| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-13页 |
| 文献综述 | 第13-23页 |
| 第一章 胚胎干细胞分化为生殖细胞的研究进展 | 第13-23页 |
| ·胚胎干细胞 | 第13-14页 |
| ·雌性生殖细胞 | 第14-17页 |
| ·雌性生殖细胞的起源和发生 | 第14-15页 |
| ·雌性生殖细胞发育分化的标记基因 | 第15-17页 |
| ·胚胎干细胞向生殖细胞诱导分化方法 | 第17-20页 |
| ·胚胎干细胞的体外分化程序 | 第17-18页 |
| ·单层细胞诱导分化 | 第17页 |
| ·细胞聚集体方式诱导分化 | 第17-18页 |
| ·聚集培养与单层培养结合 | 第18页 |
| ·胚胎干细胞体外向生殖细胞分化的诱导方法 | 第18-19页 |
| ·细胞因子诱导法 | 第18页 |
| ·转基因诱导分化法 | 第18页 |
| ·选择性标记基因筛选目的细胞法 | 第18-19页 |
| ·药物及化学试剂诱导法 | 第19页 |
| ·细胞共培养或条件培养基诱导法 | 第19页 |
| ·胚胎干细胞体内移植向生殖细胞分化 | 第19-20页 |
| ·干细胞向雌性生殖细胞诱导分化的研究进展 | 第20-22页 |
| ·胚胎干细胞向生殖细胞分化的研究 | 第20-21页 |
| ·成体干细胞向生殖细胞分化的研究 | 第21-22页 |
| ·皮肤干细胞分化为卵母细胞 | 第21页 |
| ·生殖干细胞分化为卵母细胞 | 第21页 |
| ·其它成体干细胞分化为卵母细胞 | 第21-22页 |
| ·存在的问题及展望 | 第22-23页 |
| 试验研究 | 第23-58页 |
| 第二章 pFigla-EGFP-1 转染小鼠胚胎干细胞株的筛选纯化 | 第23-38页 |
| ·材料与方法 | 第23-30页 |
| ·材料 | 第23-24页 |
| ·试验动物及细胞 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23-24页 |
| ·主要器材 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-30页 |
| ·溶液配制 | 第24-25页 |
| ·Figla 基因启动子序列的克隆及报告基因载体构建 | 第25-26页 |
| ·小鼠卵巢细胞的分离培养 | 第26-27页 |
| ·小鼠胎儿成纤维细胞的分离与培养 | 第27页 |
| ·Figla 启动子特异性启动的验证 | 第27-28页 |
| ·pFigla-EGFP-1 转染小鼠胚胎干细胞及细胞株的筛选纯化 | 第28页 |
| ·携带 pFigla-EGFP-1 的 mESCs 特性检测 | 第28-30页 |
| ·结果 | 第30-37页 |
| ·Figla 生殖细胞特异表达的检测 | 第30-31页 |
| ·Figla 启动子区的确定 | 第31-32页 |
| ·pFigla-EGFP-1 报告基因载体构建 | 第32页 |
| ·Figla 启动子特异性启动的验证 | 第32-33页 |
| ·pFigla-EGFP-1 转染小鼠胚胎干细胞及细胞株的筛选纯化 | 第33-34页 |
| ·携带 pFigla-EGFP-1 的 mESCs 特性检测 | 第34-37页 |
| ·多能性检测 | 第34页 |
| ·多向分化潜能检测 | 第34-35页 |
| ·致瘤性检测 | 第35-37页 |
| ·讨论 | 第37页 |
| ·小结 | 第37-38页 |
| 第三章 不同方法诱导 mESCs 向雌性生殖细胞分化 | 第38-49页 |
| ·材料和方法 | 第38-39页 |
| ·材料 | 第38页 |
| ·试验细胞材料 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-39页 |
| ·主要溶液配制 | 第38-39页 |
| ·类胚体的诱导 | 第39页 |
| ·流式细胞仪筛选 | 第39页 |
| ·雌二醇激素含量测定 | 第39页 |
| ·Q-RT-PCR 检测 | 第39页 |
| ·携带 pFigla-EGFP 的 mESCs 的体内移植 | 第39页 |
| ·结果 | 第39-47页 |
| ·卵泡液、RA、FSH 和与卵巢细胞共培养对 mESCs 向雌性生殖细胞分化的影响 | 第39-42页 |
| ·诱导后 Figla 启动子控制下的 GFP 表达 | 第42-44页 |
| ·诱导后细胞的雌二醇激素分泌 | 第44-45页 |
| ·携带 pFigla-EGFP 的 mESCs 的体内分化 | 第45-47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 第四章 Figla 超表达对 mESCs 向雌性生殖细胞分化作用的研究 | 第49-58页 |
| ·材料与方法 | 第49-50页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·试验细胞材料 | 第49页 |
| ·主要试剂 | 第49页 |
| ·方法 | 第49-50页 |
| ·pFigla-DsRed-N1 表达载体的构建 | 第49-50页 |
| ·重组质粒的转染及观察 | 第50页 |
| ·Western-blotting 检测 | 第50页 |
| ·结果 | 第50-55页 |
| ·pDsRed1-N1-Figla 载体的构建及鉴定 | 第50-51页 |
| ·转染细胞的观察 | 第51-53页 |
| ·转染细胞的免疫荧光检测 | 第53-54页 |
| ·转染细胞的 RT-PCR 和 Q-RT-PCR 检测 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| ·小结 | 第57-58页 |
| 结论 | 第58页 |
| 本研究的创新点与进一步研究的课题 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 作者简介 | 第69页 |
