| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略表 | 第15-17页 |
| 第一章 引言 | 第17-29页 |
| 1.1 口蹄疫病毒 | 第17页 |
| 1.2 FMD的历史与分布 | 第17-18页 |
| 1.3 FMD在我国的流行现状 | 第18-19页 |
| 1.3.1 A型 | 第18页 |
| 1.3.2 Asia 1型 | 第18页 |
| 1.3.3 O型 | 第18-19页 |
| 1.4 FMDV基因组结构及其功能 | 第19-23页 |
| 1.4.1 FMDV非编码区的功能 | 第20-21页 |
| 1.4.2 FMDV结构蛋白的功能 | 第21页 |
| 1.4.3 FMDV非结构蛋白的功能 | 第21-23页 |
| 1.5 反向遗传学技术及其在RNA病毒中的应用 | 第23-26页 |
| 1.5.1 反向遗传学技术 | 第23页 |
| 1.5.2 反向遗传学技术在RNA病毒中的应用 | 第23-26页 |
| 1.5.3 RNA病毒反向遗传学技术的不足 | 第26页 |
| 1.6 3A与FMDV的宿主嗜性 | 第26-27页 |
| 1.7 研究内容和方法 | 第27-29页 |
| 第二章 两株不同来源的口蹄疫病毒的全基因组序列测定及其基因特征分析 | 第29-40页 |
| 2.1 材料 | 第29-32页 |
| 2.1.1 病毒样品 | 第29页 |
| 2.1.2 FMDV参考毒株 | 第29-30页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第30-31页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第31页 |
| 2.1.5 引物的设计与合成 | 第31-32页 |
| 2.2 方法 | 第32-34页 |
| 2.2.1 病毒RNA的提取 | 第32页 |
| 2.2.2 反转录 | 第32页 |
| 2.2.3 FMDV基因组全长扩增 | 第32-33页 |
| 2.2.4 PCR产物的纯化回收及序列测定 | 第33-34页 |
| 2.2.5 序列分析 | 第34页 |
| 2.3 结果 | 第34-36页 |
| 2.3.1 RT-PCR | 第34页 |
| 2.3.2 全基因组序列分析 | 第34-35页 |
| 2.3.3 序列比对分析 | 第35-36页 |
| 2.3.4 系统发生树分析 | 第36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-40页 |
| 第三章 两株口蹄疫病毒全长感染性cDNA克隆的构建 | 第40-58页 |
| 3.1 材料 | 第40-41页 |
| 3.1.1 病毒、质粒、细胞 | 第40页 |
| 3.1.2 试剂 | 第40-41页 |
| 3.1.3 实验动物 | 第41页 |
| 3.1.4 仪器设备 | 第41页 |
| 3.2 方法 | 第41-49页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第41-42页 |
| 3.2.2 全长cDNA克隆的构建 | 第42-47页 |
| 3.2.3 分子标签的引入 | 第47-48页 |
| 3.2.4 转染 | 第48页 |
| 3.2.5 重组病毒的RT-PCR鉴定及稳定性分析 | 第48页 |
| 3.2.6 间接免疫荧光检测 | 第48页 |
| 3.2.7 生长曲线分析 | 第48-49页 |
| 3.2.8 蚀斑形态分析 | 第49页 |
| 3.2.9 乳鼠毒价的测定 | 第49页 |
| 3.3 结果 | 第49-57页 |
| 3.3.1 FMDV全基因组序列的RT-PCR扩增 | 第49-50页 |
| 3.3.2 融合PCR扩增 | 第50页 |
| 3.3.3 重组质粒的酶切鉴定 | 第50-51页 |
| 3.3.4 分子标签的引入 | 第51-53页 |
| 3.3.5 重组质粒的序列测定 | 第53页 |
| 3.3.6 重组病毒的拯救 | 第53页 |
| 3.3.7 重组病毒的RT-PCR检测 | 第53-54页 |
| 3.3.8 重组病毒的遗传稳定性分析 | 第54-55页 |
| 3.3.9 间接免疫荧光检测 | 第55页 |
| 3.3.10 生长曲线分析 | 第55-56页 |
| 3.3.11 蚀斑表型分析 | 第56页 |
| 3.3.12 乳鼠致病力分析 | 第56-57页 |
| 3.4 讨论 | 第57-58页 |
| 第四章 FMDV 3A缺失突变体的构建及其生物学特性研究 | 第58-74页 |
| 4.1 材料 | 第59页 |
| 4.1.1 细胞和质粒 | 第59页 |
| 4.1.2 试剂 | 第59页 |
| 4.1.3 仪器设备 | 第59页 |
| 4.2 方法 | 第59-62页 |
| 4.2.1 引物设计 | 第59页 |
| 4.2.2 PCR扩增 | 第59-60页 |
| 4.2.3 PCR产物的纯化 | 第60页 |
| 4.2.4 融合PCR | 第60页 |
| 4.2.5 含3A缺失的FMDV全长cDNA的构建 | 第60-61页 |
| 4.2.6 转染 | 第61页 |
| 4.2.7 3A缺失突变体的RT-PCR鉴定及稳定性分析 | 第61页 |
| 4.2.8 间接免疫荧光检测 | 第61页 |
| 4.2.9 生长曲线分析 | 第61页 |
| 4.2.10 3A缺失突变体在不同细胞上的复制能力和蚀斑表型分析 | 第61页 |
| 4.2.11 荧光定量RT-PCR | 第61-62页 |
| 4.2.12 乳鼠致病性试验 | 第62页 |
| 4.3 结果 | 第62-72页 |
| 4.3.1 PCR扩增结果 | 第62-63页 |
| 4.3.2 融合PCR扩增 | 第63-64页 |
| 4.3.3 含3A缺失的FMDV全长cDNA的鉴定 | 第64-65页 |
| 4.3.4 3A缺失病毒的拯救 | 第65页 |
| 4.3.5 3A缺失病毒的RT-PCR检测 | 第65-66页 |
| 4.3.6 3A缺失病毒的遗传稳定性分析 | 第66页 |
| 4.3.7 间接免疫荧光检测 | 第66-68页 |
| 4.3.8 生长曲线分析 | 第68-69页 |
| 4.3.9 蚀斑表型分析 | 第69-70页 |
| 4.3.10 荧光定量RT-PCR分析 | 第70-72页 |
| 4.4 讨论 | 第72-74页 |
| 第五章 嵌合FMDV的构建及其生物学特征 | 第74-86页 |
| 5.1 材料 | 第74-75页 |
| 5.1.1 细胞和质粒 | 第74-75页 |
| 5.1.2 试剂 | 第75页 |
| 5.1.3 仪器设备 | 第75页 |
| 5.2 方法 | 第75-77页 |
| 5.2.1 引物设计 | 第75页 |
| 5.2.2 PCR扩增 | 第75页 |
| 5.2.3 PCR产物的纯化 | 第75页 |
| 5.2.4 融合PCR | 第75-76页 |
| 5.2.5 嵌合FMDV全长cDNA的构建 | 第76页 |
| 5.2.6 转染 | 第76-77页 |
| 5.2.7 嵌合的RT-PCR鉴定及稳定性分析 | 第77页 |
| 5.2.8 间接免疫荧光检测 | 第77页 |
| 5.2.9 生长曲线分析 | 第77页 |
| 5.2.10 嵌合在不同细胞上的复制能力和蚀斑表型分析 | 第77页 |
| 5.2.11 荧光定量RT-PCR | 第77页 |
| 5.3 结果 | 第77-84页 |
| 5.3.1 PCR扩增结果 | 第77-78页 |
| 5.3.2 融合PCR扩增 | 第78-79页 |
| 5.3.3 嵌合FMDV全长cDNA的鉴定 | 第79页 |
| 5.3.4 嵌合病毒的拯救 | 第79页 |
| 5.3.5 嵌合病毒的RT-PCR检测 | 第79-80页 |
| 5.3.6 嵌合病毒的遗传稳定性分析 | 第80页 |
| 5.3.7 间接免疫荧光检测 | 第80-81页 |
| 5.3.8 生长曲线分析 | 第81-82页 |
| 5.3.9 蚀斑表型分析 | 第82-84页 |
| 5.3.10 荧光定量RT-PCR分析 | 第84页 |
| 5.4 讨论 | 第84-86页 |
| 第六章 3A标记的FMDV的构建及其生物学特性分析 | 第86-98页 |
| 6.1 材料 | 第86-87页 |
| 6.1.1 细胞和质粒 | 第86-87页 |
| 6.1.2 试剂 | 第87页 |
| 6.1.3 仪器设备 | 第87页 |
| 6.2 方法 | 第87-90页 |
| 6.2.1 引物设计 | 第87页 |
| 6.2.2 PCR扩增 | 第87-88页 |
| 6.2.3 PCR产物的纯化 | 第88页 |
| 6.2.4 融合PCR | 第88页 |
| 6.2.5 3A标记的FMDV全长cDNA的构建 | 第88页 |
| 6.2.6 转染 | 第88页 |
| 6.2.7 3A标记病毒的RT-PCR鉴定及稳定性分析 | 第88-89页 |
| 6.2.8 间接免疫荧光检测 | 第89页 |
| 6.2.9 Western blot检测 | 第89页 |
| 6.2.10 生长曲线分析 | 第89-90页 |
| 6.2.11 3A标记病毒在不同细胞上的复制能力和蚀斑表型分析 | 第90页 |
| 6.3 结果 | 第90-97页 |
| 6.3.1 PCR扩增结果 | 第90页 |
| 6.3.2 融合PCR扩增 | 第90-91页 |
| 6.3.3 3A标记的FMDV全长cDNA的鉴定 | 第91页 |
| 6.3.4 3A标记病毒的拯救 | 第91-92页 |
| 6.3.5 3A标记病毒的RT-PCR检测 | 第92页 |
| 6.3.6 3A缺失病毒的遗传稳定性分析 | 第92页 |
| 6.3.7 间接免疫荧光检测 | 第92-94页 |
| 6.3.8 Western blot分析 | 第94页 |
| 6.3.9 生长曲线分析 | 第94-95页 |
| 6.3.10 蚀斑表型分析 | 第95-97页 |
| 6.4 讨论 | 第97-98页 |
| 第七章 FMDV 3B突变株的构建及其生物学特性分析 | 第98-109页 |
| 7.1 材料 | 第98-99页 |
| 7.1.1 细胞和质粒 | 第98页 |
| 7.1.2试剂 | 第98页 |
| 7.1.3 仪器设备 | 第98-99页 |
| 7.2 方法 | 第99-101页 |
| 7.2.1 引物设计 | 第99页 |
| 7.2.2 PCR扩增 | 第99页 |
| 7.2.3 PCR产物的纯化 | 第99页 |
| 7.2.4 融合PCR | 第99页 |
| 7.2.5 PCR扩增 | 第99-100页 |
| 7.2.6 融合PCR | 第100页 |
| 7.2.7 3B突变体FMDV全长cDNA的构建 | 第100页 |
| 7.2.8 转染 | 第100-101页 |
| 7.2.9 3B突变体病毒的RT-PCR鉴定及稳定性分析 | 第101页 |
| 7.2.10 间接免疫荧光检测 | 第101页 |
| 7.2.11 Western blot检测 | 第101页 |
| 7.2.12 生长曲线分析 | 第101页 |
| 7.2.13 3B突变体病毒在不同细胞上的复制能力和蚀斑表型分析 | 第101页 |
| 7.3 结果 | 第101-107页 |
| 7.3.1 PCR扩增结果 | 第101页 |
| 7.3.2 融合PCR扩增 | 第101-103页 |
| 7.3.3 3B突变体FMDV全长cDNA的鉴定 | 第103页 |
| 7.3.4 3B突变体病毒的拯救 | 第103页 |
| 7.3.5 3B突变体病毒的RT-PCR检测 | 第103页 |
| 7.3.6 3B突变体病毒的遗传稳定性分析 | 第103-104页 |
| 7.3.7 间接免疫荧光检测 | 第104页 |
| 7.3.8 Western blot分析 | 第104-106页 |
| 7.3.9 生长曲线分析 | 第106-107页 |
| 7.3.10 蚀斑表型分析 | 第107页 |
| 7.4 讨论 | 第107-109页 |
| 第八章 全文结论 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-121页 |
| 附录 | 第121-129页 |
| 致谢 | 第129-130页 |
| 作者简介 | 第130页 |
