| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一部分 前言 | 第12-19页 |
| 1 系统性红斑狼疮与干扰素α | 第12-14页 |
| 2 靶向IFNα通路的治疗性抗体研究现状 | 第14-15页 |
| 3 课题研究基础 | 第15-18页 |
| 4 课题研究的内容与意义 | 第18-19页 |
| 第二部分 抗原制备 | 第19-27页 |
| 1 实验材料 | 第19-20页 |
| 1.1 试剂和耗材 | 第19-20页 |
| 1.2 细胞 | 第20页 |
| 1.3 培养基和缓冲液 | 第20页 |
| 1.4 仪器设备 | 第20页 |
| 2 实验方法 | 第20-24页 |
| 2.1 抗原表达载体的构建 | 第20-23页 |
| 2.2 IFNα-4a-His抗原的表达和纯化 | 第23-24页 |
| 3 结果 | 第24-27页 |
| 3.1 IFNα-4a-His的表达载体构建 | 第24-25页 |
| 3.2 IFNα-4a-His的生物学活性检测-细胞毒性试验 | 第25-27页 |
| 第三部分 基于分子模拟设计的AIA22突变体抗体分子的评价 | 第27-47页 |
| 1 实验材料 | 第27-29页 |
| 1.1 材料耗材 | 第27-29页 |
| 1.2 仪器设备 | 第29页 |
| 2 实验方法 | 第29-37页 |
| 2.1 丙氨酸扫描确定AIA22和IFNα作用的主要位点 | 第29-33页 |
| 2.2 基于分子模拟方法设计AIA22突变体及突变体抗体鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3 中和活性评价 | 第34-37页 |
| 2.4 优选突变AIAmut对IFNα中和活性和亲和力测定 | 第37页 |
| 3 结果 | 第37-46页 |
| 3.1 丙氨酸扫描结果 | 第37-39页 |
| 3.2 丙氨酸扫描样品鉴定 | 第39-42页 |
| 3.3 突变位点叠加和AIA22突变体抗体分子的筛选 | 第42页 |
| 3.4 AIA22突变体抗体分子的中和活性评价 | 第42-43页 |
| 3.5 AIAmut的中和活性结果 | 第43-44页 |
| 3.6 AIAmut和IFNα-1b、2b和4a的亲和力测定结果 | 第44-46页 |
| 4 小结 | 第46-47页 |
| 第四部分 基于晶体结构设计的AIAmut突变体抗体分子的初步鉴定 | 第47-59页 |
| 1 实验材料 | 第47-48页 |
| 1.1 试剂和耗材 | 第47页 |
| 1.2 抗体抗原和细胞 | 第47-48页 |
| 1.3 培养基和缓冲液 | 第48页 |
| 1.4 仪器设备 | 第48页 |
| 2 实验方法 | 第48-53页 |
| 2.1 计算机辅助设计 | 第48-49页 |
| 2.2 突变体构建和表达 | 第49-51页 |
| 2.3 通过forteBio Octet QK系统对突变体亲和力筛选 | 第51-53页 |
| 3 结果 | 第53-57页 |
| 3.1 质粒提取结果 | 第53-54页 |
| 3.2 部分样品表达结果 | 第54页 |
| 3.3 突变体鉴定 | 第54-57页 |
| 4 小结 | 第57-59页 |
| 第五部分 AIAmut突变体抗体分子的深入评价 | 第59-71页 |
| 1 实验材料 | 第59-60页 |
| 1.1 试剂和耗材 | 第59页 |
| 1.2 细胞、培养基和缓冲液 | 第59页 |
| 1.3 抗体和抗原 | 第59-60页 |
| 1.4 仪器 | 第60页 |
| 2 实验方法 | 第60-63页 |
| 2.1 突变体表达量检测和稳定性评价 | 第60-62页 |
| 2.2 突变体抗体中和活性的鉴定 | 第62-63页 |
| 2.3 W2S1A7和W2A7亲和力测定 | 第63页 |
| 3 结果 | 第63-70页 |
| 3.1 抗体的表达水平 | 第63-64页 |
| 3.2 抗体稳定性 | 第64-65页 |
| 3.3 各抗体对IFNα-1b和IFNα-2b的中和活性 | 第65-66页 |
| 3.4 W2S1A7、W2A7和W2A10对IFNα各亚型的中和活性 | 第66-69页 |
| 3.5 W2S1A7和W2A7亲和力测定 | 第69-70页 |
| 4 小结 | 第70-71页 |
| 第六部分 W2S1A7和W2A7初步药代评价 | 第71-74页 |
| 1 实验材料 | 第71页 |
| 2 实验方法 | 第71-73页 |
| 2.1 小鼠给药和取血 | 第71-72页 |
| 2.2 血药浓度检测 | 第72-73页 |
| 3 结果 | 第73-74页 |
| 第七部分 总结和讨论 | 第74-76页 |
| 1 总结 | 第74页 |
| 2 讨论 | 第74-76页 |
| 英文缩略词符号说明 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 附录 | 第80-83页 |
