| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第10-21页 |
| 1.1 植物UDP-糖基转移酶的研究进展 | 第10-13页 |
| 1.1.1 植物小分子化合物糖苷化 | 第10-11页 |
| 1.1.2 UGT的分类和命名 | 第11-12页 |
| 1.1.3 UGT的结构 | 第12-13页 |
| 1.2 甜菊糖苷糖基转移酶研究进展 | 第13-19页 |
| 1.2.1 甜菊糖苷类化合物 | 第13-16页 |
| 1.2.2 甜菊糖苷的生物合成途径 | 第16-19页 |
| 1.3 本研究主要内容 | 第19页 |
| 1.3.1 基于转录组数据的生物信息分析 | 第19页 |
| 1.3.2 目的UGT的克隆、表达和酶活性测定 | 第19页 |
| 1.3.3 酶活性研究 | 第19页 |
| 1.3.4 细胞工厂构建 | 第19页 |
| 1.3.5 活性UGT序列分析 | 第19页 |
| 1.4 研究意义 | 第19-20页 |
| 1.5 技术路线 | 第20-21页 |
| 2 材料和方法 | 第21-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第21页 |
| 2.2 实验仪器和试剂 | 第21-23页 |
| 2.2.1 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.2.2 主要试剂的配方 | 第22-23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-29页 |
| 2.3.1 生物信息学分析方法 | 第23页 |
| 2.3.2 植物叶片cDNA的制备 | 第23页 |
| 2.3.3 UGT基因克隆和表达载体构建 | 第23-24页 |
| 2.3.4 重组UGT基因表达分析 | 第24页 |
| 2.3.5 重组酶功能鉴定 | 第24-25页 |
| 2.3.6 RsUGT41和RsUGT25酶学研究 | 第25-27页 |
| 2.3.7 大肠杆菌从头合成甜茶素细胞工厂构建 | 第27-29页 |
| 3 甜叶悬钩子UGT挖掘 | 第29-52页 |
| 3.1 甜叶悬钩子生物信息分析 | 第29-31页 |
| 3.2 甜叶悬钩子UGT的克隆与表达 | 第31-39页 |
| 3.2.1 甜叶悬钩子UGT全长克隆 | 第31-38页 |
| 3.2.2 甜叶悬钩子UGT表达产物的SDS-PAGE分析 | 第38-39页 |
| 3.3 重组甜叶悬钩子UGT转化产物分析 | 第39-52页 |
| 3.3.1 重组酶催化活性测定 | 第39-42页 |
| 3.3.2 RsUGT41、RsUGT25的酶活性研究 | 第42-49页 |
| 3.3.3 细胞工厂构建 | 第49-52页 |
| 4 明日叶UGT挖掘 | 第52-59页 |
| 4.1 明日叶生物信息分析 | 第52-53页 |
| 4.2 AkUGT表达载体构建与鉴定 | 第53-57页 |
| 4.3 表达产物的SDS-PAGE分析 | 第57页 |
| 4.4 重组UGT转化产物分析 | 第57-59页 |
| 5 甜叶悬钩子、明日叶活性UGT分析 | 第59-67页 |
| 5.1 序列功能域分析 | 第59-61页 |
| 5.2 序列进化分析 | 第61-63页 |
| 5.3 序列理化性质分析 | 第63-64页 |
| 5.4 序列一致性分析 | 第64页 |
| 5.5 蛋白亚细胞定位 | 第64-65页 |
| 5.6 蛋白三维结构预测 | 第65-67页 |
| 6 讨论 | 第67-70页 |
| 6.1 甜叶悬钩子、明日叶UGT生物信息学分析 | 第67页 |
| 6.1.1 甜叶悬钩子的UGT基因家族 | 第67页 |
| 6.1.2 明日叶UGT生物信息学分析 | 第67页 |
| 6.2 甜叶悬钩子、明日叶UGT的原核表达 | 第67-68页 |
| 6.3 甜叶悬钩子、明日叶UGT催化特性分析 | 第68-69页 |
| 6.4 RsUGT41酶动力学测试 | 第69-70页 |
| 7 结论 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 附录 | 第78页 |
