征 | 第65页 |
| 3.3 实验结果及讨论 | 第65-83页 |
| 3.3.1 反相悬浮法制备PNIPA粒状凝胶 | 第65-66页 |
| 3.3.2 粒状PNIPA凝胶的温敏性及溶胀特性 | 第66-68页 |
| 3.3.3 粒状PNIPA凝胶的外观及结构表征 | 第68-71页 |
| 3.3.4 粒状PNIPA凝胶用于溶菌酶复性的研究 | 第71-76页 |
| 3.3.4.1 温度、摇床转速对溶菌酶复性的影响 | 第71-73页 |
| 3.3.4.2 粒状PNIPA凝胶协助溶菌酶复性 | 第73-76页 |
| 3.3.5 凝胶协助溶菌酶复性的动力学模型 | 第76-82页 |
| 3.3.5.1 溶菌酶复性动力学模型的提出 | 第76-78页 |
| 3.3.5.2 溶菌酶复性动力学模型的求解 | 第78页 |
| 3.3.5.3 实验结果与动力学模型分析 | 第78-82页 |
| 3.3.6 溶菌酶复性方法的比较 | 第82-83页 |
| 3.4 小结 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-87页 |
| 第四章 重组牛凝血酶原-2在大肠杆菌中的优化表达 | 第87-103页 |
| 4.1 前言 | 第87-90页 |
| 4.2 实验材料及方法 | 第90-91页 |
| 4.2.1 实验材料及仪器 | 第90页 |
| 4.2.1.1 实验材料 | 第90页 |
| 4.2.1.2 实验仪器 | 第90页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第90-91页 |
| 4.2.2.1 质粒转化 | 第90页 |
| 4.2.2.2 包涵体的表达 | 第90页 |
| 4.2.2.3 电泳及凝胶图象分析 | 第90-91页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第91-100页 |
| 4.3.1 含凝血酶原-2质粒的大肠杆菌的生长及目标蛋白表达 | 第91-92页 |
| 4.3.2 发酵培养条件的优化 | 第92-97页 |
| 4.3.2.1 初始培养基的确定 | 第92-93页 |
| 4.3.3.2 添加不同碳源的影响 | 第93页 |
| 4.3.3.3 不同氮源比例的影响 | 第93-94页 |
| 4.3.3.4 添加Mg~(2+)和M9的影响 | 第94-95页 |
| 4.3.3.5 诱导起始时间的影响 | 第95-96页 |
| 4.3.3.6 不同诱导剂量的影响 | 第96页 |
| 4.3.3.7 接种量、培养温度及转速的影响 | 第96-97页 |
| 4.3.3 凝血酶原-2包涵体的洗涤优化 | 第97-100页 |
| 4.4 结论 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-103页 |
| 第五章 重组牛凝血酶原-2包涵体复性研究 | 第103-123页 |
| 5.1 引言 | 第103页 |
| 5.2 实验材料及方法 | 第103-105页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第103-104页 |
| 5.2.2 凝血酶原-2包涵体的制备、洗涤和溶解 | 第104页 |
| 5.2.3 稀释复性 | 第104页 |
| 5.2.4 凝血酶原激活剂蛇毒的预处理 | 第104-105页 |
| 5.2.5 凝血酶原-2的激活 | 第105页 |
| 5.2.6 凝血酶活力测定 | 第105页 |
| 5.2.7 凝血酶的纯化及荧光光谱表征 | 第105页 |
| 5.3 结果和讨论 | 第105-119页 |
| 5.3.1 凝血酶原-2的稀释复性研究 | 第105-112页 |
| 5.3.1.1 尿素浓度对凝血酶原-2复性的影响 | 第105-106页 |
| 5.3.1.2 氧化还原环境对凝血酶原-2复性的影响 | 第106-107页 |
| 5.3.1.3 凝血酶原-2激活时间对凝血酶活性的影响 | 第107-108页 |
| 5.3.1.4 一次回归正交试验 | 第108-111页 |
| 5.3.1.5 快速登高试验 | 第111-112页 |
| 5.3.2 PNIPA凝胶协助凝血酶原-2包涵体复性的研究 | 第112-114页 |
| 5.3.3 凝血酶原-2复性动力学模型的初步探讨 | 第114-116页 |
| 5.3.4 凝血酶的肝素柱亲和纯化 | 第116-118页 |
| 5.3.5 凝血酶的荧光光谱表征 | 第118-119页 |
| 5.4 本章小结 | 第119-121页 |
| 参考文献 | 第121-123页 |
| 第六章 结论与建议 | 第123-127页 |
| 6.1 结论 | 第123-125页 |
| 6.2 建议 | 第125-127页 |
| 符号说明 | 第127-129页 |
| 致谢 | 第129-130页 |
| 个人简历 | 第130-131页 |
| 攻读博士学位期间发表论文情况 | 第131页 |
