| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-21页 |
| 1.1 低温微生物研究 | 第11-14页 |
| 1.1.1 低温微生物概述 | 第11-12页 |
| 1.1.2 低温微生物多样性 | 第12-13页 |
| 1.1.3 低温微生物适冷机制 | 第13-14页 |
| 1.2 低温酶类的研究 | 第14-16页 |
| 1.2.1 低温酶概述 | 第14页 |
| 1.2.2 低温酶特性 | 第14-15页 |
| 1.2.3 低温酶类多样性 | 第15-16页 |
| 1.3 脂肪酶与低温脂肪酶研究 | 第16-19页 |
| 1.3.1 脂肪酶概述 | 第16页 |
| 1.3.2 低温脂肪酶特性 | 第16-19页 |
| 1.3.3 低温脂肪酶应用 | 第19页 |
| 1.4 本论文选题依据及研究内容 | 第19-21页 |
| 1.4.1 本论文选题依据 | 第19-20页 |
| 1.4.2 本论文研究内容 | 第20-21页 |
| 2 低温脂肪酶菌株筛选以及菌种鉴定 | 第21-34页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第21-22页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第22-23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-28页 |
| 2.3.1 菌株筛选 | 第23-24页 |
| 2.3.2 16S rDNA基因的PCR扩增及全序列分析 | 第24-27页 |
| 2.3.3 系统发育树构建 | 第27页 |
| 2.3.4 革兰氏染色 | 第27-28页 |
| 2.3.5 菌生长株最适温度测定 | 第28页 |
| 2.4 实验结果 | 第28-32页 |
| 2.4.1 菌株筛选结果 | 第28-29页 |
| 2.4.2 16S rDNA基因的PCR扩增及序列分析(附录B-I) | 第29-30页 |
| 2.4.3 系统发育树构建 | 第30-31页 |
| 2.4.4 革兰氏染色结果 | 第31-32页 |
| 2.4.5 菌株生长最适温度测定结果 | 第32页 |
| 2.5 讨论 | 第32-33页 |
| 2.6 小结 | 第33-34页 |
| 3 脂肪酶分离纯化与酶学性质研究 | 第34-52页 |
| 3.1 引言 | 第34页 |
| 3.2 实验材料 | 第34-36页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第34-35页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第35-36页 |
| 3.3 实验方法 | 第36-42页 |
| 3.3.1 Lip ZC12硫酸铵分级盐析 | 第36-37页 |
| 3.3.2 Lip ZC12分离纯化 | 第37-38页 |
| 3.3.3 蛋白含量测定 | 第38-39页 |
| 3.3.4 SDS-PAGE测定脂肪酶分子量 | 第39-41页 |
| 3.3.5 LC-MS-MS质谱鉴定 | 第41页 |
| 3.3.6 Lip ZC12酶学性质研究 | 第41-42页 |
| 3.3.7 Lip ZC12动力学K_m、k_(cat)测定 | 第42页 |
| 3.4 实验结果 | 第42-50页 |
| 3.4.1 Lip ZC12硫酸铵分级盐析结果 | 第42-43页 |
| 3.4.2 Lip ZC12 Phenyl Sepharose FF疏水层析分离结果 | 第43-44页 |
| 3.4.3 SDS-PAGE检测蛋白分子量结果 | 第44-45页 |
| 3.4.4 LC-MS-MS质谱结果(附录C-I) | 第45页 |
| 3.4.5 Lip ZC12酶学性质研究结果 | 第45-49页 |
| 3.4.6 Lip ZC12的K_m、k_(cat)测定结果 | 第49-50页 |
| 3.5 讨论 | 第50-51页 |
| 3.6 小结 | 第51-52页 |
| 4 脂肪酶基因克隆 | 第52-63页 |
| 4.1 引言 | 第52页 |
| 4.2 实验材料、试剂和仪器 | 第52-53页 |
| 4.2.1 实验仪器 | 第52-53页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第53页 |
| 4.3 实验方法 | 第53-57页 |
| 4.3.1 Lip ZC12活性中心确定 | 第53-55页 |
| 4.3.2 Lip ZC12基因克隆 | 第55-57页 |
| 4.4 实验结果 | 第57-61页 |
| 4.4.1 Lip ZC12保守序列PCR扩增结果(附录D-Ⅰ) | 第57-58页 |
| 4.4.2 Lip ZC12全基因PCR扩增结果(附录D-Ⅱ) | 第58-61页 |
| 4.5 讨论 | 第61页 |
| 4.6 小结 | 第61-63页 |
| 结论与展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 附录A 缩略语表及名称说明 | 第69-70页 |
| 附录B-Ⅰ Psychrobacter sp.ZY21416S rDNA测序结果 | 第70-73页 |
| 附录C-Ⅰ LC-MS-MS肽指纹图谱序列比对检测结果 | 第73-74页 |
| 附录D-Ⅰ Lip ZC12保守序列测序结果 | 第74-75页 |
| 附录D-Ⅱ Lip ZC12全基因测序结果 | 第75-77页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
