| 致谢 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 绪论 | 第16-28页 |
| 1.1 糖基转移酶 | 第16-19页 |
| 1.1.1 糖基转移酶简介 | 第16页 |
| 1.1.2 糖基转移酶来源 | 第16-17页 |
| 1.1.3 糖基转移酶基因发现与鉴定 | 第17页 |
| 1.1.4 糖基转移酶的基因工程研究 | 第17-19页 |
| 1.1.5 糖基转移酶的筛选方法 | 第19页 |
| 1.1.6 糖基转移酶应用 | 第19页 |
| 1.2 右旋糖酐蔗糖酶 | 第19-23页 |
| 1.2.1 右旋糖酐蔗糖酶结构功能 | 第19-21页 |
| 1.2.2 右旋糖酐蔗糖酶的催化机制 | 第21页 |
| 1.2.3 右旋糖酐蔗糖酶的催化分类 | 第21-22页 |
| 1.2.4 右旋糖酐蔗糖酶分子截短改造 | 第22-23页 |
| 1.3 低聚糖 | 第23-24页 |
| 1.3.1 糖苷键 | 第23页 |
| 1.3.2 低聚糖分类和主要功能 | 第23-24页 |
| 1.3.3 低聚糖糖基化修饰 | 第24页 |
| 1.4 维生素C的糖基化修饰 | 第24-25页 |
| 1.5 其他化合物的糖基化 | 第25页 |
| 1.6 本课题的研究内容、创新点及意义 | 第25-28页 |
| 1.6.1 选题依据、意义及创新点 | 第25-26页 |
| 1.6.2 研究内容及思路 | 第26-28页 |
| 第二章 基于转糖基功能的右旋糖酐蔗糖酶分子改造 | 第28-51页 |
| 2.1 引言 | 第28页 |
| 2.2 实验材料 | 第28-32页 |
| 2.2.1 材料 | 第28-30页 |
| 2.2.2 主要培养基 | 第30-31页 |
| 2.2.3 常用溶液配制 | 第31-32页 |
| 2.3 实验方法 | 第32-38页 |
| 2.3.1 右旋糖酐蔗糖酶分子改造思路 | 第32-33页 |
| 2.3.2 重组质粒提取 | 第33-34页 |
| 2.3.3 引物的设计与PCR实验 | 第34-35页 |
| 2.3.4 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第35页 |
| 2.3.5 截断基因与载体连接 | 第35-36页 |
| 2.3.6 感受态细胞制备与质粒转化 | 第36-37页 |
| 2.3.7 截短突变酶DSR-S1-ΔA的表达 | 第37页 |
| 2.3.8 截短突变酶DSR-S1-ΔA酶活测定 | 第37页 |
| 2.3.9 外标法测定单糖的含量 | 第37页 |
| 2.3.10 酶学性质研究 | 第37-38页 |
| 2.3.11 原始酶DSR-dex-YG和突变酶DSR-S1-ΔA转糖基作用生成低聚糖和多糖的特性 | 第38页 |
| 2.4 实验结果 | 第38-50页 |
| 2.4.1 截短重组酶菌株质粒PCR结果 | 第38-39页 |
| 2.4.2 测序结果与截断酶的分子模型 | 第39-40页 |
| 2.4.3 酶学性质研究 | 第40-50页 |
| 2.5 讨论与小结 | 第50-51页 |
| 第三章 DSR-S1-ΔA截短突变酶表达条件的优化 | 第51-62页 |
| 3.1 引言 | 第51页 |
| 3.2 实验部分 | 第51-60页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第51-53页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第53-54页 |
| 3.2.3 实验结果 | 第54-60页 |
| 3.3 讨论 | 第60-62页 |
| 第四章 DSR-S1-ΔA截短突变酶转糖基作用研究 | 第62-73页 |
| 4.1 引言 | 第62页 |
| 4.2 实验材料 | 第62-63页 |
| 4.2.1 右旋糖酐蔗糖酶的截短突变酶准备步骤 | 第62页 |
| 4.2.2 主要材料与试剂 | 第62-63页 |
| 4.2.3 实验仪器与设备 | 第63页 |
| 4.3 实验方法 | 第63-66页 |
| 4.3.1 DSR-S1-ΔA截短突变酶催化转糖基体系研究 | 第63-64页 |
| 4.3.2 不同低聚糖受体的转糖基反应 | 第64-66页 |
| 4.4 实验结果 | 第66-72页 |
| 4.4.1 DSR-S1-ΔA截短突变酶催化转糖基体系研究 | 第66-69页 |
| 4.4.2 不同低聚糖受体转糖基反应 | 第69-72页 |
| 4.5 讨论 | 第72-73页 |
| 第五章 DSR-S1-ΔA酶催化VC转糖基反应的初步探索 | 第73-77页 |
| 5.1 引言 | 第73页 |
| 5.2 实验材料 | 第73-74页 |
| 5.2.1 右旋糖酐蔗糖酶的准备步骤 | 第73页 |
| 5.2.2 主要材料与试剂 | 第73页 |
| 5.2.3 实验仪器与设备 | 第73-74页 |
| 5.3 实验方法 | 第74页 |
| 5.4 实验结果 | 第74-76页 |
| 5.4.1 液相检测VC转糖基反应结果 | 第74-75页 |
| 5.4.2 质谱检测VC转糖基反应结果 | 第75-76页 |
| 5.5 讨论 | 第76-77页 |
| 第六章 结论与展望 | 第77-79页 |
| 6.1 结论 | 第77-78页 |
| 6.2 展望 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-87页 |
| 攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况 | 第87-88页 |
