中文摘要 | 第1-6页 |
Abstract | 第6-12页 |
第一章 引言 | 第12-32页 |
·缺氧诱导因子(HIF) | 第13-15页 |
·HIF-α的调控 | 第15-21页 |
·HIF-α转录水平调控 | 第15-16页 |
·HIF-α翻译水平调控 | 第16-18页 |
·HIF-α蛋白稳定性的调控一氧依赖型 | 第18-20页 |
·HIF-α蛋白稳定性的调控一非氧依赖型 | 第20-21页 |
·HIF的功能 | 第21-26页 |
·HIF调控的基因表达 | 第21-23页 |
·HIF与疾病 | 第23-25页 |
·HIF与发育 | 第25-26页 |
·HIF-3α研究进展 | 第26-29页 |
·HIF-3α的发现和结构 | 第26-27页 |
·HIF-3α的表达与调控 | 第27页 |
·HIF-3α的功能 | 第27-29页 |
·模式生物-斑马鱼 | 第29-30页 |
·立题依据和研究意义 | 第30-32页 |
第二章 斑马鱼Hif3α的克隆、表达和细胞定位 | 第32-68页 |
·引言 | 第32-33页 |
·材料和方法 | 第33-49页 |
·实验动物 | 第33页 |
·化学试剂和生物试剂 | 第33-34页 |
·实验仪器 | 第34页 |
·成鱼/胚胎缺氧处理 | 第34-35页 |
·RNA的提取 | 第35页 |
·RACE(Rapid-amplification of cDNA ends) | 第35-38页 |
·普通PCR和定量PCR | 第38-41页 |
·质粒构建 | 第41-42页 |
·细胞培养和转染 | 第42-43页 |
·HiG3α的亚细胞定位 | 第43页 |
·整胚原位杂交(Whole mnount in situ hybridization,WISH) | 第43-47页 |
·Western免疫印迹 | 第47-48页 |
·Blast和序列比对分析 | 第48页 |
·染色体共线性分析 | 第48页 |
·统进化分析 | 第48页 |
·统计分析 | 第48-49页 |
·结果 | 第49-64页 |
·Hif-3α的克隆和序列分析 | 第49-56页 |
·Hif-3α的结构特征 | 第56-59页 |
·Hif-3ct的时空表达 | 第59-61页 |
·Hif-3α的缺氧应答 | 第61-63页 |
·Hif-3α是核蛋白 | 第63-64页 |
·讨论 | 第64-68页 |
第三章 斑马鱼Hif-3α是转录因子 | 第68-91页 |
·引言 | 第68-69页 |
·材料和方法 | 第69-75页 |
·实验动物 | 第69页 |
·缺氧处理 | 第69页 |
·仪器和试剂 | 第69-70页 |
·RNA提取和反转录合成cDNA | 第70页 |
·质粒构建 | 第70-71页 |
·突变体构建 | 第71-72页 |
·显微注射 | 第72-73页 |
·荧光素酶活性检测 | 第73-74页 |
·细胞培养和转染 | 第74页 |
·定量RT-PCR | 第74页 |
·Western免疫印迹 | 第74-75页 |
·统计分析 | 第75页 |
·结果 | 第75-88页 |
·Hif-3α在细胞系中具有转录活性 | 第75-76页 |
·Hif-3α转录活性不依赖/影响Hif-1α | 第76-78页 |
·Hif-3α蛋白稳定性的调控 | 第78-82页 |
·Hif-3α在体内具有转录活性 | 第82-84页 |
·氧通过Hif-3α调控基因表达 | 第84-88页 |
·讨论 | 第88-91页 |
第四章 斑马鱼Hif-3α-513的表达和功能 | 第91-109页 |
·引言 | 第91-92页 |
·材料和方法 | 第92-96页 |
·实验动物 | 第92页 |
·氧处理 | 第92页 |
·仪器和试剂 | 第92页 |
·RNA提取和反转录合成cDNA | 第92页 |
·质粒构建 | 第92-93页 |
·突变体构建 | 第93页 |
·显微注射 | 第93-94页 |
·表型统计 | 第94页 |
·整胚原位杂交 | 第94页 |
·双荧光素酶活性检测 | 第94-95页 |
·细胞培养和转染 | 第95页 |
·亚细胞定位 | 第95页 |
·定量RT—PCR | 第95页 |
·Western免疫印迹 | 第95-96页 |
·统计分析 | 第96页 |
·结果 | 第96-107页 |
·Hif-3α-513克隆和结构分析 | 第96-97页 |
·Hif-3α-513时空表达分析 | 第97-98页 |
·Hif-3α-513表达不受氧气调控 | 第98-100页 |
·Hif-3α-513是核蛋白并具有转录活性 | 第100-101页 |
·Hif-3α-513结构域功能分析 | 第101-103页 |
·Hif-3α-513 功能分析 | 第103-107页 |
·讨论 | 第107-109页 |
总结 | 第109-112页 |
展望 | 第112-114页 |
参考文献 | 第114-126页 |
缩略词 | 第126-128页 |
致谢 | 第128-129页 |
个人简历 | 第129-130页 |
博士期间发表与撰写的文章 | 第130页 |