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斑马鱼缺氧诱导因子-3α的克隆、表达和功能研究

中文摘要第1-6页
Abstract第6-12页
第一章 引言第12-32页
   ·缺氧诱导因子(HIF)第13-15页
   ·HIF-α的调控第15-21页
     ·HIF-α转录水平调控第15-16页
     ·HIF-α翻译水平调控第16-18页
     ·HIF-α蛋白稳定性的调控一氧依赖型第18-20页
     ·HIF-α蛋白稳定性的调控一非氧依赖型第20-21页
   ·HIF的功能第21-26页
     ·HIF调控的基因表达第21-23页
     ·HIF与疾病第23-25页
     ·HIF与发育第25-26页
   ·HIF-3α研究进展第26-29页
     ·HIF-3α的发现和结构第26-27页
     ·HIF-3α的表达与调控第27页
     ·HIF-3α的功能第27-29页
   ·模式生物-斑马鱼第29-30页
   ·立题依据和研究意义第30-32页
第二章 斑马鱼Hif3α的克隆、表达和细胞定位第32-68页
   ·引言第32-33页
   ·材料和方法第33-49页
     ·实验动物第33页
     ·化学试剂和生物试剂第33-34页
     ·实验仪器第34页
     ·成鱼/胚胎缺氧处理第34-35页
     ·RNA的提取第35页
     ·RACE(Rapid-amplification of cDNA ends)第35-38页
     ·普通PCR和定量PCR第38-41页
     ·质粒构建第41-42页
     ·细胞培养和转染第42-43页
     ·HiG3α的亚细胞定位第43页
     ·整胚原位杂交(Whole mnount in situ hybridization,WISH)第43-47页
     ·Western免疫印迹第47-48页
     ·Blast和序列比对分析第48页
     ·染色体共线性分析第48页
     ·统进化分析第48页
     ·统计分析第48-49页
   ·结果第49-64页
     ·Hif-3α的克隆和序列分析第49-56页
     ·Hif-3α的结构特征第56-59页
     ·Hif-3ct的时空表达第59-61页
     ·Hif-3α的缺氧应答第61-63页
     ·Hif-3α是核蛋白第63-64页
   ·讨论第64-68页
第三章 斑马鱼Hif-3α是转录因子第68-91页
   ·引言第68-69页
   ·材料和方法第69-75页
     ·实验动物第69页
     ·缺氧处理第69页
     ·仪器和试剂第69-70页
     ·RNA提取和反转录合成cDNA第70页
     ·质粒构建第70-71页
     ·突变体构建第71-72页
     ·显微注射第72-73页
     ·荧光素酶活性检测第73-74页
     ·细胞培养和转染第74页
     ·定量RT-PCR第74页
     ·Western免疫印迹第74-75页
     ·统计分析第75页
   ·结果第75-88页
     ·Hif-3α在细胞系中具有转录活性第75-76页
     ·Hif-3α转录活性不依赖/影响Hif-1α第76-78页
     ·Hif-3α蛋白稳定性的调控第78-82页
     ·Hif-3α在体内具有转录活性第82-84页
     ·氧通过Hif-3α调控基因表达第84-88页
   ·讨论第88-91页
第四章 斑马鱼Hif-3α-513的表达和功能第91-109页
   ·引言第91-92页
   ·材料和方法第92-96页
     ·实验动物第92页
     ·氧处理第92页
     ·仪器和试剂第92页
     ·RNA提取和反转录合成cDNA第92页
     ·质粒构建第92-93页
     ·突变体构建第93页
     ·显微注射第93-94页
     ·表型统计第94页
     ·整胚原位杂交第94页
     ·双荧光素酶活性检测第94-95页
     ·细胞培养和转染第95页
     ·亚细胞定位第95页
     ·定量RT—PCR第95页
     ·Western免疫印迹第95-96页
     ·统计分析第96页
   ·结果第96-107页
     ·Hif-3α-513克隆和结构分析第96-97页
     ·Hif-3α-513时空表达分析第97-98页
     ·Hif-3α-513表达不受氧气调控第98-100页
     ·Hif-3α-513是核蛋白并具有转录活性第100-101页
     ·Hif-3α-513结构域功能分析第101-103页
     ·Hif-3α-513 功能分析第103-107页
   ·讨论第107-109页
总结第109-112页
展望第112-114页
参考文献第114-126页
缩略词第126-128页
致谢第128-129页
个人简历第129-130页
博士期间发表与撰写的文章第130页

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