| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-24页 |
| 1.1 环氧化物的应用 | 第13-14页 |
| 1.1.1 环氧化物在有机化学合成中的应用 | 第13页 |
| 1.1.2 环氧化大豆油在食品包装中的应用 | 第13-14页 |
| 1.2 环氧化物的制备 | 第14-15页 |
| 1.2.1 单加氧酶制备环氧化物 | 第14页 |
| 1.2.2 卤代过氧化物酶制备环氧化物 | 第14-15页 |
| 1.2.3 脂肪酶制备环氧化物 | 第15页 |
| 1.3 脂肪酶简介 | 第15-16页 |
| 1.4 脂肪酶结构与催化机理 | 第16-19页 |
| 1.4.1 脂肪酶的结构特点 | 第16-17页 |
| 1.4.2 脂肪酶催化水解反应的机理 | 第17-19页 |
| 1.5 脂肪酶催化环氧化反应的机理 | 第19-21页 |
| 1.5.1 酰酶复合物机理 | 第19-20页 |
| 1.5.2 其他反应机理 | 第20-21页 |
| 1.6 卡门柏青霉菌脂肪酶 | 第21页 |
| 1.7 本课题研究的意义和主要内容 | 第21-24页 |
| 1.7.1 本课题研究的意义 | 第21-22页 |
| 1.7.2 本课题研究的主要内容 | 第22-24页 |
| 第二章 脂肪酶PCL及其突变体的克隆表达与纯化 | 第24-37页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 材料和仪器 | 第24-26页 |
| 2.2.1 菌株与载体 | 第24页 |
| 2.2.2 试剂 | 第24-25页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第25页 |
| 2.2.4 溶液配制 | 第25-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-33页 |
| 2.3.1 脂肪酶PCL基因序列的分析与合成 | 第26-27页 |
| 2.3.2 突变位点选取和引物设计 | 第27页 |
| 2.3.3 构建pGAPZαA-pcl载体 | 第27-29页 |
| 2.3.4 脂肪酶pcl基因的定点突变 | 第29-31页 |
| 2.3.5 脂肪酶PCL及其突变体的表达 | 第31-32页 |
| 2.3.6 脂肪酶PCL及其突变体蛋白的发酵表达与纯化 | 第32-33页 |
| 2.3.7 蛋白质浓度的测定 | 第33页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第33-35页 |
| 2.4.1 脂肪酶PCL基因序列的分析与合成 | 第33-34页 |
| 2.4.2 突变体引物设计 | 第34页 |
| 2.4.3 脂肪酶PCL及其突变体的表达与纯化 | 第34-35页 |
| 2.5 本章小结 | 第35-37页 |
| 第三章 脂肪酶PCL及其突变体催化烯烃环氧化反应的研究 | 第37-47页 |
| 3.1 引言 | 第37页 |
| 3.2 材料和仪器 | 第37-38页 |
| 3.2.1 主要材料与试剂 | 第37-38页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第38页 |
| 3.3 实验方法 | 第38-41页 |
| 3.3.1 脂肪酶PCL及其突变体催化油酸的环氧化反应 | 第38-39页 |
| 3.3.2 油酸及 9,10-环氧硬脂酸的组成分析 | 第39页 |
| 3.3.3 油酸环氧化反应的条件优化 | 第39页 |
| 3.3.4 脂肪酶PCL及其突变体催化 1-十八烯的环氧化反应 | 第39-40页 |
| 3.3.5 1-十八烯及 1,2-环氧十八烷的组成分析 | 第40页 |
| 3.3.6 1-十八烯环氧化反应的条件优化 | 第40页 |
| 3.3.7 电喷雾电离质谱（ESI-MS）检测过氧辛酸 | 第40-41页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第41-46页 |
| 3.4.1 脂肪酶PCL及其突变体催化油酸的环氧化反应 | 第41页 |
| 3.4.2 油酸环氧化反应的条件优化 | 第41-42页 |
| 3.4.3 脂肪酶PCL及其突变体催化 1-十八烯的环氧化反应 | 第42-43页 |
| 3.4.4 1-十八烯环氧化反应的条件优化 | 第43-44页 |
| 3.4.5 电喷雾电离质谱检测过氧辛酸 | 第44-46页 |
| 3.5 本章小结 | 第46-47页 |
| 第四章 脂肪酶PCL的结构生物学研究 | 第47-54页 |
| 4.1 引言 | 第47页 |
| 4.2 试剂与仪器 | 第47页 |
| 4.3 实验方法 | 第47-49页 |
| 4.3.1 脂肪酶PCL的凝胶排阻层析纯化 | 第47-48页 |
| 4.3.2 蛋白质浓度的测定 | 第48页 |
| 4.3.3 脂肪酶PCL结晶条件筛选和优化 | 第48-49页 |
| 4.3.4 脂肪酶PCL衍射数据的收集和处理 | 第49页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第49-52页 |
| 4.4.1 脂肪酶PCL的凝胶排阻层析纯化 | 第49页 |
| 4.4.2 脂肪酶PCL的结晶条件筛选与优化 | 第49-51页 |
| 4.4.3 脂肪酶PCL的晶体结构信息 | 第51-52页 |
| 4.4.4 脂肪酶PCL的结构 | 第52页 |
| 4.5 本章小结 | 第52-54页 |
| 第五章 脂肪酶PCL催化烯烃环氧化机理的研究 | 第54-63页 |
| 5.1 引言 | 第54页 |
| 5.2 脂肪酶PCL及其突变体的环氧化活力比较 | 第54-55页 |
| 5.3 PH值对脂肪酶PCL及其突变体环氧化活力的影响 | 第55-56页 |
| 5.4 过氧化氢浓度对脂肪酶PCL及其突变体环氧化活力的影响 | 第56-57页 |
| 5.5 脂肪酶PCL与底物的分子对接 | 第57-58页 |
| 5.6 脂肪酶PCL催化环氧化反应新机理的提出 | 第58-59页 |
| 5.7 两个机理的协同作用 | 第59-61页 |
| 5.8 本章小结 | 第61-63页 |
| 结论与展望 | 第63-66页 |
| 结论 | 第63-65页 |
| 本研究的创新点 | 第65页 |
| 未来工作展望 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-73页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 附件 | 第76页 |
