| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 缩略词表 | 第10-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-21页 |
| 第二章 USCs的分离及其生物学特征 | 第21-43页 |
| 2.1 前言 | 第21-22页 |
| 2.2 材料与方法 | 第22-33页 |
| 2.2.1 主要仪器 | 第22页 |
| 2.2.2 主要耗材及试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.3 尿液来源 | 第23页 |
| 2.2.4 主要溶液配制 | 第23-24页 |
| 2.2.5 USCs的分离培养 | 第24-25页 |
| 2.2.6 传代培养 | 第25页 |
| 2.2.7 细胞冻存及复苏 | 第25页 |
| 2.2.8 USCs核型分析 | 第25页 |
| 2.2.9 ASCs的分离培养 | 第25-26页 |
| 2.2.10 细胞增殖实验 | 第26页 |
| 2.2.11 流式细胞仪检测USCs和ASCs表面标志物 | 第26页 |
| 2.2.12 成骨诱导分化及鉴定 | 第26-28页 |
| 2.2.13 成软骨诱导分化及鉴定 | 第28-30页 |
| 2.2.14 成脂肪诱导分化及鉴定 | 第30-31页 |
| 2.2.15 RT-PCR检查成骨和成脂基因表达 | 第31-33页 |
| 2.2.16 统计学分析 | 第33页 |
| 2.3 结果 | 第33-40页 |
| 2.3.1 USCs培养扩增 | 第33-34页 |
| 2.3.2 ASCs分离培养结果 | 第34-35页 |
| 2.3.3 USCs和ASCs增殖速度 | 第35页 |
| 2.3.4 USCs和ASCs表面标志物 | 第35-36页 |
| 2.3.5 USCs和ASCs成骨分化 | 第36-38页 |
| 2.3.6 USCs和ASCs成软骨分化 | 第38-39页 |
| 2.3.7 USCs和ASCs成脂分化 | 第39-40页 |
| 2.4 讨论 | 第40-41页 |
| 2.5 小结 | 第41-43页 |
| 第三章 BMP2基因转染对USCs成骨分化的影响 | 第43-65页 |
| 3.1 前言 | 第43-44页 |
| 3.2 材料和方法 | 第44-56页 |
| 3.2.1 主要仪器 | 第44页 |
| 3.2.2 主要耗材及试剂 | 第44-45页 |
| 3.2.3 尿液来源 | 第45页 |
| 3.2.4 细胞来源 | 第45-46页 |
| 3.2.5 质粒 | 第46页 |
| 3.2.6 主要溶液配制 | 第46页 |
| 3.2.7 实验动物 | 第46页 |
| 3.2.8 手术器械 | 第46页 |
| 3.2.9 USCs的分离培养 | 第46-47页 |
| 3.2.10 BMP2慢病毒载体的构建和转染 | 第47-49页 |
| 3.2.11 细胞活性检测 | 第49页 |
| 3.2.12 RT-PCR分析相关基因表达 | 第49-51页 |
| 3.2.13 ELISA检测BMP2表达 | 第51-52页 |
| 3.2.14 ALP活性 | 第52页 |
| 3.2.15 茜素红染色和von Kossa染色 | 第52-53页 |
| 3.2.16 免疫荧光检测Runx2和OCN | 第53页 |
| 3.2.17 USCs接种至 β-TCP支架 | 第53-54页 |
| 3.2.18 裸鼠体内异位成骨实验 | 第54页 |
| 3.2.19 组织学染色 | 第54-56页 |
| 3.2.20 统计学分析 | 第56页 |
| 3.3 结果 | 第56-62页 |
| 3.3.1 不同MOI值转染效率 | 第56页 |
| 3.3.2 不同MOI值对细胞增殖影响 | 第56-57页 |
| 3.3.3 BMP2过表达促进BMP2基因表达和蛋白分泌 | 第57-59页 |
| 3.3.4 BMP2过表达增强ALP活性和矿盐沉积 | 第59页 |
| 3.3.5 BMP2过表达促进Runx2和OCN蛋白的表达 | 第59-60页 |
| 3.3.6 BMP2过表达促进裸鼠异位成骨 | 第60-62页 |
| 3.4 讨论 | 第62-64页 |
| 3.5 小结 | 第64-65页 |
| 第四章 USCs在 β-TCP支架上的生物学行为 | 第65-80页 |
| 4.1 前言 | 第65-66页 |
| 4.2 材料和方法 | 第66-72页 |
| 4.2.1 主要仪器 | 第66页 |
| 4.2.2 主要耗材及试剂 | 第66-67页 |
| 4.2.3 尿液来源 | 第67页 |
| 4.2.4 主要溶液配制 | 第67-68页 |
| 4.2.5 USCs的分离培养 | 第68页 |
| 4.2.6 USCs传代培养 | 第68页 |
| 4.2.7 β-TCP支架消毒 | 第68页 |
| 4.2.8 USCs接种至 β-TCP支架 | 第68-69页 |
| 4.2.9 扫描电镜检测 | 第69页 |
| 4.2.10 活死细胞染色 | 第69页 |
| 4.2.11 CCK-8 细胞增殖实验 | 第69页 |
| 4.2.12 ALP活性检测 | 第69-70页 |
| 4.2.13 成骨相关基因检测 | 第70-72页 |
| 4.2.14 统计学分析 | 第72页 |
| 4.3 结果 | 第72-77页 |
| 4.3.1 扫描电镜结果 | 第72-73页 |
| 4.3.2 活死细胞染色结果 | 第73-74页 |
| 4.3.3 细胞增殖实验结果 | 第74页 |
| 4.3.4 ALP活性结果 | 第74-75页 |
| 4.3.5 RT-PCR分析成骨相关基因的表达 | 第75-77页 |
| 4.4 讨论 | 第77-78页 |
| 4.5 小结 | 第78-80页 |
| 第五章 USCs复合 β-TCP修复大段骨缺损的实验研究 | 第80-96页 |
| 5.1 前言 | 第80-81页 |
| 5.2 材料和方法 | 第81-89页 |
| 5.2.1 主要仪器 | 第81页 |
| 5.2.2 主要耗材及试剂 | 第81-82页 |
| 5.2.3 尿液来源 | 第82页 |
| 5.2.4 主要溶液配制 | 第82-83页 |
| 5.2.5 实验动物 | 第83页 |
| 5.2.6 手术器械 | 第83页 |
| 5.2.7 USCs的分离培养 | 第83-84页 |
| 5.2.8 USCs传代培养 | 第84页 |
| 5.2.9 β-TCP支架消毒 | 第84页 |
| 5.2.10 USCs接种至 β-TCP支架 | 第84页 |
| 5.2.11 体内实验 | 第84-88页 |
| 5.2.12 统计学分析 | 第88-89页 |
| 5.3 实验结果 | 第89-94页 |
| 5.3.1 细胞形态 | 第89页 |
| 5.3.2 动物实验 | 第89-90页 |
| 5.3.3 X线结果 | 第90页 |
| 5.3.4 Micro-CT结果 | 第90-91页 |
| 5.3.5 组织学染色结果 | 第91-92页 |
| 5.3.6 亲骨荧光素及骨矿化速度 | 第92-93页 |
| 5.3.7 免疫组化染色示踪移植细胞 | 第93-94页 |
| 5.4 讨论 | 第94-95页 |
| 5.5 小结 | 第95-96页 |
| 第六章 结论 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-106页 |
| 致谢 | 第106-108页 |
| 博士在读期间发表论文和科研成果 | 第108页 |
