| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 缩略词表 | 第11-15页 |
| 1 前言 | 第15-28页 |
| 1.1 概述 | 第15-17页 |
| 1.1.1 石栗的用途与发展潜力 | 第16页 |
| 1.1.2 植物果实发育及内含物的变化特点 | 第16页 |
| 1.1.3 木本油料植物脂肪酸的合成 | 第16-17页 |
| 1.2 ACCase的结构和功能 | 第17-19页 |
| 1.3 ACCase调控机制 | 第19-20页 |
| 1.4 植物体ACCase研究进展 | 第20-22页 |
| 1.5 乙酰辅酶A在基因工程中的应用 | 第22页 |
| 1.5.1 植物脂肪酸合成中的应用 | 第22页 |
| 1.6 实时荧光定量PCR技术及应用 | 第22-27页 |
| 1.6.1 实时荧光定量PCR技术原理及特点 | 第22-23页 |
| 1.6.2 实时荧光定量PCR主要类型 | 第23-24页 |
| 1.6.2.1 SYBR Green荧光染料 | 第23-24页 |
| 1.6.2.2 Taqman探针 | 第24页 |
| 1.6.2.3 分子信标 | 第24页 |
| 1.6.3 实时荧光定量PCR定量方法和影响因素 | 第24-26页 |
| 1.6.4 实时荧光定量PCR研究进展 | 第26-27页 |
| 1.7 内参基因18S rRNA的选择 | 第27页 |
| 1.8 论文研究的主要目的和意义 | 第27-28页 |
| 1.9 研究内容 | 第28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-42页 |
| 2.1 石栗果实发育特性及其内含物变化规律研究 | 第28-31页 |
| 2.1.1 试验材料及处理方法 | 第28页 |
| 2.1.2 果实发育的形态变化测定方法 | 第28-31页 |
| 2.1.2.1 可溶性蛋白质含量的测定 | 第29-30页 |
| 2.1.2.2 可溶性糖含量的测定 | 第30-31页 |
| 2.1.2.3 石栗种子可溶性淀粉的测定 | 第31页 |
| 2.2 石栗18S rRNA内参基因片段克隆 | 第31-39页 |
| 2.2.1 材料和方法 | 第31-39页 |
| 2.2.1.1 石栗果实总RNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.2.1.2 RNA质量检测 | 第33-34页 |
| 2.2.1.3 果实18S rRNA基因片段RT-PCR | 第34-35页 |
| 2.2.1.4 目的基因的片段纯化回收 | 第35页 |
| 2.2.1.5 PCR产物纯化 | 第35-36页 |
| 2.2.1.6 感受态细胞的制备 | 第36页 |
| 2.2.1.7 目的片段与PMD~(?)18-T载体连接 | 第36-37页 |
| 2.2.1.8 重组子转化与筛选 | 第37页 |
| 2.2.1.9 质粒DNA的提取 | 第37-38页 |
| 2.2.1.10 PCR重组子的鉴定 | 第38页 |
| 2.2.1.11 PCR产物测序 | 第38-39页 |
| 2.3 石栗ACCase编码基因表达模式分析及作用研究 | 第39-42页 |
| 2.3.1 材料与方法 | 第39-42页 |
| 2.3.1.1 试验材料 | 第39页 |
| 2.3.1.2 仪器和试剂 | 第39页 |
| 2.3.1.3 实验技术路线 | 第39-40页 |
| 2.3.1.4 方法和步骤 | 第40页 |
| 2.3.1.5 目的基因片段的引物设计和克隆 | 第40-41页 |
| 2.3.1.6 RNA的提取和cDNA第一链的合成 | 第41页 |
| 2.3.1.7 引物的设计及合成及反应条件优化 | 第41页 |
| 2.3.1.8 内参基因和目的基因标准曲线的制作 | 第41-42页 |
| 2.3.1.9 荧光定量分析 | 第42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-57页 |
| 3.1 石栗果实生长及其内含物的变化分析 | 第42-47页 |
| 3.1.1 石栗果实纵、横、侧径生长变化 | 第42-43页 |
| 3.1.2 种子可溶性蛋白含量变化 | 第43-44页 |
| 3.1.3 种子可溶性糖含量变化 | 第44-45页 |
| 3.1.4 种子可溶性淀粉含量变化 | 第45页 |
| 3.1.5 种子脂肪含量变化 | 第45-46页 |
| 3.1.6 种子含水量变化规律 | 第46-47页 |
| 3.2 18S rRNA内参基因片段分析 | 第47-48页 |
| 3.2.1 18S rRNA基因RT-PCR产物电泳检测 | 第47页 |
| 3.2.2 18S rRNA基因菌落PCR重组子鉴定 | 第47页 |
| 3.2.3 测序结果及序列分析 | 第47-48页 |
| 3.3 ACCase编码基因结果与分析 | 第48-57页 |
| 3.3.1 石栗果实总RNA纯度和完整性分析 | 第48-49页 |
| 3.3.2 内参基因及目的基因的克隆 | 第49-50页 |
| 3.3.3 标准曲线和溶解曲线的绘制 | 第50-55页 |
| 3.3.3.1 石栗18S rRNA内参基因的标准曲线和溶解曲线 | 第50页 |
| 3.3.3.2 石栗果实ACCB基因的标准曲线和溶解曲线 | 第50页 |
| 3.3.3.3 石栗果实ACCC基因的标准曲线和溶解曲线 | 第50-51页 |
| 3.3.3.4 石栗果实ACCD基因的标准曲线和溶解曲线 | 第51-55页 |
| 3.3.4 ACCase编码基因在果实中的表达分析 | 第55-57页 |
| 3.3.4.1 ACCB(编码BCCP亚基)在果实中的表达分析 | 第55页 |
| 3.3.4.2 ACCC(编码BC亚基)在果实中的表达分析 | 第55-56页 |
| 3.3.4.3 ACCD(编码p-CT亚基)在果实中的表达分析 | 第56-57页 |
| 4 结论与讨论 | 第57-62页 |
| 4.1 石栗果实发育特性及其内含物的研究 | 第57-58页 |
| 4.2 石栗果实ACCase编码基因表达分析 | 第58-60页 |
| 4.3 石栗果实油脂累积与ACCase编码基因之间的联系 | 第60页 |
| 4.4 本研究创新点 | 第60-61页 |
| 4.5 存在的问题 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-72页 |
| 攻读硕士期间发表论文情况 | 第72页 |
